HPLC法测定透骨消痛胶囊中芍药苷的含量

倪立坚，严锦贤，郑笈，刘献祥

（1.福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州350003；2.福建中医药大学，福建福州350122）

透骨消痛胶囊由肿节风、巴戟天、白芍、川芎4味中药组成，用于治疗骨性关节炎（OA）。白芍能滋阴养血，柔肝止痛，与川芎配合，兼顾活血、养血，起到疏肝、柔肝并举的效果。芍药苷是白芍中最重要的成分，本实验通过建立高效液相色谱法测定透骨消痛胶囊中芍药苷含量的方法，达到控制其质量的目的。

1 仪器与试剂

1.1 仪器1100型安捷伦高效液相色谱仪；超纯水器（Mililpore）；超声波发生器（奥特宝恩斯仪器有限公司）。

1.2 对照品及试剂芍药苷对照品（中国药品生物检定所提供，批号：110736-200424）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Novapak C18（250 mm×4.6 mm，4 μm）（大连依特利科学仪器有限公司装填）；流动相：甲醇-0.1%甲酸（25∶75）；检测波长：230 nm；柱温：室温；流速：1 mL/min；进样量：10 μL（自动进样）。理论塔板数：按芍药苷计算不得低于2 000。在以上试验条件下试验，采用DAD检测器检测，结果表明样品和对照品光谱图完全一致，芍药苷在波长230 nm处有最大吸收，同时参考文献资料将检测波长定为230 nm。见图1。

图1 芍药苷光谱图

2.2 提取方法的选择

2.2.1 提取溶剂的考察取样品0.8 g，分别精密加入甲醇、稀乙醇溶剂25 mL超声处理30 min，取续滤液进样，测定2种成分的峰质比。结果表明：用稀乙醇提取的2种成分含量较高。见表1。

表1 不同溶剂提取样品中2种成分的峰质比

2.2.2 提取方法的选择取样品0.8 g，精密加入稀乙醇溶剂25 mL分别超声处理30、45、60 min，及加热回流30、45、60 min，取续滤液进样，测定2种成分的峰质比。结果表明：采取回流提取的方法比超声提取2种成分效果好，回流30 min能将样品中的2种成分提取完全。见表2。

综合以上结果，将提取方法定为用稀乙醇回流30 min。

2.3 溶液制备

2.3.1 对照品溶液制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液制备按2.2.2项下回流法制得供试品溶液。

2.3.3 阴性样品溶液制备取除白芍外处方中药，制作空白样品，并按供试品溶液的制备制得阴性样品溶液。

2.4 专属性试验分别吸取芍药苷对照品溶液、透骨消痛胶囊供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进行测定。阴性样品溶液在与对照品相应的保留时间处，无色谱峰出现，见图2～图4，表明方中其它各味药材不干扰芍药苷的测定。

表2 不同提取方法和提取时间测定样品中芍药苷峰质比

图2 芍药苷对照品

图3 供试品色谱图

图4 白芍阴性样品色谱图

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察配制不同浓度的芍药苷对照品溶液，分别精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，相应的进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：y＝15.945x－60.947，r＝0.9999。结果表明：芍药苷在5.3952～337.2 μg/mL范围内与峰面积呈现良好的线性关系。

2.5.2 稳定性试验取同一供试品溶液室温下放置，分别于0、3、7、10 h进样，按2.1项下色谱条件测定芍药苷峰面积，RSD为1.18%。表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

2.5.3 重复性试验精密称取样品6份，照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，进行6次平行测定，测得芍药苷平均含量为4.87 mg/g，RSD为1.27%。表明该方法重复性良好。

2.5.4 回收率试验取已知含量的同一批号供试品9份，分成3组，采用加样回收试验，每组分别精密加入3个不同浓度的芍药苷对照品，照供试品溶液制备方法制备9份供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算回收率。结果芍药苷平均回收率为104.3%，RSD为1.68%。表明该方法具有较好的加样回收率。

3 讨论

透骨消痛胶囊是根据刘献祥教授用于治疗骨性关节炎的临床经验方研制而成的中药制剂［1-2］。具有补肾柔肝、活血祛风的功效，用于肝肾亏虚型OA，疗效确切［3］。症见关节隐隐作痛或肿胀，屈伸不利，行走不便，腰部酸软，舌淡红苔薄白，脉沉或细。方由巴戟天、杭白芍、川芎等组成。

透骨消痛胶囊是以“肾主骨”、“肝主筋”等中医理论为指导，针对OA病机及治疗认识基础上组方。以补肾作为治疗OA的根本法则并佐以四要：①补肾要养肝，肝肾同源，肝肾同健痹自歼（白芍养血柔肝以助固本）；②补肾要活血；③补肾要止痛，痛解痹自停（白芍能柔肝止痛）；④补肾要祛邪。此外，川芎和白芍两者合用，活血、养血兼顾，疏肝、柔肝并举，使其活血而不伤正，疏肝开郁而不损肝阴。

芍药苷为白芍中最重要的成分，本文通过建立高效液相色谱法测定透骨消痛胶囊中芍药苷的含量来衡量白芍药效的主要物质基础，并进行科学方法考察，结果较为满意，可以作为透骨消痛胶囊的质量控制标准。

［1］ 林木南，刘献祥.透骨消痛方治疗膝骨性关节炎30例［J］.福建中医药，2005，36（4）：15-16.

［2］ 吴追乐，许惠凤，李西海，等.透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞活性的影响［J］.福建中医药大学学报，2012，22（4）：24-27.

［3］ 唐勇，姜杰，孟辉，等.补肾益气行血方治疗膝骨性关节炎44例［J］.时珍国医国药，2005，16（9）：902-903.