脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌保护作用研究*

李 杏 黄小民 蒋旭宏△ 周晶晶

（1.浙江中医药大学第一临床医学院，浙江 杭州 310053；2.浙江中医药大学附属第一医院，浙江 杭州 310006）

内毒素血症是临床急诊常见的危重病。心肌损伤是内毒素血症的常见并发症，死亡率极高［1］。研究发现脱氢紫堇碱（DHC）有明显的抗心肌缺氧缺血作用，减少心肌细胞钙超载，有效扩张冠状动脉，改善循环、降低耗氧量［2］。本研究旨在探讨DHC防治内毒素血症性心肌损伤的作用机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂 DHC为大连美仑生物技术有限公司产品；脂多糖（LPS）为 Sigma 公司产品；心肌酶（CK）、心肌同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白（TnI）试剂为北京利德曼有限公司产品；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒为杭州诚维生物科技有限公司产品。

1.2 动物及分组 健康雄性Wistar大鼠50只，体质量200～220 g，SPF级，由浙江中医药大学实验动物中心提供。按随机数字随机分为对照组、模型组、DHC低、中、高（2.5、5、10mg/kg）剂量组，每组 10 只。

1.3 造模及给药 采用一次性尾静脉注射LPS溶液的方法，制备大鼠内毒素血症模型。LPS模型组、DHC各组均注射LPS溶液5mg/kg，用生理盐水稀释至1mL。对照组、模型组注射等容积生理盐水。造模结束后，DHC各组予尾静脉注射相应剂量DHC溶液。

1.4 标本采集与检测 给药1 h后25%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取左心室心肌组织，以10%甲醛固定，用于制作常规病理组织切片；腹主动脉取血，分离血清，采用酶学速率法进行测定CK、CK-MB、TnI，根据吸光度的变化，计算出酶的活性。ELISA法测定TNF-α、IL-1β，操作过程严格按试剂盒的说明书进行操作。

1.5 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件包。计量资料以（±s）表示。各组均数比较采用单因素方差分析，均数间两两比较用最小的显著差异法分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

图1 各组心肌组织变化观察

2.1 心肌组织病理学观察 见图1。HE染色后镜下观察提示对照组大鼠心肌细胞结构清晰，心肌纤维完整，排列整齐，未见明显的炎细胞及渗出物。模型组可见心肌细胞水肿明显，心肌纤维结构紊乱，心肌组织内布满炎性细胞，部分坏死灶。DHC低、中剂量组心肌细胞轻度水肿，结构可辨，心肌组织内少量炎性细胞浸润，少量坏死灶；DHC高剂量组心肌细胞水肿情况及坏死状况介于模型组与中剂量组之间。

2.2 血清中CK、CK-MB、TnI含量的测定 见表1。与对照组相比，模型组CK、CK-MB、TnI的含量增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。而在DHC各组中CK、CK-MB、TnI的含量增加相对较少，低、中剂量组与模型组相比差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），而高剂量组与LPS模型组相比差异无统计学意义。

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比较（±s）

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比较（±s）

与对照组比较， *P＜0.05， **P＜0.01； 与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。下同。

组 别 n TnI（μg/L）对照组 10 0.016±0.005模型组 10 0.256±0.018**DHC低剂量组 10 0.116±0.309**##CK（U/L） CK-MB（U/L）1121.1±252.3 924.8±174.6 2216.2±412.1**2007.1±435.9**1802.9±376.7**#1613.0±401.6**#DHC中剂量组 10 0.067±0.012**##1475.7±349.8*##1328.3±362.2*##DHC 高剂量组 10 2035.8±468.3**1741.3±383.9**0.251±0.026**

2.3 血清中TNF-α、IL-1β含量的测定 见表2。与对照组相比较，模型组、DHC干预组的大鼠血清中TNF-α、IL-1β 的含量均有显著增加 （P＜0.01）。 而在DHC低、中、高剂量组中TNF-α、IL-1β的含量增加与模型组相比显著减少（P＜0.01），中剂量减少最明显。

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的测定结果（pg/mL，±s）

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的测定结果（pg/mL，±s）

组 别 n对照组 10模型组 10 DHC低剂量组 10 TNF-α IL-1β 141.45±3.49 29.35±1.62 221.24±7.81** 40.09±1.55**179.48±7.54**## 35.73±1.47**##DHC 中剂量组 10 167.76±7.19**## 32.98±1.38**##DHC 高剂量组 10 189.25±10.77**## 36.93±1.37**##

3 讨 论

研究表明，内毒素血症早期即存在心血管功能异常，临床表现为心室扩张、心肌收缩功能及射血分数降低，并伴有严重外周血管舒张、血容量反应性降低［3］。临床实践中，心肌酶可反映心肌细胞的完整性，故常用心肌酶检测法来测定心肌受损程度。CK、CK-MB及TnI是目前常用的与心肌损害有关的酶学检查，CK主要分布在骨骼肌、心肌中，而CK-MB绝大部分存在于心肌细胞内，心肌以外的组织含量甚微，因而能更特异性的反映心肌损害严重程度；TnI对心肌损伤的敏感性和特异性都较高，是目前诊断心肌损伤的确定标志物，血清心肌酶浓度与心肌损害范围呈正相关。

内毒素血症心肌损伤的机制复杂多样，TNF-α、IL-1β已被证实是内毒素血症发病过程中重要的炎性介质，共同参与脓毒症心肌功能障碍的病理生理改变［3］，其机制主要是通过抑制钙离子转运、刺激病理学NO增多、心肌能量代谢障碍［4］、影响心肌细胞兴奋收缩偶联，使心肌收缩力降低。Calson等［5］发现TNF-α亦能诱导心肌细胞凋亡，从而促进心功能障碍。IL-1β可由内毒素直接刺激产生，也可由TNF-α诱导产生，产生相同的协同作用。

延胡索味苦、辛，性温，归心、肝、脾经，主要功效为活血、行气、止痛，临床多用于气血瘀滞痛证。《雷公炮炙论》称“心痛欲死，速觅延胡”。DHC为其生物碱提取物，为其主要生物碱之一，近代临床多用于心脑血管疾病的治疗。本研究采用DHC干预内毒素血症心肌损伤大鼠，实验表明DHC低、中、高剂量组均能显著降低TNF-α、IL-1β含量，但在心肌损伤方面，低、中剂量组明显降低心肌酶的表达，对内毒素心肌损伤有保护作用，其保护机制可能与下调炎症因子TNF-α、IL-1β有关，提示抑制炎症因子可以很好的保护心肌组织。高剂量组并没有降低心肌酶的表达，其作用机制还不明确，有待进一步研究。

［1］ Angus DC，Linde-ZwirbleWT，Lidicker J，etal.Epidemiology of severe sepsis in the United States： analysis of incidence，outcome， and associated costs of care［J］.Crit Care Med，2001，29：1303-1310.

［2］ 李杏，蒋旭宏，黄小民.脱氢紫堇碱的研究概况［J］.中国中医急症，2013，22（12）：2076-2078.

［3］ Prabhu SD.Cytok ine-inducedm odu lat ion of card iac function［J］.Circ Res，2004，95（12）： 1140-1153.

［4］ Merx MW，Weber C.Sepsis and the heart［J］.Circulation，2007，116（7）：793-802.

［5］ Carlson DL，Willis MS，White DJ， et al.Tumor necrosis factor-alpha-induced caspase activationmediates endotoxinrelated cardiac dysfunction［J］.Crit Care Med，2005，33（5）：1160-1162.