肉豆蔻中总木脂素的提取工艺优化研究

2014-04-11袁子民贾天柱

中成药 2014年2期

关键词：脂素肉豆蔻丁香酚

袁子民，王静，胡娜，贾天柱，刘欢

（辽宁中医药大学，辽宁大连 116600）

肉豆蔻中总木脂素的提取工艺优化研究

袁子民，王静，胡娜，贾天柱*，刘欢

（辽宁中医药大学，辽宁大连 116600）

目的优选提取肉豆蔻总木脂素的最佳提取工艺。方法以肉豆蔻总木脂素提取量为评价指标结合正交试验，优化其提取工艺。结果分别采用 10 倍量和 8 倍量 90%乙醇为溶媒提取 2 次，每次 1.5 h。结论本工艺稳定，重复性良好，适合工业化大生产。

肉豆蔻；总木脂素；正交试验

肉豆蔻为临床常用中药，载于《中国药典》 2010 年版，为肉豆蔻科植物肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt.的干燥成熟种仁，具有行气、止泻等药理作用［1］。化学成分主要含有挥发油、脂肪油、木脂素和苯丙素等。其中木脂素类主要成分为肉豆蔻木脂素、去氢二异丁香酚、利卡啉-B等［2-4］，现代药理研究表明肉豆蔻总木脂素类成分可能具有抗氧化、保肝、抗炎、抗肿瘤等作用［5］。为对木脂素类成分的药理作用深入研究，本实验以肉豆蔻总木脂素提取量为评价指标，采用正交试验法，对其总木脂素提取工艺进行优化研究［6-8］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 U-3010 紫外可见分光光度计 ( 日本日立公司)；数显恒温水浴锅 (江苏省金坛市荣华仪器厂)；AR2140 型电子分析天平 (上海奥豪斯公司)。

1.2 试药肉豆蔻药材市售 (浙江中医药大学饮片厂，产地: 印度尼西亚，批号 090414)；去氢二异丁香酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号 11838-201102)；乙醇、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 提取工艺的正交试验设计由于肉豆蔻中木脂素类成分的脂溶性较强，因此本实验乙醇体积分数 (A)、溶媒用量 (B)、浸提次数 (C)、时间 (D) 四个因素、三个水平进行试验考察，采用 L9(34) 正交试验设计表 (见表 1)，实验结果见表2。

2.2 方法及工艺评价指标取肉豆蔻粉末 (过 20 目筛) 30.0 g，精密称定，共 9 份样品。按正交试验表 2 进行实验，合并各实验提取液，静置 24 h，滤过，滤液置 1 000 mL量瓶中，加相应乙醇体积分数提取溶剂稀释至刻度，摇匀，备用。以肉豆蔻总木脂素提取量为考察指标，结果列入表2。

表 1 L9（34）因素水平

表 2 L9（34）正交试验表设计及结果

2.3 总木脂素的测定方法

2.3.1 标准曲线的制备取去氢二异丁香酚对照品 15.0 mg，精密称定，置100m L量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为贮备液。分别精密量取贮备液 0.1、 0.2、0.3、 0.4、 0.5、 0.6 mL，置 10 mL量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇匀，制成每 1mL含去氢二异丁香酚为 1.5、 3.0、4.5、 6.0、 7.5、 9.0 μg/mL的标准液，以甲醇为空白，在275 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为 Y=0.090 5X+ 0.004 2(r=0.999 8)。结果去氢二异丁香酚浓度在 1.5 ～9.0 μg/mL范围内，线性关系良好。

2.3.2 供试品溶液制备取 “2.2” 项下 1 000 mL量瓶中的样品溶液，分别精密量取 1.0 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移置 100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 精密度试验取同一供试品溶液，于 275 nm处重复测定 6 次吸光度，结果精密度试验良好， RSD为 0.92%。

2.3.4 重复性试验分别精密量取同一样品溶液各 6 份，按 “2.3.2” 项方法操作，以甲醇为空白，于 275 nm波长处测定吸光度，结果重复性良好， RSD为 1.5%。

2.3.5 稳定性试验取同一供试品溶液，以甲醇为空白，于 275 nm波长处分别在 0、 2、 4、 6、 8 h 测定吸光度，结果供试品溶液在 8 h 内稳定， RSD为 2.3%。

2.3.6 回收率试验分别精密量取 6 份已知含量 (0.291 mg/m L) 的供试品液 0.5 mL，分别精密加入去氢二异丁香酚对照品溶液 (0.15 mg/mL)1.0 mL，蒸干，其余按“2.3.2” 项下的供试品溶液制备方法操作，以甲醇为空白，测定吸光度，并计算回收率。结果平均回收率为98.3%， RSD为 2.4%。

2.3.7 正交试验样品总木脂素测定取正交试验项下的各供试品溶液，以甲醇为空白，于 275nm波长处测定吸光度，由回归方程计算总木脂素提取量，结果见表2。

2.4 结论由方差分析表 3 可知， A因素对提取工艺有显著性影响，其它因素影响均不显著。经直观分析，影响提取工艺的主要因素依次为 A＞C＞D＞B，最佳提取条件为A3B2C2D2。即采用 90%乙醇为溶媒，提取 2 次，第 1 次加入 10 倍量，第 2 次加入 8 倍量，每次提取 1.5 h。

表3 方差分析

2.5 工艺验证为保证该工艺的重复性、可行性，本实验在正交试验的基础上，按确定的最佳提取工艺，进行3次工艺验证实验，实验用药量为 30.0 g，结果肉豆蔻中总木脂素提取量分别为 369.1、 365.8、 358.7 mg，平均值为364.5 mg。结果表明该工艺基本稳定可靠。

3 讨论

3.1 测定波长的选择将对照品溶液、供试品溶液分别在200 ～400 nm进行扫描，结果对照品溶液、供试品溶液均在 275 nm处有最大吸收，因此选择 275 nm为紫外测定波长。

3.2 供试品溶液制备方法的选择由于肉豆蔻中肉豆蔻醚、黄樟醚、甲基丁香酚等挥发油类成分均含有苯丙素类结构，在紫外 275 nm处也有吸收，因此为去除挥发油类成分的干扰，对供试品溶液的制备进行了筛选。方法1: 精密吸取正交 1 号样品 1.0 mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加适量水，多次分散转移，置离心试管中，离心 30 min (4 000 r/min)，上清液弃去，沉淀物加甲醇溶解，转移置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液1；方法 2: 精密吸取正交 1 号样品 1.0 m L，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移置 100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液 2；同时另精密吸取正交 1 号样品 1.0 mL，置 100 mL量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液3。取上述 3种供试品溶液，采用紫外分光光度法，分别在 275 nm处，以相应溶剂为空白，测定吸光度，结果吸光度分别为 0.265、 0.268、0.312。因此方法 1、方法 2 均能去除挥发油干扰，且效果相当，因此本实验中供试品溶液制备采用方法2。

3.3 测定方法的选择实验中曾考虑以利卡啉-B对照品，采用比色法测定总木脂素含有量［9］，但肉豆蔻中含有亚甲二氧基结构的木脂素成分较少，故采用紫外法直接测定。

［ 1 ］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010 年版一部［S］.北京: 中国医药科技出版社， 2010:212.

［2］王莹，杨秀伟.肉豆蔻中新木脂素类化合物的定量分析［J］.中国现代中药， 2005， 10(2):10-13.

［3］张蕾，徐云峰，沈硕，等.肉豆蔻的化学成分研究［J］.中国现代中药， 2010， 12(6):16-19.

［ 4 ］李秀芳，吴立军，贾天柱，等.肉豆蔻的化学成分［J］.沈阳药科大学学报， 2006， 23(11):698-699.

［5］李飞，杨秀伟，程燕，等.肉豆蔻木脂素的体外代谢初步研究［ J］ .中国新药杂志， 2008， 17(7):560-564.

［6］王聪，孟晓伟，刘永刚，等.肉豆蔻对照品去氢二异丁香酚制备工艺［J］.中国实验方剂学杂志， 2012， 18(4): 74-78.

［7］刘辉鑫，袁柯，程存归.红花芒毛苣苔总黄酮提取工艺研究［ J］ .中成药， 2012， 34(5):956-958.

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［9］王卫峰，金惠敏，丁腈，等.比色法测定南五味子中总木脂素的含量［J］.西北药学杂志， 1999， 14(5):197.

R284.2

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