浆膜腔积液细胞块Calretinin Ber-EP4 CEA表达分析

王丽华 孙翠翠 鲍 健

（辽宁省锦州市中心医院病理科，121000）

浆膜腔积液细胞块Calretinin Ber-EP4 CEA表达分析

王丽华 孙翠翠 鲍 健

（辽宁省锦州市中心医院病理科，121000）

目的 探讨浆膜腔积液腺癌细胞和间皮细胞中Calretinin、Ber-EP4、CEA的表达及其意义。方法 应用细胞块技术对42例浆膜腔积液标本进行处理，并行免疫组化染色，观察Calretinin、Ber-EP4、CEA在腺癌细胞及间皮细胞的表达。结果 Calretinin、Ber-EP4、CEA在腺癌细胞的阳性表达率与在间皮细胞的阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 细胞块切片结合免疫组化是鉴别腺癌细胞与增生间皮细胞的有效方法，Calretinin、Ber-EP4及CEA的抗体组合，具有较高的临床应用价值。

浆膜腔积液；腺癌细胞；增生间皮细胞；免疫组化

浆膜腔积液中反应性增生的间皮细胞常具有一定异型性，与某些分化较好的转移性腺癌细胞形态极其相似，难以鉴别。我科运用常规细胞涂片、细胞块切片结合免疫组化的方法，为二者的鉴别提供了较可靠依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集我院2013年1—12月细胞含量丰富的浆膜腔积液（胸腔积液/腹腔积液）标本42例，其中腹腔积液24例、胸腔积液18例。

1.2 试剂及实验方法 免疫组化试剂Calretinin、Ber-EP4、CEA及二步法免疫组化试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 检测方法 收集的浆膜腔积液标本全部离心，2 500转/min，离心5 min。常规涂片，另取沉渣固定，包埋，常规脱水，石蜡包埋切片。免疫组化检测采用二步法，用已知阳性切片作为阳性对照，磷酸缓冲盐溶液代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断 Ber-EP4蛋白阳性表达产物定位于胞膜，Calretinin蛋白阳性表达产物定位于胞核和胞质，CEA蛋白阳性表达产物定位于胞膜和部分胞质，呈明显棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数＞10%为阳性表达，阳性细胞数≤10%为阴性表达。由两位有经验的病理医师在不知临床和细胞学诊断的情况下作出判断。

1.5 统计分析 采用SPSS 11.5统计分析软件，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞涂片与细胞块切片形态学比较 同细胞涂片比较，细胞块切片具有组织像清晰，细胞集中，制片背景干净，便于观察的优点，且容易获得具有特征性的组织结构。42例浆膜腔积液标本中，诊断为腺癌细胞23例、反应性间皮增生14例、可疑腺癌5例。

表1 Ber-EP4、Calretinin、CEA在浆膜腔积液腺癌细胞和间皮细胞中的表达情况[例(%)]

2.2 免疫组化结果 各抗体在腺癌细胞和间皮细胞中的表达情况见表1。三者在腺癌细胞和间皮细胞中的表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。Calretinin在增生的间皮细胞中表达阳性率为88.9%(15/17)，在腺癌细胞中1例出现部分表达阳性，特异性为94.1%。Ber-EP4和CEA在腺癌细胞中阳性表达率分别为92.0%（23/25）和84.0%（21/25）。在5例可疑腺癌病例中，2例出现Ber-EP4和（或）CEA阳性表达，诊断为转移性腺癌；3例仅出现Calretinin阳性，诊断为增生的间皮细胞。

3 讨论

浆膜腔积液中的转移性腺癌细胞与增生间皮细胞形态学存在交叉，二者鉴别是病理日常工作中常见的细胞学诊断难题之一。常规细胞涂片的优点是快速、简便易行，但准确性有限，对恶性浆膜腔积液的诊断敏感度为50%～78%[1]。本组浆膜腔积液常规涂片有5例可疑腺癌，需要进一步明确诊断。

细胞块结合免疫组化是一种重要的浆膜腔积液辅助诊断方法，其背景着色低，结果易于判断，染色模式与组织学标本相似，而且可以同时制作多张切片，利于抗体组合应用。本组42例标本最终都得到了明确诊断，大大提高了恶性浆膜腔积液的诊断准确率。

1997年，Calretinin首次用于浆膜腔积液的鉴别诊断。文献报道，Calretinin在间皮及其肿瘤组织中表达率较高（80%～100%），而在腺癌中表达率较低（0～9%）[2]。Chhieng等[3]研究发现，Calretinin在间皮及其肿瘤组织中的表达强度和部位与腺癌不同，前者在胞核和胞质表达，可伴有较强的胞膜着色，呈“煎蛋样”外观。而在腺癌中表达强度较弱，且仅胞质阳性。本研究采用上述判断标准，Calretinin对间皮细胞的特异性达96.0%，对与腺癌鉴别具有很好的辅助作用。

Ber-EP4对癌细胞的敏感性为32%～100%，假阳性率仅为0～2.5%[4]。本研究中，Ber-EP4的敏感性和特异性分别为92%和94.1% ，阳性反应呈胞浆、胞膜或胞浆胞膜清晰着色。CEA在腺癌，尤其是消化道腺癌和肺腺癌中有较高的表达[5]，而间皮瘤和反应增生的间皮细胞不表达或低表达。本实验CEA在25例腺癌中阳性表达率为84%，而17例增生性间皮细胞中仅2例出现灶状阳性，特异性为88.2%。在实际观察中，腺癌的CEA阳性表达为弥漫性，而间皮细胞的阳性表达较为散在或呈灶状，因此CEA弥漫阳性对腺癌鉴别很有帮助。

本研究结果表明，Ber-EP4和CEA呈现互补作用，二者结合对癌细胞的敏感性提高，而特异性不变。采用这两种抗体与间皮源性抗体Calretinin组合应用，使浆膜腔积液的鉴别诊断获得了正反两方面的证实，进一步提高了诊断的准确性。因此，Ber-EP4、Calretinin、CEA抗体组合对鉴别浆膜腔积液中腺癌细胞和增生的间皮细胞具有较高的临床应用价值。我们在临床实践过程中，针对不同的浆膜腔积液结合临床情况，在这三种抗体基础上配合如TTF-1、CDX-2、CA125、CK7、CK20等，还可以进一步明确腺癌的组织来源,为临床治疗方案的确立提供重要参考依据。

[1] 斯向东，李庆．细胞块切片及免疫组化在恶性浆膜腔积液诊断中的应用[J]．中国现代医生，2011，49(28)：114-115．

[2] Murugan P, Siddaraju N, Habeebullah S, et al. Immunohistochemical distinction between mesothelial and adenocarcinoma cells in serous effusions∶ a combination panel-based approach with a brief review of the literature[J]. Indian J Pathol Microbiol, 2009, 52(2)∶ 175-181.

[3] Chhieng DC, Yee H, Schaefer D, et al. Calretinin staining pattern aids in the differentiation of mesothelioma from adenocarcinoma in serous effusions[J]. Cancer, 2000, 90(3)∶ 194-200.

[4] Dinu M, Ciurea RN, Stefan M, et al. The role of immunohistochemistry in the diagnosis of neoplastic pleural effusions[J]. Rom J Morphol Embryol, 2012, 53(3)∶817-820.

1672-7185（2014）24-0052-02 doi∶10.3969/j.issn.1672-7185.2014.24.025

2014-05-21)

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