安宫止血颗粒的质量标准研究

2014-04-11谢强胜

中成药 2014年2期

关键词：水苏安宫益母草

王坤，谢强胜

（山东省食品药品检验所，山东济南 250101）

安宫止血颗粒的质量标准研究

王坤，谢强胜

（山东省食品药品检验所，山东济南 250101）

目的完善安宫止血颗粒 (益母草、马齿苋) 的质量标准，以控制药品质量。方法修订原标准中益母草薄层色谱法鉴别，增加马齿苋的薄层色谱鉴别；采用 HPLC-ELSD法测定盐酸水苏碱， Venusil HILIC色谱柱，流动相为乙腈-0.2%冰醋酸 (80 ∶20) ，体积流量 1.0 mL/min，漂移管温度为 90 ℃。结果定性鉴别方法专属性强、特征斑点清晰。盐酸水苏碱进样量在 1.275 ～10.20 μg范围内，积分值的自然对数与进样量的自然对数线性关系良好， r= 0.999 5，平均回收率 99.52%， RSD为 1.26%。结论本方法操作简单，结果准确，能够有效地控制安宫止血颗粒的质量。

安宫止血颗粒； HPLC-ELSD；盐酸水苏碱

安宫止血颗粒为山东东阿阿胶股份有限公司独家生产品种。由益母草、马齿苋二味中药材经过提取，浓缩至稠膏，干燥，粉碎，过筛，制成中药颗粒剂。为了更好地控制药品质量，提高质量标准，在原标准的基础上修订了薄层色谱法对益母草的鉴别，增加了马齿苋的 TLC定性鉴别，并采用HPLC-ELSD法，测定益母草中盐酸水苏碱的量，方法简单，灵敏，重复性好。

1 仪器与试药

Agilent1200 高效液相色谱仪， Mettler AE240电子天平。乙腈、甲醇为色谱纯 (天津康科德)，无水乙醇、乙酸乙酯为分析纯 (国药集团化学试剂有限公司)，薄层色谱硅胶 G预制板 (青岛海洋化工厂分厂)，盐酸水苏碱 (购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号 110712-200508)，马齿苋对照药材 (企业提供)。安宫止血颗粒由山东东阿股份有限公司生产，规格为 4g/袋；安宫止血颗粒缺益母草阴性对照、缺马齿苋阴性对照均由山东东阿股份有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 益母草薄层鉴别原标准中益母草薄层鉴别项下供试品溶液制备繁琐［1］，展开时间较长，本实验对其进行验证并进行修改。取本品 1 g或 1.5 g(加糖型)，研细，加 70%乙醇 25 mL，超声 30 min，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 m L使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述两种溶液各 10 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸 (10 ∶6 ∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，在 105 ℃加热 15 min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-三氯化铁试液 (10 ∶1) 混合溶液至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点［2-3］，阴性对照无干扰。见图1。

图1 益母草的薄层色谱鉴别图Fig.1 TLC chromatogram of Leonuri Herba

2.2 马齿苋的薄层鉴别［4-7］取本品 4 g或 5 g (加糖型)，研细，加稀盐酸 3 mL与乙醇 25 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取马齿苋对照药材 2 g，同法制成对照药材溶液［8］。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述两种溶液各 2 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5 ∶3 ∶1 ∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 0.2%茚三酮乙醇溶液，在 105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。见图2。

2.3 盐酸水苏碱的测定［9-14］

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验以丙基酰胺键合硅胶为填充剂；乙腈-0.2%冰醋酸溶液 (80 ∶20) 为流动相；蒸发光散射检测器检测；柱温35 ℃，体积流量 1.0 mL/min。理论板数按盐酸水苏碱峰计算为 15 192。色谱图见图 3。

图2 马齿苋的薄层色谱鉴别图Fig.2 TLC chrom atogram of Portulacae Herba

2.3.2 对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱12.75 mg，至 25 mL量瓶，加 70%乙醇定容，摇匀，即得 0.51 mg/mL的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备取装量差异项下本品，研细，取约 0.5 g(加糖型 0.75 g)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定质量，超声处理 ( 功率 300 W，频率 40 kHz) 45 min，取出，放冷，再称定质量，用 70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 阴性溶液的制备取不加益母草的空白样品按照 “2.3.3” 项下方法，制成溶液，即得。

2.3.5 线性关系的考察分别精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液 2.5、 5、 10、 15、20 μL，注入液相色谱仪，测其峰面积，以峰面积的自然对数为纵坐标，对照品进样量的自然对数为横坐标，计算，结果回归方程为 y=1.213 6x+7.217 3， r=0.999 5。盐酸水苏碱进样量在 1.275 ～10.200 μg范围内，进样量自然对数与峰面积积分值自然对数呈良好的线性关系。

图3 盐酸水苏碱 HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of stachydrine hyd rochloride

2.3.6 精密度试验精密吸取上述对照品溶液 10μL，连续进样 6 次，测得峰面积积分值。峰面积积分值自然对数的 RSD为 0.029%，说明仪器精密度良好。

2.3.7 稳定性试验取同一批样品按 “2.3.3”项方法制备，分别于配制后 0、 2、 4、 6、 12 h，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算峰面积积分值的自然对数及其平均值。结果盐酸水苏碱 RSD为 0.039%。表明样品在 12 h 内基本稳定。

2.3.8 重复性试验取同一批样品 ( 批号110401)6 份，按 “2.3.3”项方法制备 6 份。精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，计算，结果盐酸水苏碱平均含有量为 72.6 mg/袋， RSD为 1.02%。

2.3.9 加样回收率试验取同一批样品 (批号110401)6 份各 0.25 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，分别加入对照品溶液 (盐酸水苏碱 1.06 mg/mL)5 m L，再精密加入70%乙醇 20 mL，称定质量，超声处理 (功率 300 W，频率 40 kHz)45 min，放冷，再称定质量，用 70%乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，进行测定，计算回收率。结果见表1。