伴抗心磷脂抗体阳性的SLE患者外周血CD1c和CD1d表达增高

芮红兵，郑 玲，康日辉，林珺芳，郑晓强

(福建医科大学附属第一医院风湿科，福建福州350005)

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者机体能产生多种抗非肽类自身抗体，如抗双链DNA(antidsDNA autoantibody)抗体及抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody，ACA))。ACA 在约60%的SLE 患者中高表达，与动静脉栓塞、血小板减少及狼疮抗凝因子(lupus anticoagulant，LA))显著相关。作为抗原递呈分子，CD1c 和CD1d 分子在SLE 自身非肽类抗体的发生发展中可能发挥着重要作用。本实验对伴ACA 阳性的SLE 患者外周血CD1c 及CD1d 的表达及相关细胞因子进行了研究。

1 材料与方法

1.1 主要试剂:FITC 标记的小鼠抗人CD1c 和CD1d 抗体(PharMingen 公司)，人IL-4、IL-10、IL-2 或IFN-γ 检测试剂盒(R＆D systems 公司)。

1.2 临床资料:SLE 患者均为福建医科大学附属第一医院门诊和住院患者，符合1997年修定的美国风湿病学会的诊断标准。伴ACA 阳性的活动期SLE 患者27 例，其中女性25例，男性2 例，年龄为12～58 岁，平均32.2 岁，病程为7 天～4年。无伴ACA 阳性的活动期SLE 患者23 例，其中女性18例，男性5 例，年龄为14～53 岁，平均27.9 岁，病程为10 天～11年。稳定期SLE 患者11 例，其中女性9 例，男性2 例，年龄为17～45 岁，平均28.5 岁，病程为240 天到8年。活动期患者均使用糖皮质激素加免疫抑制剂治疗，泼尼松剂量每日1～1.5 mg/kg，免疫抑制剂为环磷酰胺(CTX)冲击治疗(CTX 0.8～1.0 g，3 周1 次)或硫唑嘌呤每天0.1g。主要实验室检查方面，用ELISA 方法测定抗核抗体(ANA)、抗ds-DNA 抗体和ACA;用免疫印迹法测定抗ENA 抗体;蛋白分析仪散射速率法测定C3、C4 和CRP 含量。20 例正常人为自愿献血者，其中女性17 例，男性3 例，平均年龄为30.8 岁。经福建医科大学附属第一医院伦理委员会批准，各组均签署知情同意书。

1.3 流式细胞仪分析:肝素抗凝静脉血经淋巴细胞分离液离心分层，取出中间层的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)，使用流式细胞仪(becton dickinson)进行细胞表面抗原分析，每份标本分析10 000 个细胞。活动期患者于治疗前、治疗2 周后及治疗4 周后分别进行流式细胞分析。

1.4 细胞因子检测:人IL-4、IL-10、IL-2、IFN-γ 检测采用试剂盒双抗体夹心法，按说明书操作。

2 结果

2.1 伴ACA 阳性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平:伴ACA 阳性SLE 患者PBMC 中CD1c+细胞百分数较对照组、缓解期组及ACA 阴性组增加(P＜0.05)，CD1d+细胞百分数较对照组及缓解期SLE 组增加(P＜0.05)。活动期SLE 患者血清IFN-γ 和IL-2 水平低于对照组及缓解期SLE 组(P＜0.05)，IL-4 和IL-10 水平高于对照组及缓解期SLE 组(P＜0.05)(表1)。

2.2 伴ACA 阳性SLE 患者治疗前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的变化:27 例伴ACA 阳性的活动期患者治疗2 及4 周后PBMC 中CD1c+及CD1d+细胞较治疗前下降(P＜0.05)。IFN-γ 和IL-2 水平在治疗4 周后升高(P＜0.05)，IL-4 和IL-10 水平较治疗前下降(P＜0.05)(表2)。

2.3 相关性分析:伴ACA 阳性SLE 患者PBMC 中CD1c+及CD1d+细胞与抗dsDNA 抗体水平显著相关(P＜0.05)，CD1c的表达与ACA 和C3 水平显著相关(P＜0.05)。IL-4 和IL-10水平与CD1c 和CD1d 阳性细胞百分率均显著相关(P＜0.05)。

表1 伴ACA 阳性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平Table 1 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in SLE patients with positive ACA (±s，n=27)

表1 伴ACA 阳性SLE 患者CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平Table 1 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in SLE patients with positive ACA (±s，n=27)

＊P＜0.05 compared with control or stable patients;#P＜0.05 compared with active patients with ACA －.

groupnCD1cCD1dIFN-γ(ng/L) IL-2(ng/L)IL-4(ng/L)IL-10(ng/L)control203.0% ±0.7%3.0% ±1.0%15.4 ±3.312.9 ±5.217.4 ±5.235.6 ±11.2 stable patients113.3% ±0.5%3.5% ±0.8%16.2 ±5.412.2 ±4.115.8 ±4.737.7 ±10.8 active patients with ACA －234.4% ±1.1% *5.2% ±1.5% *12.6 ±4.4*3.0 ±1.2*33.6 ±5.2*59.2 ±9.6*active patients with ACA +275.4% ±1.2% #5.4% ±1.4% *11.7 ±4.8*3.2 ±1.0*34.2 ±4.9*58.8 ±9.1*

表2 伴ACA 阳性SLE 患者治疗前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的变化Table 2 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in active SLE patients with positive ACA after treatment(±s，n=27)

表2 伴ACA 阳性SLE 患者治疗前后CD1c、CD1d、IFN-γ、IL-2、IL-4 和IL-10 水平的变化Table 2 Expression of CD1c，CD1d，IFN-γ，IL-2，IL-4 and IL-10 in active SLE patients with positive ACA after treatment(±s，n=27)

*P＜0.05 compared with two weeks after treatment;#P＜0.05 compared with before treatment.

CD1cCD1dIFN-γ(ng/L)IL-2(ng/L)IL-4(ng/L)IL-10(ng/L)before treatment5.4% ±1.2%5.4% ±1.4%11.7 ±4.83.2 ±1.034.2 ±4.958.8 ±9.1 two weeks after treatment4.1% ±1.1% #4.5% ±0.9% #12.9 ±3.43.3 ±0.928.7 ±6.151.5 ±9.3 four weeks after treatment2.6% ±0.9% *2.8% ±0.8% *13.2 ±3.6#4.8 ±1.3#27.4 ±6.1#46.4 ±8.0#

3 讨论

CD1 递呈的是非肽类的抗原，CD1c 和CD1d 的抗原递呈作用和自身免疫病发病密切相关［1］。本研究中发现，二种CD1 分子特别是CD1c 水平在伴ACA 阳性患者PBMC 中明显升高，且与ACA、抗dsDNA 抗体和补体C3 水平明显相关，治疗后CD1c 和CD1d 水平明显下降，提示CD1c 和CD1d 与这两种抗体及病情发展有关，在伴ACA 阳性活动期SLE 中这两种自身抗原递呈分子尤其CD1c 呈现亢进现象，引起这种现象的机制目前尚不清楚。

SLE 患者体内T 和B 细胞紊乱导致免疫异常是SLE 主要的发病机制，这种紊乱往往又表现为细胞因子表达异常。研究发现，伴ACA 阳性的SLE 患者血清Th1 细胞因子IFNγ、IL-2 水平低于正常对照组，Th2 细胞因子IL-4、IL-10 水平高于正常对照组，且与CD1c、CD1d 水平显著相关。这可能与CD1 对自身抗原的递呈引发了一个Th2 型应答反应，激活效应细胞快速产生细胞因子有关，而与CD1 分子递呈细菌抗原引发了IFN-γ 的产生和Th1 型应答反应，以利受感染巨噬细胞的清除不同［2-3］。

经有效治疗后的患者CD1c、CD1d 阳性细胞水平很快下降至正常范围，自身抗体的产生及疾病得到有效控制。虽然细胞因子水平也向正常趋势变化，但下降速度较慢且与正常水平仍有较大差距。这些迹象表明，SLE 发病机制中重要的自身抗原递呈分子亢进现象随着有效治疗能很快恢复，但不平衡的细胞因子却在短时间内难以恢复，这也提示SLE 的治疗是个长期缓慢的过程。

［1］Brigl M，Brenner MB.CD1:antigen presentation and T cell function［J］.Annu Rev Immunol，2004，22:817-890.

［2］Yap DY，Lai KN.The role of cytokines in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus-from bench to bedside［J］.Nephrology (Carlton)，2013，18:243-255.

［3］Montamat-Sicotte DJ，Millington KA，Willcox CR，et al.A mycolic acid-specific CD1-restricted T cell population contributes to acute and memory immune responses in human tuberculosis infection［J］.J Clin Invest，2011，121:2493-2503.