HPLC法测定参苏片中柚皮苷的含量

刘 岩

（山东药品食品职业学院，山东 威海 264210）

参苏片为感冒类非处方药药品，状态为淡棕色的片状剂型，其气香，味微苦，由党参、紫苏叶、葛根、前胡、茯苓、姜半夏、陈皮、枳壳、桔梗、甘草、木香、大枣、生姜等13味药材组成。具有疏风散寒，祛痰止咳之功。主要用于体弱风寒感冒，恶寒发热，头痛鼻塞，咳嗽痰多，胸闷呕逆［1］。风热感冒者不适用。风寒感冒，临床上多表现为微恶风，发热重，口渴，有汗，鼻流浊涕，咽喉红肿热痛，咳吐黄痰，但若伴有肝病、糖尿病、心脏病、高血压、肾病等慢性病严重者、孕妇或正在接受其他治疗的患者应慎用或在医师指导下服用。由于参苏片制剂中君药为枳壳，其主要活性成分之一为柚皮苷［2］，为保证参苏片制剂的内在控制质量，本实验采用高效液相色谱（HPLC）法对制剂参苏片处方中枳壳药材的有效活性成分柚皮苷进行含量测定，获得比较满意的效果，该方法重现性好，结果准确可靠，有助于控制该制剂的质量，确保临床用药的有效性和安全性［3］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 电子天平（AUW20D，岛津）；高效液相色谱仪（1100，安捷伦）；紫外可见分光光度计（UV-2550，岛津岛津公司）；超声波清洗器（KQ-50B，昆山市超声波有限公司）；恒温水浴锅（HH-4，金坛市荣华仪器制造有限公司）；索氏提取器（JOYN-SXT-02，上海乔跃电子有限公司）；微孔滤膜过滤器（ZHAA-1000，北京中慧天诚科技有限公司）。

1.2 试药 柚皮苷对照品（批号：110922-200309中国药品生物制品检定所提供）；参苏片（3批，批号：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎药业有限公司）；乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、丙酮等其他试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：BDS C18Hypersil（250nm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（21.5∶80.5）；检测波长：283nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取干燥至恒重的柚皮苷对照品一定量，精密称定后，置棕色量瓶中，然后加一定量甲醇进行超声波溶解，再加甲醇定容制成浓度15μg/mL的溶液，作为柚皮苷对照品溶液备用。

2.2.2 供试品溶液 取装量差异项下的参苏片，粉碎，过筛，粉末混匀，研细，取3.0g，精密称定后，置于具塞的锥形瓶中，再精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，采用恒温回流提取1.5h，放冷，密塞，再称定重量，并用甲醇补足减失的重量，摇匀，用滤纸过滤，收集续滤液，低温蒸干，将蒸干后的残渣加少量水溶解，得提取物水溶液，提取物水溶液通过聚酰胺色谱柱洗脱，以水为洗脱液洗涤多次，弃去水溶液后，再用甲醇50mL为洗脱液分次洗涤，收集甲醇洗脱液，取一定量的甲醇洗脱液用0.45μm的微孔滤膜过滤，得到滤液作为供试品溶液备用。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性范围考察 取已制备好的柚皮苷对照品溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9μL的柚皮苷对照品溶液，依次注入高效液相色谱仪，并记录测得的色谱图，然后测定其峰面积，以柚皮苷质量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线并计算，得到标准曲线的回归方程为：Y=25 856X－600.2（Y，峰面积，X，质量），r=0.999 9（n=5）。结果表明，柚皮苷对照品在0.015～0.135μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取已制备好的柚皮苷对照品溶液（15μg/mL）5μL，按正文色谱条件，连续重复进样5次，测定柚皮苷的峰面积，计算5次测定柚皮苷峰面积的平均值为56 878.8，RSD=0.5％（n=5）。结果表明，测定仪器的精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 配制同一供试品溶液（批号：20120601），精密吸取10μL，按正文色谱条件分别在0、2、4、8、12h测定供试品溶液峰面积，计算得柚皮苷峰面积的平均值为562 128.21，RSD=1.1％（n=5）。结果表明，供试品溶液在12h内化学性质较稳定，其稳定性良好。

2.3.4 重复性试验 精密称取柚皮苷提取物（批号：20120601）的样品共5分，分别按照供试品溶液制备方法制备，按照正文色谱条件测定，分别按照标准曲线计算样品溶液中柚皮苷的质量，其质量的平均值为0.185mg，RSD=2.54％（n=5）。结果表明，测定方法的重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验 取已知含量的同一批号样品（批号：20120601）5分，精密称定，再分别精密加入柚皮苷对照品（配制成溶液加入），按照正文供试品溶液的制备方法，制备测定加样回收率的供试品溶液，然后再分别测定5分样品溶液的含量，最后计算加样回收率，计算得其加样回收率的平均值为98.53％，RSD=0.5％（n=5）。结果表明，本方法具有较好的加样回收率。

2.3.6 样品含量测定 按照对照品溶液正文制备方法制备对照品溶液，按照供试品溶液正文制备方法制备供试品溶液3批（批号：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎药业有限公司），按照正文色谱条件进行测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，并记录相应的色谱图，以样品中柚皮苷峰面积来计算柚皮苷的含量，样品中的柚皮苷含量分别为0.19mg/g（批号：120601）、0.21mg/g（批号：120602）、0.22mg/g（批号：120603）。

3 结论

3.1 测定波长的选择 取柚皮苷对照品适量，加甲醇制备成适宜浓度的溶液，进行紫外全波长范围扫描，结果目标成分在283nm波长处吸收值最大，因此选择283nm为测定波长。

3.2 提取溶剂、方法、时间的选择 取样品适量，实验过程中分别考察了甲醇、95％乙醇、80％乙醇、丙酮4种提取溶剂，得到提取物收率最高的溶剂为甲醇，故选择甲醇为提取溶剂；实验过程中分别考察了冷浸、超声、回流3种提取方法［4-8］，得到提取物收率最高的提取方法为回流提取，故选择提取方法为回流提取；实验过程中分别考察了提取时间为1h、1.5h和2h所获得的收率［9-11］，得到提取物收率最高的时间为1.5h，故选择提取时间为1.5h。根据以上考察，最后确定以甲醇为溶剂回流提取1.5h，收率大，杂质干扰小。

3.3 流动相的选择 通过大量实验研究，最后选择了2个流动相系统：A甲醇∶1％冰醋酸（30∶70），B乙腈∶水（21.5∶80.5）；A系统液相色谱图表现为馒头峰，改变为B系统后峰形得到很大改善，也无拖尾现象，保留时间适中，且主峰与杂质峰分离度符合要求，故选择乙腈-水（21.5∶80.5）作为流动相。

本研究建立了高效液相方法测定参苏片中柚皮苷的含量，方法稳定可行，专属性强，精密度高，重复性好，其他组分干扰小，回收率高。该研究可为参苏片的质量评价提供理论依据。

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