HPLC法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量

1.江苏省泰州市姜堰中医院， 江苏 泰州 225500；2.苏中药业集团股份有限公司，江苏 泰州 225500

百部止咳糖浆为泰州市姜堰中医院肺病科与药剂科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支气管炎，小儿百日咳。苦杏仁苷为苦杏仁的主要活性成分，苦杏仁苷经肠道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解产生微量的氢氰酸，对呼吸中枢有抑制作用，该作用与镇咳、平喘效应有关[1]。过量的氢氰酸可引起中毒，抑制细胞呼吸，形成“细胞内窒息”组织缺氧[2]。因此本文采用高效液相色谱法测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖浆的质量控制标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器 SHMADZU日本岛津高效液相色谱仪，检测器为SPD-10AVP，双泵LC-10ATCP，大连依利特色谱工作站。电子分析天平(Max 220g,Min 10mg,e=1mg,d=0.1mg)。

1.2 材料 甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯;苦杏仁苷对照品由中国药品生物制品检定所提供；百部止咳糖浆由江苏省泰州市姜堰中医院提供(批号：20121212、20130217、20130413)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Kromasi C18柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：215nm[3]。在该色谱条件下苦杏仁苷与相邻杂质峰的分离度R>1.5，理论塔板数>3000，基线平稳，阴性样品在此条件下无干扰峰。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度摇匀，制备成0.2mg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取百部止咳糖浆5.0ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液即得供试品溶液。

2.4 线性关系 精密量取上述对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分别至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度摇匀。分别精密量取10μl进样，记录色谱图，以峰面积(A)对质量浓度(C)绘制标准曲线。苦杏仁苷在0.04～0.24mg/ml范围内线性关系良好。回归方程为A=5396.3C+614，r=0.9995。

2.5 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，计算RSD=1.03%，表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一批样品依法制成6份供试品溶液，按上述色谱条件进样10μl，测定峰面积。6次测定结果的RSD=0.95%，表明该方法的重复性良好。

2.7 稳定性实验 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，在上述色谱条件下，分别于0、4、8、12、24h进样，测定峰面积，5次测定的结果RSD=1.01%。结果分析表明，对照品溶液及供试品溶液均在24h内稳定。

2.8 加样回收率实验 精密量取已知含量的上述供试品溶液2.0、1.5、1.0ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分别加入浓度为0.2mg/ml的对照品溶液1.0、0.8、0.6ml，各平行3份，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进行操作测定含量，结果见表1。

2.9 样品的含量测定 取批号为20121212、20130217、20130413百部止咳糖浆的样品，按2.3供试品溶液的制备方法制备样品的溶液，精密吸取该样品溶液10μl进样，测定含量。结果见表2。

表1 加样回收率实验结果

表2 百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量

3 讨论

苦杏仁具祛痰镇咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，为蛋白酶水解产物，其祛痰镇咳、平喘抗炎的作用与苦杏仁的止咳平喘的机理一致。而苦杏仁经加热炮制后，可以杀酶保苷。苦杏仁接触到水，会使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法会影响苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文对苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷进行含量测定，且对苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分离度、方法学的考察，确定了苦杏仁苷在百部止咳糖浆中的质量标准，为百部止咳糖浆中苦杏仁的质量控制提供了实验数据。

本方法还对多种流动相的组成、流速、柱温进行了分析，实验表明当流动相为甲醇-水(20∶80)，柱温25℃，流速1.0ml/min时苦杏仁苷的色谱峰的基线平稳与杂质峰的分离度较好。

2010版中国药典中只有苦杏仁药材中苦杏仁苷的含量测定方法，而没有成品制剂中关于苦杏仁苷的含量测定的方法。但文献中高效液相色谱法检测苦杏仁苷含量的报道较多[4-5]，本试验采用高效液相色谱法方法准确、快速、可靠，可用于测定百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量。

[1]侯家玉，方泰惠．中药药理学[M]．北京：中国中医药出版社．2007：177．

[2]李贵海，刘青，孙付军，等．不同炮制方法对苦杏仁主要药效作用的影响[J]．中成药，2007，29(7)：1031-1034．

[3]钱平，贾芸，刘志辉，等．高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J]．中国中医药信息杂志，2009，16(12)：50-51．

[4]吴迪，王建中，赵云霞，等．苦杏仁苷几种测定方法的比较研究[J]．食品工业科技，2006，27(2)：184-185．

[5]王乾蕾，李运军，余健，等．高效液相色谱法测定清肺合剂中苦杏仁苷含量[J]．中国药业，2008，17(19)：31-32．