匹多莫德对哮喘患儿血清中GATA-3与T-bet的影响

高雪，宫建，陈琪玮，罗佳，曲华，任灵

哮喘是一种儿童时期最常见的慢性呼吸道疾病，是多种细胞和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病，最新全国儿童流行病学调查显示，94.62%患儿以呼吸道感染为诱因[1]。而呼吸道感染又与Th1、Th2细胞亚群失衡有关，而匹多莫德能调节Th1、Th2细胞亚群失衡[2]。GATA蛋白家族属于Ⅳ型锌指蛋白，迄今为止，该家族共发现有6个成员(GATA-1～GATA-6)。GATA-3对Th1细胞的发育起抑制作用，可能通过抑制γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)、白细胞介素12(interleukin-12，IL-12)的信号传导来抑制Th1细胞发育，GATA-3是Th2细胞发育过程中重要的转录因子，主要在Th2细胞中表达[3]。T-bet是T-box家族成员，在胚胎发育中起重要作用，Th0细胞产生的IFN-γ与其受体结合，激活信号转导和转录活化因1(signal transduction and transcriptional activation factor-1，STAT-1)，进一步活化T-bet基因，而后者则激活IFN-γ基因，即T-bet的作用是通过激活IFN-γ基因而发挥其对Th1细胞发育的正调控作用的[4]。本文初步分析匹多莫德与GATA-3与T-bet浓度的关系，为进一步探讨匹多莫德纠正Th1、Th2细胞亚群失衡提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010-03/2013-02沈阳医学院附属第二医院儿科门诊首次诊断为哮喘患儿90例，按随机数字表法分为观察组和对照组各45例。两组治疗前临床资料见表1。两组患儿在年龄、性别、体质量指数(BMI)、血清GATA-3、T-bet浓度方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

表1 两组治疗前临床资料比较±s，n=45)

1.2 诊断标准 参照儿童支气管哮喘诊断与防治指南(2008年修订)中儿童支气管哮喘的诊断标准[5]。

1.3 纳入标准 (1)符合儿童支气管哮喘的诊断标准；(2)年龄3～6岁；(3)家长知情同意。

1.4 排除标准 (1)合并甲亢、糖尿病、急慢性胰腺炎以及严重肝肾疾病、心肺功能不全者、无服用影响糖代谢的药物；(2)合并痛风、外科手术或严重创伤；(3)合并血液系统疾病；(4)治疗前3个月使用免疫抑制药者，如非甾体抗炎药、类固醇和鸦片等药物等；(5)合并急性感染、恶性肿瘤等疾病；(6)存在免疫缺陷等疾病。

1.5 治疗方法 对照组患儿运动前或体力劳动前给予硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂(英国葛兰素威康制药有限公司)100 μg/次。观察组在对照组基础上连续口服匹多莫德口服液(意大利多帕药业有限公司)400 mg/次，每日2次。两组均治疗3个月。治疗期间每周电话随访1次，每2～4周门诊随访1次。

1.6 检测方法 连续口服药物3个月后对所有检测对象均抽取静脉血3 mL，注入玻璃试管内，静置10 min，以3 000 r/min离心10 min，分离血清-70 ℃保存待测。血清GATA-3与T-bet检测采用ELISA法测定，试剂盒购自上海西塘生物科技公司，实验步骤严格按照说明书进行。

1.7 疗效判定标准 (1)显效：治疗中未复发或6个月内轻微发作不超过1次；(2)好转：6个月内复发次数减少1/2以上，发病时病程缩短，症状减轻；(3)无效：治疗前后复发次数、病程及症状均无明显改变[6]。

1.8 观察指标 两组临床疗效及治疗前后血清GATA-3、T-bet浓度。

2 结果

2.1 两组临床疗效对比 见表2。

表2 两组临床疗效对比[n(%)，n=45]

表2结果表明，观察组显效率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。两组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 两组治疗前和治疗后血清GATA-3、T-bet浓度对比 观察组、对照组连续治疗3个月后GATA-3与治疗前比较有所降低，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗3个月后观察组较对照组GATA-3浓度低，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组、对照组连续治疗3个月后T-bet与治疗前和对照组比较升高，差异有统计学意义(P<0.05)，治疗3个月后观察组T-bet浓度高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。血清中GATA-3浓度与T-bet浓度呈负性相关关系(r=-0.68,P=0.041<0.05)。

表3 两组治疗前后血清GATA-3、T-bet浓度对比±s，n=45，ng/L)

3 讨论

匹多莫德化学名为(R)-3-[(S)-(5-氧-2-吡咯烷基)羟基]-噻唑烷基-4-甲酸，是一种全新的化学合成免疫调节剂，其结构类似二肽，是意大利多帕药业有限公司产品，1993年上市，是一种新型免疫调节剂，由焦谷氨酸和硫代脯氨酸组成，它很好地克服了生物来源免疫调节剂的不良反应，既能促进非特异性免疫反应，又可以促进特异性免疫反应[7]。刘恩梅等[8]试验证明，匹多莫德能调节T细胞亚群，下调IL-4等炎性因子，并可以通过激活抗原提呈细胞，促进Th1细胞功能，抑制哮喘患儿体内相对亢进的Th2细胞功能，使哮喘症状得到改善。而匹多莫德能调节各类免疫功能低下人群的细胞免疫功能，而发挥增强患者非特异免疫功能的作用[9]。

T-bet主要表达于T、B、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞，Th0细胞产生的IFN-γ与其受体结合，激活STAT-1，进一步活化T-bet基因，而后者则激活IFN-γ基因，即T-bet的作用是通过激活IFN-γ基因而发挥其对Th1细胞发育的正调控作用的[4]。GATA-3与T-bet作用相反，使Th0向Th2细胞分化，GATA-3优先激活IL-4基因，进一步调节IL-5和IL-13的表达。最新研究表明，GATA-3对于早期IL-4的产生与以后稳定Th2细胞的极化状态都是必须的，既可以通过TCR信号传导途径也可以通过IL-4/STAT-6信号途径来诱导GATA-3的表达，而后者是Th2细胞增殖的主要途径[10]。本实验数据表明，对照组与观察组治疗后血清中GATA-3明显降低，而T-bet明显升高；观察组血清T-bet浓度高于对照组，GATA-3浓度低于对照组，且观察组显效率高于对照组，证实了匹多莫德能通过调节GATA-3与T-bet来控制哮喘的症状。Th1细胞是参与细胞免疫的重要正向调节细胞，分泌的细胞因子IFN-γ调节效应性T细胞的功能；T-bet在哮喘患者体内表达量降低导致Th2细胞分化[11]，其激发Th0细胞向Th1细胞分化的能力降低，GATA-3表达量增加。而通过给予外源性的匹多莫德后，T-bet表达量升高，GATA-3表达量降低，说明匹多莫德能很好的通过这一途径来改善哮喘症状。匹多莫德改善哮喘症状并不是单纯一条途径，而是多条途径共同作用的结果，这些途径的相互关系如何值得去进一步探索。

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(收稿日期：2014-02-20)