固肠止泻丸质量标准研究＊

2014-03-06王兴海陕西中医学院制药厂咸阳712083

陕西中医 2014年9期

王兴海刘力王娟金媛陕西中医学院制药厂（咸阳712083）

固肠止泻丸是陕西中医学院制药厂生产的品种，批准文号为国药准字Z61020796。由乌梅肉、黄连、干姜、木香、延胡索、罂粟壳六味药组成，原标准（部颁标

准WS3-B-3870-98）中仅有显微鉴别和黄连薄层鉴别。为全面有效控制其质量，在原标准基础上，新增处方中木香、延胡索、干姜、罂粟壳、乌梅的TLC检查，并制定了HPLC法测定黄连中盐酸小檗碱含量的方法。

1 仪器与试药 1．1 仪器高效液相色谱仪：岛津LC-10ATvp，SPD-10Avp；KQ-250型超声波清洗仪：功率250，频率40kHz，昆山市超声波清洗仪有限公司；TU-1800PC型紫外可见分光光度计，北京普析通用分析仪器有限责任公司。

1．2 试药盐酸小檗碱对照品（批号110713-200808，供含量测定用）；延胡索对照药材（批号120928-200704）；延胡索乙素对照品（批号0726-9906，供含量测定用）；木香对照药材：（批号171814-200806）罂粟壳对照药材（批号172514-200906）；盐酸罂粟碱对照品（批号171214-200806，供含量测定用）；磷酸可待因对照品（批号171203-200803，供含量测定用）；吗啡对照品（批号171201-200521，供含量测定用）；干姜对照药材（批号120942-200606）；乌梅对照药材（批号121208-200602）熊果酸对照品（批号110742-200716，供含量测定用）。以上标准物质均购自中国药品生物制品检定所。固肠止泻丸原料及成品由陕西中医学院制药厂提供。乙腈为色谱纯，水为超纯水，硅胶G和其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2．1 薄层色谱鉴别 2．1．1延胡索［1］：取本品及缺延胡索阴性对照样品研细后的粉末10g、延胡索对照药材、延胡索乙素对照品，参照中国药典2010年版一部延胡索【鉴别】（2）项下的方法，分别制成供试品溶液、阴性对照品溶液、延胡索对照药材溶液、延胡索乙素对照品溶液，进行薄层鉴别。供试品色谱与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性空白对照无干扰。

2．1．2 木香［2-3］：取本品及缺木香阴性对照样品研细后的粉末各3g、木香对照药材0．3g，分别加乙醚15mL，置水浴上加热回流30min，滤过，滤液低温挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，制成供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液。吸取上述三种溶液各2～3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮（10：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性空白对照无干扰。

2．1．3 罂粟壳［1，4］：取本品及缺罂粟壳阴性对照样品研细后的粉末各15g、罂粟壳对照药材、吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱对照品，参照中国药典2010年版一部罂粟壳【鉴别】（3）项下的方法，分别制成供试品溶液、阴性对照品溶液、罂粟壳对照药材溶液、吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱对照品溶液，进行薄层鉴别。供试品色谱与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性空白对照无干扰。

2．1．4 干姜［2，5］：取本品及缺干姜阴性对照样品研细后的粉末各10g、干姜对照药材，参照中国药典2005年版一部木香【鉴别】（2）项下的方法，分别制成供试品溶液、阴性对照品溶液、对照药材溶液，进行薄层鉴别。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性空白对照无干扰。

2．1．5 乌梅［2］：取本品及缺乌梅阴性对照样品研细后的粉末各10g、乌梅对照药材、熊果酸对照品，参照中国药典2005年版一部乌梅【鉴别】（2）项下的方法，分别制成供试品溶液、阴性对照品溶液、对照药材溶液和对照品溶液，进行薄层鉴别。供试品色谱与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性空白对照无干扰。

2．2 盐酸小檗碱含量测定［1］2．2．1色谱条件：色谱柱：C18色谱柱；流动相：0．05mol／L三乙胺（用磷酸调pH3．0）-乙腈（70：30）为流动相；检测波长为265nm；柱温：室温26℃；流量1．0mL／min；理论塔板数以盐酸小檗碱峰计，不得低于5500。

2．2．2 对照品溶液制备：精密称取干燥（105℃干燥4h）的盐酸小檗碱对照品1．24mg，置一10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并加至刻度，摇匀，作为对照品溶液6号，精密吸取对照品溶液6 1mL 5份，分别置2mL、5mL、10mL、25mL、和50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液5～1号。

2．2．3 供试品溶液制备：精密称取本品粉末（过3号筛）0．1g，置50mL量瓶中，加入流动相40mL，超声处理40min，取出，放凉，加流动相至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液。取续滤液，以0．45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2．2．4 检测波长的确定：精密吸取3号对照品溶液作为供试品溶液，以流动相为空白，在波长200～400nm范围内扫描，结果在228．5nm、264．5nm 和347．0nm波长处均有最大吸收，以264．5nm波长处峰形尖锐，参照中国药典2005年版一部黄柏项下，以265nm为检测波长。

2．2．5 标准曲线的考察：精密吸取1～6号对照品溶液各10μL进样2次，以2．2．1项下色谱条件测定峰面积。以峰面积平均值为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=1997934X＋10234，γ=0．9998，盐酸小檗碱在0．0248～1．240μg范围内呈良好的线性关系。

表1 标准曲线考察结果

2．2．6 精密度考察：精密吸取3、4、5号对照品10μL，各进样5次，测得盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1．52、1．16、1．37，表明方法精密度良好。

表2 精密度考察结果

2．2．7 重复性考察：精密称取试1号样品、试2号样品和110805号样品各0．1g，照2．2．3项下的方法制成供试品溶液。精密吸取供试品溶液和线性关系考察项下3、4、5号对照品溶液各10μL，注入 HPLC仪，照线性考察项下条件测定，计算，结果高中低浓度样品的 RSD分别为0．021%、0．053%、0．119%，表明方法重复性良好。

表3 重复性考察结果

2．2．8 稳定性考察：分别于0、1、2、4、8、12、20和24h精密吸取重复性考察项下同一样品溶液10uL进样，按上述条件测定峰面积，计算变异系数得RSD=0．74%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2．2．9 干扰试验：取空白样品80mg，照2．2．3项下的方法制成阴性对照品溶液。精密吸取阴性对照品溶液10μL，注入 HPLC仪，结果黄连空白溶液色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无对应的色谱峰。

图1 HPLC图 A：对照品；B：供试品；C：阴性对照品

2．2．10 加样回收考察：精密称取试2号样品、110805批号样品0．05g各3份，分别置50mL具塞锥形瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（取4．92mg，置2mL量瓶中，加流动相使溶解，并加至刻度，摇匀）各0．1mL和0．2mL，挥干；另取试1号样品3份0．05g，分别置50mL具塞锥形瓶，精密加入盐酸小檗碱对照品1．3mg。按2．2．3项下的方法制成供试品溶液。精密吸取供试品溶液和线性考察项下3、4、5号对照品溶液各10μL，注入HPLC仪，照线性考察项下条件测定，结果平均回收率为98．90%，RSD=1．38%。