EDTA－K2致血小板溶解1例

方美丹 孙 刚 叶一冰

（浙江省台州医院，浙江临海 317000）

·病例报告·

EDTA－K2致血小板溶解1例

方美丹 孙 刚 叶一冰

（浙江省台州医院，浙江临海 317000）

EDTA－K2是临床广泛应用的抗凝剂，但EDTA可使少数人的血小板发生聚集导致血细胞分析仪计数的血小板偏低，称为EDTA依赖性假性血小板减少症［1－2］，目前已有多篇文献报道，而由于EDTA诱导血小板溶解致使血小板减少鲜有报道。作者于2013年9月发现1例EDTA溶解血小板的患者，随着标本放置时间的延长，血小板从聚集至完全溶解，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 体检者，男，工人，52岁，血小板9×109／L，白细胞7.6×109／L，红细胞4.12× 1012／L，血红蛋白141g／L，其血小板直方图降支呈波浪形漂移状并有血小板聚集报警信息显示（PLT Clumps）。经推片复查和手工计数，初步判断疑似血小板聚集并溶解。辅助检查结果和临床资料如下：生化、免疫及影像学等检查均无异常，无浅表皮肤及黏膜出血点，近期无血小板减少等其它相关病史，近期无用药史，临床无相关症状及体征。

1.2 仪器与试剂 Sysmex XE－2100血液分析仪和SP－1000i自动推片机及配套试剂购于Sysmex公司，利用校准品和质控品对其校准和质量控制，严格按仪器操作规程进行操作。Lecia显微镜购于南京高清智能有限公司，XB－K－25型血球计数板由上海安信光学仪器制造有限公司生产，EDTA－K2和枸橼酸钠抗凝管分别购于浙江拱东医疗科技有限公司和英国BD公司。

1.3 方法 应用Sysmex XE－2100全自动血液分析仪分别对EDTA抗凝血和枸橼酸钠抗凝血进行血小板计数并同时运用手工法进行血小板计数。采集静脉血2 mL和2.7 mL分别放入3.0 mg的EDTA－K2和0.3 mL枸橼酸钠（109 mmol／L）的试管中，同时采集左手无名指末梢血进行手工推片镜检和血小板计数。在采血后0、10、30分钟，1、2、3小时应用Sysmex XE－2100全自动血液分析仪对EDTA抗凝血和枸橼酸钠抗凝血分别进行检测，同步使用SP－1000i自动推片机制作血涂片，以观察血小板形态和评估数量，在上述各时间点使用枸橼酸钠抗凝血进行血小板手工计数，手工计数血小板严格按《全国检验技术操作规程（第3版）》［3］进行操作，同时设置无EDTA依赖性假性血小板减少的正常标本1例为对照组，并在相应的时间点制作血涂片，观察血小板分布及形态以排除环境及放置时间可能对血小板聚集和溶解产生影响。本文中的标本检测及储存的环境温度均在室温下进行，以排除温度对标本可能产生的影响。

2 结 果

2.1 血小板计数结果 在3小时内Sysmex XE－2100血液分析仪检测EDTA抗凝标本随着时间延长，血小板数量逐渐减少；而Sysmex XE－2100血液分析仪检测枸橼酸钠标本和手工计数检测结果无明显变化；3种新鲜血液检测的血小板数量基本一致，对照者的EDTA抗凝血的血小板在3小时内无明显改变。详见表1。

表1 不同抗凝条件下血小板的计数结果（×109／L）

2.2 血小板直方图信息 EDTA抗凝血放置30分钟后Sysmex XE－2100的血小板直方图降支呈波浪形漂移状并有血小板聚集报警信息显示（图1a），而对照者未见明显异常（图1b）。

图1 Sysmex XE－2100检测体检者和对照者的血小板直方图信息

2.3 不同时间点EDTA抗凝血血涂片结果 新鲜血液血涂片中血小板散在分布，形态正常；10分钟时可见几个血小板聚集，形态基本正常；30分钟血小板出现较强程度凝集，常见几十至上百个凝集在一起，形态无明显异常；1小时时可见聚集的血小板开始溶解，形态出现明显异常，但血小板颗粒尚清晰可见；2小时聚集的血小板溶解程度进一步加剧，形态难以辨认；3小时聚集的血小板基本溶解完全，形态模糊不清，几乎无法识别。详见封三彩图1。由此可知，随着EDTA抗凝血标本放置时间逐渐延长，血小板从少量聚集到大量聚集，然后从部分溶解至完全溶解，整个过程大约需3小时。对照组各时间点的血小板血涂片中血小板散在分布，形态正常，无聚集、溶解现象发生。

3 讨 论

EDTA依赖性假性血小板减少是由于抗凝血中EDTA诱导血小板中的特殊蛋白使血小板发生聚集，且在全自动血液分析仪上检测时，其血小板发生聚集、堆积现象，使仪器不能确认血小板而发生假性血小板计数减少［4－5］。但通过及时的手工计数可纠正仪器检测误差。目前尚未有EDTA致血小板溶解进而引起血液分析仪检测血小板减少的报道，并且该种血小板溶解导致计数减少无法通过手工计数进行校正，更易导致临床误诊误治。因此，深入探讨EDTA致使血小板减少的机制，分享临床工作针对性处理方法以确保检验报告准确无误，从而为临床正确诊治提供坚实的基础。

EDTA依赖性假性血小板减少症机制目前尚不明确，可能与EDTA诱导血小板膜隐匿性抗原构象改变，使该隐匿性抗原成为暴露性抗原有关。某些抗体与暴露的抗原结合，从而激活血小板膜中的磷酸脂酶，使其水解并释放花生四烯酸（AA）、ADP、5－TH、胶原、凝血酶原、内源性钙离子等活性物质。血小板膜糖蛋白GPⅠb与胶原产生粘附作用，同时PAF、ADP、TXA2等激活剂分别与粘附的血小板表面的相应受体结合，通过G蛋白介导作用使血小板膜糖蛋白GPⅡb／Ⅲa复合物（αⅡbβ）激活。活化的GPⅡb／Ⅲa是血小板膜上的纤维蛋白受体，纤维蛋白原作为二聚体可与两个相邻的血小板膜上GPⅡb／Ⅲa结合，产生“搭桥”作用，使血小板聚集。聚集的血小板进一步引起结构变化，并表达“配体”诱导的结合部位通过信号传导，引起血小板细胞骨架蛋白的再构筑，导致血小板扁平和伸展等变形改变，最终引起血小板溶解［6－8］。另外，EDTA溶液的pH与盐类和标本放置温度也是导致血小板溶解的可能原因之一，如果标本放置温度较高可导致pH降低和EDTA盐浓度增高，低pH和高EDTA盐浓度可引起血小板肿胀、崩解，从而引起血小板溶解。而枸橼酸钠对血小板体积及其他凝血因子影响较小，基本不影响血小板计数和形态。收集更多样本检测pH值、EDTA盐浓度、GPⅠb、GPⅡb／Ⅲa及相关蛋白和细胞因子进行统计分析，找出EDTA致部分患者的血小板溶解具体机制是本研究下一步努力的方向之一。

在一定时间内，Sysmex XE－2100血液分析仪检测EDTA抗凝标本血小板与放置时间有关，而枸橼酸钠抗凝标本与放置时间无关，这与文献报道相似［9］。本病例血小板出现聚集的时间并影响计数约在标本采集后10分钟，血小板溶解的时间约在标本采集后30分钟至1小时之间，因此，及时的检测标本可以有效地避免EDTA致血小板溶解的计数误差；另外，尽早显微镜复检也可以避免因血小板溶解而导致的形态难以辨认的问题。此类EDTA抗凝血标本的血小板在手工计数时镜下观察到的血小板也是成堆、成团甚至溶解造成计数困难，建议对于此类标本均需推片染色显微镜复查，且不能仅观察体尾交接处，需认真观察全片尤其注重片尾寻找可以聚集或溶解点，然后重新现场复查血常规和血细胞手工计数，发现溶解时，需重新采集枸橼酸钠抗凝血进行复查。

［1］ 张辉，李亚伟，李柄芝．加强对乙二胺四乙酸依赖性血小板减少症的认识及对策．检验医学与临床，2008，5（5）：316

［2］Oneyama A，Nakahara K．EDTA－dependent pseudothrombocytopeniadifferentiation from true thrombocytopenia．Nippon Rinsho，2003，61（4）：569

［3］ 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程．3版，南京：东南大学出版社，2006：136

［4］ 鲁家才，程正江，姚欣．两种药物对EDTA依赖性血小板聚集的抑制作用．临床检验杂志，2004，22（3）：198

［5］ 周小棉，赖金甜，张伟红，等．丁胺卡那霉素对EDTA依赖性聚集血小板的解离及其机制．临床检验杂志，2008，26（6）：429

［6］Bragnanig，Bianconcinig，Brognar，et al．Pseudothrombocytopenia．Clinicalcommendon37cases．MinervaMed，2001，92：13

［7］ 李明，鲁家才，王超，等．乙二胺四乙酸盐依赖性血小板聚集形成原因初探．现代中西医结合杂志，2004，13（11）：1467

［8］ 王鸿利．血液学和血液学检验．2版．北京：人民卫生出版社，1999：230

［9］ 张建萍．EDTA依赖性假性血小板减少症及检测方法分析．重庆医学，2010，39（20）：2782