HPLC法测定维药神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸

2014-04-12帕丽达阿不力孜阿提坎木瓦合甫丛媛媛米仁沙牙库甫李新霞热娜卡斯木

中成药 2014年12期

关键词：齐墩荆芥果酸

帕丽达·阿不力孜, 阿提坎木·瓦合甫, 丛媛媛, 米仁沙·牙库甫, 李新霞, 热娜·卡斯木

（新疆医科大学药学院, 新疆乌鲁木齐 830011）

HPLC法测定维药神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸

帕丽达·阿不力孜, 阿提坎木·瓦合甫, 丛媛媛, 米仁沙·牙库甫, 李新霞, 热娜·卡斯木*

（新疆医科大学药学院, 新疆乌鲁木齐 830011）

目的建立维药神香草及习用品大苞荆芥中主要活性成分齐墩果酸和熊果酸定量测定方法。方法采用 HPLC法，色谱柱为 YMC-ODS-A C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）; 流动相为甲醇 -0.05 mol/L乙酸铵（85 ∶15），体积流量1.0 mL/min; 检测波长 210 nm; 柱温 45 ℃。结果神香草中熊果酸与齐墩果酸在 80 ～480 μg（r=0.999 7）、 3.5 ～51.8 μg（r=0.999 5）范围内，大苞荆芥中在 5 ～100 μg（r=0.999 7）、 2 ～64 μg（r=0.999 8）范围内两者均有良好的线性关系，平均回收率与 RSD均符合要求。结论该方法简单、快捷、准确可靠，可为神香草及混淆品药材的质量控制提供依据。

神香草;大苞荆芥;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法

维药神香草为唇形科植物硬尖神香草 Hyssopus cuspidatus Boriss.的干燥地上部分，分布于我国新疆北部、前苏联、蒙古［1-2］。在我国新疆地区神香草作为维吾尔族民间习用草药，维吾尔语名为“祖发”，被维医广泛用于治疗咳嗽、气喘、支气管炎、外伤和风湿等症［3］。具有清除异常黏液质、温肺平喘、祛寒止咳、燥湿祛痰、发汗解毒、消炎退肿的功能［4］，主治湿寒性和黏液质性呼吸器官疾病，如寒性哮喘、咳嗽感冒、湿性痰多、胸膜炎、气管炎、肺炎及水肿等病［5-9］。全草含有黄酮类、三萜类、烷烃类、甾体类和挥发油等成分［10-13］。维药市场上有时由于神香草货源短缺，于是出现了其混淆品，主要为大苞荆芥。大苞荆芥为唇形科植物大苞荆芥 Nepeta bracteata Benth.的干燥全草，维吾尔语名也称 “祖发”，为新疆维吾尔医院的一种进口药材，具有镇咳平喘、清热利湿的作用，用于治疗气管炎症见咳嗽气喘、感冒发烧、小便不利［14］。由于 2 种药材维语名称相同，极易引起混用。但两者是同科不同属植物，而且化学成分和药性各不相同。为确保临床用药安全、有效，本实验建立了同时测定神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸的 HPLC方法。研究结果将为神香草及混淆品大苞荆芥药材的鉴定质量评价提供科学依据。

1 仪器与试药

日本岛津 LC-20AB高效液相色谱仪， SPD-20A紫外双波长检测器;KQ-700DE型数控超声波清洗器（昆明市超声仪器有限公司）; 梅特勒AL104 电子分析天平。

神香草药材采自新疆阿勒泰地区，大苞荆芥购自新疆维吾尔医医院，由新疆农业大学林学院王兵教授鉴定，均为唇形科植物硬尖神香草 Hyssopuscuspidatus Boriss. 和大苞荆芥 Nepeta bracteata Benth.。齐墩果酸（批号 110709-201206），熊果酸（批号 110742-201220）购自中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈均为色谱纯（SIGMA-ALDRICH）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 YMC-ODS-A C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），柱温 45 ℃; 流动相为甲醇-0.05 mol/L乙酸铵（ 85 ∶15），体积流量 1.0 mL/min; 检测波长 210 nm; 进样体积 20 μL。

2.2 对照品混合溶液的制备分别精密称取齐墩果酸对照品13.31mg与熊果酸对照品15.1mg，置同一10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得齐墩果酸与熊果酸对照品混合贮备液。

2.3 供试品溶液的制备分别精密称取神香草药材粉末0.3 g（过 30 目筛）（编号 HcB1），大苞荆芥 0.5 g（过30 目筛）（编号 NbB1），分别置于具塞锥形瓶中，各自加入15 m L甲醇，称定质量，超声（700 W， 40 kHz）提取 20 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀， 0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系试验神香草: 精密量取 “2.2”项下对照品混合贮备液 0.8、1.2、 1.8、 2.3、2.9、3.6 mL，分别置于 10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，即得到不同质量浓度的对照品混合溶液。大苞荆芥: 精密量取 “2.2” 项下对照品贮备液 0.04、0.08、 0.2、0.3、 0.8mL分别置于10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，即得不同质量浓度的对照品混合溶液。分别精密吸取上述两种药材不同质量浓度的对照品混合溶液各 20 μL，按照上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以对照品齐墩果酸与熊果酸的质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归分析，得神香草药材齐墩果酸与熊果酸回归方程分别为 Y= 13 500 874.491 7X+647 559.091 4 （r=0.999 5），Y=8 856 200X+658 719.33 （r=0.999 7），线性范围为 3.5 ～51.8 μg， 80 ～480 μg。大苞荆芥药材齐墩果酸与熊果酸回归方程分别为 Y= 28 667 780.890 8X+174 775.020 4 （r=0.999 8），Y=16 514 436.458 3X+472 226.432 3 （ r= 0.999 7），线性范围为 2 ～64 μg， 5 ～100 μg。

2.5 精密度试验分别精密取 “2.2” 项下制备的对照品混合溶液 20 μL，连续进样 6 次，分别测得峰面积值，计算出神香草齐墩果酸与熊果酸RSD分别为 2.2%和 2.7%; 大苞荆芥 RSD分别为2.6%和 2.4%，表明仪器性能良好。

2.6 重复性试验分别精密称取神香草（HcB1）与大苞荆芥（NbB5）同一样品 6 份，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，按 “2.1” 项色谱条件进行测定，结果神香草样品中齐墩果酸与熊果酸含有量均值为0.001 6%（ RSD为2.6%）和0.018 1%（RSD为 1.3%）; 大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸含有量均值为 0.000 4% （RSD为 3.5%）和0.000 2%（RSD为 3.3%）。

2.7 稳定性试验分别取同一神香草与大苞荆芥供试品溶液，分别于 0、 2、 6、8、 12、 24、 48 h进样测定，神香草 RSD分别为 1.6%和 2.4%; 大苞荆芥 RSD为 3.6%和 4.3%，结果表明该供试品溶液稳定性良好。

2.8 系统适用性试验精密量取神香草与大苞荆芥供试品溶液与对照品混合溶液各 20 μL，按上述色谱条件，分别进样，记录色谱图，结果见图1。齐墩果酸与熊果酸达到基线分离，分离度均大于1.5，两者理论塔板数都大于 8 000，拖尾因子小于 1.5。

2.9 加样回收试验分别精密称取已测知齐墩果酸与熊果酸剂量的样品神香草（HcB1）约 0.3 g，大苞荆芥（NbB5） 0.5 g共 3 份，按低、中、高质量浓度分别加入齐墩果酸与熊果酸对照品贮备液，按供试品溶液的制备方法及色谱条件项下操作，计算回收率，结果见表1和2。

表1 神香草加样回收试验结果Tab.1 Results of recovery tests for Hyssopus cuspidatus

图 1 溶剂空白（a），对照品（b），神香草供试品（c），大苞荆芥供试品（d）色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of blank solvet（ a）， reference substances（b）， Hyssopus cuspidatus（ c）， and Nepeta bracteata （ d）

表2 大苞荆芥加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery tests for Nepeta bracteata

2.10 样品测定取不同产地的神香草药材 0.3 g和大苞荆芥药材 0.5 g，按 “2.3” 项下的供试品溶液制备方法进行样品前处理，按 “2.1” 项色谱条件进样测定，按标准曲线法分别计算样品中齐墩果酸与熊果酸的量。结果见表3。

3 讨论

本实验建立了测定神香草与习用品大苞荆芥药材中齐墩果酸和熊果酸 HPLC方法，该方法操作简单，具有较好的重复性和稳定性。神香草药材中齐墩果酸平均总质量分数 0.103 3%，熊果酸的平均总质量分数 0.934 9%，习用品大苞荆芥中齐墩果酸平均总质量分数 0.015 6%和熊果酸的总质量分数 0.037 6%，结果显示神香草中齐墩果酸、熊果酸量高于大苞荆芥中齐墩果酸、熊果酸量。因此，可用于神香草及其习用品大苞荆芥药材的鉴定以及质量控制。

表3 样品测定结果Tab.3 Determ ination resu lts

本实验参考《中国药典》 2010 年版，考察了乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵（67 ∶12 ∶21）、甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265 ∶35 ∶0.1 ∶0.05）、甲醇-0.1mol/L乙酸铵（85 ∶15 ）以及甲醇-0.05 mol/L乙酸铵（85 ∶15 ）的流动相，结果以甲醇-0.05 mol/L乙酸铵（85 ∶15）时，神香草与大苞荆芥样品分离度和峰形都达到实验要求，出峰时间也比较适宜，为最佳色谱条件。

在提取溶剂中考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯对神香草和大苞荆芥中齐墩果酸和熊果酸的提取率，结果发现乙酸乙酯提取物中熊果酸与齐墩果酸量比甲醇、乙醇高，不过峰形差、分离度不好，因此选择了甲醇为提取溶剂。

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草: 维吾尔药卷［M］.上海: 上海科学技术出版社， 2005.

［ 2 ］中国科学院《中国植物志》编委会.中国植物志: 第 66卷［M］.北京: 科学出版社， 1977:243.

［3］卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准: 维吾尔药分册［S］.乌鲁木齐: 新疆科技卫生出版社， 1999.

［ 4 ］刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志: 上册［M］.乌鲁木齐: 新疆人民出版社， 1986.

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