推拿治疗对急性软组织损伤家兔血清神经递质表达影响的研究①

2014-03-18王宇峰丛德毓楚云杰长春中医药大学附属医院长春130021

中国免疫学杂志 2014年11期

王宇峰丛德毓高辉楚云杰 (长春中医药大学附属医院，长春 130021)

急性软组织损伤是临床上的常见病和多发病，中医推拿疗法是治疗该病的主要疗法，具有操作简便、疗效确切等优势。本研究通过观察推拿疗法对急性软组织损伤家兔血清中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和β-内啡肽(β-EP)表达水平的影响，旨在分析推拿治疗急性软组织损伤疼痛的作用机制，促进推拿疗法在急性软组织损伤治疗中的应用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组大耳白家兔30 只，雌雄各半，体重2.0～3.0 kg，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，动物合格证号:SCXK(吉)2012-0002。根据随机数字表，将家兔随机分为空白对照组、模型对照组和推拿治疗组，每组各10 只。

1.1.2 仪器与试剂 NE 酶联免疫试剂盒，5-HT 酶联免疫试剂盒，DA 酶联免疫试剂盒，β-EP 酶联免疫试剂盒(美国R＆D Systems Inc.公司);贺利氏台式离心机(德国贺利氏公司);酶标仪(美国伯乐公司);MP120-1 型电子天平(上海第二天平仪器厂);FSH-ZA 型可调高速匀浆机(江苏省金坛县望华科教仪器厂);78-1 型电热恒温培养箱(湖北省黄石市医疗器械厂)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法采用重物悬空坠落冲击法［1］，建立急性软组织损伤家兔模型，具体操作如下:实验前用电动推剃除家兔右侧臀部背毛，剃毛面积约5 cm × 5 cm。将动物左侧卧位固定于实验台上，充分暴露脱毛区域，在动物臀部肌肉最丰满的股二头肌处标记。用长60 cm、直径4 cm 不锈钢导管的一端垂直对准标记部位，从导管另一端将重量为250 g的金属重物沿导管呈自由落体落下，连续打击6 次。损伤区域面积约3 cm × 3 cm，损伤后局部皮肤无破损，损伤区域明显肿胀、瘀血，表明已完成该部位的急性软组织损伤模型。

1.2.2 干预方法 (1)空白对照组:不予以任何处置，仅作对照观察;(2)模型对照组:造模成功后，不予以任何处置，仅作对照观察;(3)推拿治疗组:造模成功后恢复24 h，予以推拿手法治疗，具体操作如下:①三指摩法:食指、中指、无名指3 个手指自然伸直并拢，以3 个手指的指腹附着于家兔受伤的软组织周围采用轻柔的逆时针摩法，频率为120 次/min，共操作5 min。②拇指推法:以拇指指腹附着于家兔伤侧臀部，沿着家兔臀部的肌肉走形方向，施以拇指平推法，频率为60 次/min，共操作5 min。③大鱼际揉法:在家兔伤侧的臀部，施以大鱼际揉法，频率为120 次/min，共操作5 min。上述治疗15 min/次，1次/d，连续治疗3 d。

1.2.3 标本采集与测定分别在造模24 h 后，第1次推拿治疗后30 min，以及第3 次推拿治疗后30 min，对各组家兔进行耳缘静脉采血，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定家兔血清中5-HT、DA、NE 和β-EP的表达水平，具体检测方法按照试剂盒说明书操作。

1.3 统计学方法采用SPSS18.0 统计软件对实验数据进行统计分析，计量资料用±s 表示，组间比较采用t 检验。

2 结果

2.1 推拿对急性软组织损伤家兔血清中5-HT 表达水平的影响造模24 h 后，模型对照组家兔血清中5-HT 的表达水平显著升高，与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.001);在第1 次推拿治疗后30 min 和第3 次治疗后30 min，推拿治疗组家兔血清中5-HT 的表达水平明显降低，与模型对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)，见表1。

2.2 推拿对急性软组织损伤家兔血清中DA 表达水平的影响造模24 h 后，模型对照组家兔血清中DA 的表达水平明显升高，与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.001);在第1 次推拿治疗后30 min 和第3 次治疗后30 min，推拿治疗组家兔血清中DA 的表达水平明显降低，与模型对照组比较均具有显著性差异(P＜0.001)，见表2。

2.3 推拿对急性软组织损伤家兔血清中NE 表达水平的影响造模24 h 后，模型对照组家兔血清中NE 的表达水平明显升高，与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.001);在第1 次推拿治疗后30 min和第3 次治疗后30 min，推拿治疗组家兔血清中NE的表达水平明显降低，与模型对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01 和P＜0.001)，见表3。

表1 推拿对急性软组织损伤家兔血清中5-HT 表达水平的影响(ng/ml，±s，n=10)Tab.1 Massage of acute soft tissue injury were investi-gated effects of 5-HT expression level in serum(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表2 推拿对急性软组织损伤家兔血清中DA 表达水平的影响(nmol/l，±s，n=10)Tab.2 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum DA expression level of influence(nmol/L ±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.001.

表3 推拿对急性软组织损伤家兔血清中NE 表达水平的影响(ng/ml，±s，n=10)Tab.3 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serumNE expression level influence(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表4 推拿对急性软组织损伤家兔血清中β-EP 表达水平的影响(nmol/l，±s，n=10)Tab.4 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum β-EP expression level of influence (nmol/L，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.05，2)P＜0.01，3)P＜0.001.

2.4 推拿对急性软组织损伤家兔血清中β-EP 表达水平的影响造模24 h 后，模型对照组家兔血清中β-EP 的表达水平明显降低，与空白对照组比较具有显著性差异(P＜0.001);在第1 次推拿治疗后30 min和第3 次治疗后30 min，推拿治疗组家兔血清中β-EP 的表达水平明显升高，与模型对照组比较均具有显著性差异(P＜0.001 和P＜0.05)，见表4。

3 讨论

急性软组织损伤多由外力作用于机体所致，造成损伤部位细胞变性坏死，正常的血液循环遭到破坏，引起急性无菌性炎症［2］，局部出现肿胀及疼痛。推拿疗法具有促进局部毛细血管扩张，改善血液循环和组织营养，促进肌肉的正常代谢，而起到止痛的作用。相关研究显示，推拿疗法具有明显改善微循环障碍的作用［3］;还能促进局部的血液循环，加快局部病理产物的吸收［4］。

5-HT、DA、NE 和β-EP 等均属于重要的神经递质，与疼痛的发生关系密切。近年来，随着推拿学科的发展进步，有学者研究发现5-HT、DA 在推拿镇痛的过程中发挥了重要的作用［5，6］。本研究发现:①5-HT、DA、NE 和β-EP 等神经递质与软组织损伤关系密切，在导致急性软组织损伤家兔疼痛的过程中具有重要作用;②推拿疗法对5-HT、DA、NE和β-EP 等神经递质具有良好的调整作用，可以通过调节5-HT、DA、NE 和β-EP 的表达水平而发挥其镇痛作用。本研究初步揭示了推拿治疗急性软组织损伤疼痛的作用机制，并为推拿疗法在急性软组织损伤临床治疗中的应用提供了实验依据。

［1］罗丽，张健，董宇，等.大鼠骨骼肌纤维化形成过程中IGF-1，TGF-β1 的表达［J］.体育科学，2011，31(11):61-70.

［2］曾平，廖小波，欧海玲，等.五方膏外敷治疗大鼠急性软组织损伤的实验研究［J］.中医正骨，2007，19(4):6-7.

［3］龚金德，楼惠军，金惠铭，等.手外伤患者推拿前后甲皱微循环的变化［J］.上海中医药杂志，1984，5:34.

［4］宋敏.推拿疗法的作用机理及实验研究［J］.甘肃中医药杂志，1994，7(24):43-45.

［5］周军，胡精超.推拿对延迟性肌肉酸痛作用机制的研究进展［J］.中国康复医学杂志，2009，24(1):136-137.

［6］武云娟，唐霄，蒋秋燕，等.穴位按摩法对产妇多巴胺水平影响及镇痛作用的研究［J］.医学研究杂志，2010，39(2):53-55.