养阴生肌散急性毒性及全身过敏性实验研究*

李喜香，刘效栓 ，张小华 ，禚 君，豆金彦，刘军刚，高小恒 ，张 坚 ，张芳丽 ，马 岚 ，郑立娟 ，吴 迪

1甘肃省中医院药学部，甘肃 兰州 730050；2兰州大学基础医学院药理学研究所；3甘肃省新药临床前研究重点实验室

养阴生肌膜是由甘肃省中医院医院制剂养阴生肌散经剂型改革而得，由甘草、冰片、牛黄、青黛、黄柏等药组成，主要用于治疗口腔溃疡［1-2］。为了解其安全性，本研究进行了养阴生肌(膜)散的急性毒性及全身过敏性实验，现报道如下：

1 材料

1.1 动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(18～22)g，SPF级，购自兰州大学实验动物中心，实验动物使用许可证号：SCXK(甘)2009-0004；豚鼠，雌性，体质量(200～300)g，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，实验动物使用许可证号：SCXK(甘)2010-0001。

1.2 药物与试剂 养阴生肌散(甘肃省中医院提供，甘药制字 Z04000835，批号：20111224)；2，4-二硝基氯苯(上海试剂厂生产，批号：97-05-01)；新洁尔灭消毒液 (山东利尔康消毒科技有限公司生产，批号：100901A)；10%卵白蛋白(自制)，取 1mL鸡蛋清，加入9mL生理盐水，混匀后备用；氯化钠注射液(西安京西双鹤药业有限公司生产，批号：020605482)；戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号：F20020915)。

2 方法与结果

2.1 急性毒性实验［3-6］取小鼠50只，按1∶0.7比例设 5个剂量组(0.49、0.34、0.24、0.17、0.12 g/mL)，每组10只。小鼠禁食不禁水12小时，按0.02mL/g灌胃给药。观察小鼠毒性反应症状以及症状出现和消失时间、死亡时间、死亡只数，每4小时做详细记录。连续观察7天，于第7天处死小鼠进行剖检，肉眼观察小鼠各脏器损害情况。

实验结果显示，所有小鼠均未死亡，未能测出LD50。随后将养阴生肌散配成0.6 g/mL浓度，按照上述操作给药进行最大耐受量测试。结果显示小鼠活动自如，饮食、饮水正常，体质量未减轻。按照毒理学评价标准，LD50＞1 000mg/kg，属无毒性物质，本实验剂量增加到12000mg/kg仍未出现毒性，表明养阴生肌散对小鼠安全无毒，结果见表1。

表1 养阴生肌散急性毒性实验结果

2.2 全身过敏性试验［3-5，7］取豚鼠 18只，随机分为生理盐水组、卵白蛋白组和养阴生肌散组，每组6只。生理盐水组腹腔注射生理盐水0.5mL/只，卵白蛋白组腹腔注射10%卵白蛋白0.5mL/只，养阴生肌散组腹腔注射养阴生肌散0.5mL/只，隔日给药，共3次。将每组豚鼠再分为2组，每组3只。其中一组于首次注射受试药物后第14天静脉注射受试药物1mL/只,进行攻击，观察攻击后豚鼠的反应；另一组于首次注射受试药物后第21天同法进行攻击并观察。根据豚鼠全身过敏反应症状进行分级，并对全身过敏反应进行等级评价。

实验结果显示，生理盐水组豚鼠均未出现全身过敏症状，致敏率为0%；卵白蛋白组豚鼠均出现全身过敏症状，致敏率为100%，反应强度为极强阳性，多因过敏性休克死亡；养阴生肌膜组在第14天攻击时有2只豚鼠出现不安、立毛和发抖症状，致敏率为30%，根据全身过敏反应症状等级评价标准判断，养阴生肌散全身过敏反应强度为弱阳性，表明养阴生肌散全身过敏反应症状轻微，见表 2—5。

表2 过敏反应分级及症状

表3 全身过敏反应症状等级评价标准

表4 各组豚鼠全身性过敏反应结果

表5 养阴生肌散全身性过敏反应致敏率

3 讨论

决定一个药物能否用于临床的首要条件是其安全性，本研究对养阴生肌散的安全性进行了考察。急性毒性实验的目的是推测受试药物急性毒性的强弱，同时也可为长期毒性、生殖毒性、致突变等实验提供剂量的选择和有关毒性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间。因此，急性毒性实验对了解未知药物的毒性是非常必要的。经实验，养阴生肌散LD50未测出，按照毒理学评价标准，LD50＞1 000mg/kg，属无毒性物质，本实验剂量增加到12 000mg/kg仍未出现毒性，表明养阴生肌(膜)散对小鼠安全无毒，局部使用安全。

全身过敏反应是机体免疫反应的一种特殊表现。当药物作为抗原或半抗原初次进入体内，通过免疫反应刺激机体产生相应的抗体。当相同药物再次进入体内时，抗原与抗体结合形成抗原-抗体复合物，促使肥大细胞释放组胺等物质，导致组织细胞损伤，从而引起动物局部组织水肿，出现搔鼻、立毛、呼吸困难、窒息、痉挛等症状，严重者甚至出现休克死亡。全身过敏实验用于考察注射用及含特异性蛋白质较多的中草药注射剂，是评价临床用药安全性的指标。

养阴生肌(膜)散的急性毒性实验及全身过敏性实验基本符合规定要求，本实验为临床安全用药提供了依据。

［1］ 国家药典编辑委员会.中华人民共和国药典：二部［M］.北京：化学工业出版社，2010：277.

［2］ 梁爱华，李春英，王金华，等.雄黄的毒性研究［J］.中国中药杂志，2011，36(14)：1889-1894.

［3］ 吕圭源，王一涛.中药新产品开发学［M］.北京：人民卫生出版社，1998：366-376.

［4］ 王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法［M］.上海：上海科学技术出版社，2001：788-808.

［5］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2000：112-119.

［6］ 陈忠伟，刘伟，赵武.复方中药制剂对小鼠的急性毒性试验［M］.中国畜牧兽医，2007，34(6)：112-113.

［7］ 翁谢川，樊星，王青秀，等.药物安全性评价中豚鼠全身过敏试验方法的研究［J］.中国比较医学杂志，2012，22(5)：51-55.