Syk和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移的关系

张喜凤 赵红兵 (商丘医学高等专科学校，商丘476100)

Syk和VEGF-C在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移的关系

张喜凤 赵红兵①(商丘医学高等专科学校，商丘476100)

目的:探讨VEGF-C和Syk在乳腺癌中的表达与淋巴结转移的关系。方法:应用免疫组织化学方法，检测40例乳腺浸润性导管癌、10例乳腺纤维腺瘤、10例正常乳腺组织Syk和VEGF-C的表达，分析其与淋巴结转移的关系。结果: VEGF-C在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40);Syk在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为100%(10/10)，100%(10/10)，37.5%(15/40)。VEGF-C表达与肿瘤直径、组织学分级无显著相关(P＞0.05;P＞0.05)，与淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Syk表达与肿瘤直径、组织学分级无显著相关(P＞0.05;P＞0.05)，与淋巴结转移呈显著相关(P＜0.05);Syk与VEGF-C间差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:Syk和VEGF-C参与了乳腺癌的淋巴道浸润、转移，可能是判断预后的重要指标。

乳腺癌;Syk;VEGF-C

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤，转移是主要的死亡原因。大量临床和实验数据证实:癌和癌周淋巴管增生为肿瘤细胞远处转移提供了便利条件。脾酪氨酸激酶(Syk)是目前公认的候选抑癌基因，在多种癌组织中不表达或低表达，研究认为Syk是内皮细胞生长的重要调控因子。血管内皮生长因子-C (VEGF-C)作为第一特定淋巴管生成的因素，在乳腺癌淋巴管增生中作用重要，其分子机制是否与Syk表达有关联，目前相关研究很少。本研究采用免疫组织化学方法，检测乳腺癌中Syk、VEGF-C的表达及其与淋巴结转移的关系，探讨二者在乳腺癌转移中是否存在内在联系，进一步发现乳腺癌的生物学特性，指导临床诊断和治疗。

1 材料与方法

1.1 标本 40例乳腺浸润性导管癌、10例乳腺纤维腺瘤、10例正常乳腺组织收集于商丘市第一人民医院2009年3月至2010年3月手术切除或活检标本，年龄33～75岁，中位年龄(50±1.2)岁。患者术前均未接受过化疗、放疗及免疫治疗。所有手术切除标本均经4%甲醛溶液固定、石蜡包埋、连续切片，用于组织病理学诊断和免疫组化检查。

1.2 试剂 一抗分别为:兔抗人VEGF-C多克隆抗体，兔抗人Syk多克隆抗体，S-P免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒均为北京中杉金桥生物技术开发有限公司产品。

1.3 免疫组织化学 采用S-P法。常规免疫组化染色，DAB显色。以 PBS代替一抗作阴性对照，分别用已知的阳性片作阳性对照。

1.4 统计学分析 统计学采用SPSS13.0统计软件处理，各组间的比较采用χ2检验，检验标准为α=0.05。

2 结果

2.1 VEGF-C蛋白表达 VEGF-C主要在细胞质着色(图1)。在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40)，乳腺癌与正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤组间差异有统计学意义(P＜0.05;P＜0.05)。

表1 VEGF-C、Syk与临床病理因素的关系Tab.1 Relationship between expression of VEGF-C，Syk and clinicopathological factors in breast cancer

2.2 Syk蛋白表达 Syk主要在细胞质着色(图2)。在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为 100%(10/10)，100%(10/10)，37.5% (15/40)，乳腺癌与正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤组织间差异有统计学意义(P ＜0.05;P ＜0.05)。

2.3 VEGF-C、Syk与临床病理因素的关系 见表1。

2.4 VEGF-C、Syk蛋白表达的相关性 具体见表2。

3 讨论

Syk(Spleen tyrosine kinase)蛋白分子量为72 kD，有629个氨基酸，是非受体型蛋白酪氨酸激酶。研究认为:酪氨酸蛋白激酶是一组酶分子，催化蛋白酪氨酸残基磷酸化，与多个信号转导途径相关，控制细胞分化、增殖和扩散，是内皮细胞生长的重要调控因子。Coopman等[1]首次报道乳腺癌中Syk阳性表达率低于非癌组织(P＜0.01)，认为Syk可能抑制乳腺癌发生发展。本研究结果显示:在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为100%、100%、37.5%，乳腺癌与正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤组间差异有统计学意义(P＜0.05;P＜0.05)。多个研究认为:Syk表达与乳腺癌年龄、组织学分级、肿瘤大小和深度无关，淋巴结转移组与无淋巴结转移组间差异有统计学意义。本研究显示: Syk表达与乳腺癌组织学分级、肿瘤大小无关(P＞0.05;P ＞0.05)，与淋巴结转移有关(P ＜0.05)，与文献报道一致。

表2 乳腺癌组织中VEGF-C、Syk表达的关系Tab.2 Relationship of expression of VEGF-C，Syk in breast cancer

图1 不同组织中VEGF-C蛋白表达情况(SP，×200)Fig.1 VEGF-C protein expression in different breast tissue(SP，×200)

血管内皮生长因子-C(VEGF-C)作为第一特定淋巴管生成的因子，可调控肿瘤血管生成、淋巴管生成，它通过与血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)结合，磷酸化VEGFR-3酪氨酸激酶，导致瘤内或瘤周的淋巴管增生、扩张，为癌细胞扩散打下基础。韩艳春[2]等研究显示:VEGF-C在乳腺浸润性导管癌组织中高表达(67.0%)，明显高于癌旁正常组织。Zhao等[3]研究显示:乳腺癌VEGF-C表达明显高于乳腺良性肿瘤。Wu等[4]研究显示:乳腺癌VEGF-C表达率较正常上皮组织高 (80.5%，46.3%，P＜0.01)。本实验结果显示:VEGF-C蛋白表达在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌中的阳性表达率分别为 0%(0/10)，30.0%(3/10)，77.5%(31/40)，与文献报道一致。韩艳春[2]等研究显示:VEGF-C在伴有淋巴结转移组中的表达高于无淋巴结转移组(P=0.005);Western blot证实，VEGF-C 在有淋巴结转移组中表达高于无淋巴结转移组。本实验结果显示:VEGF-C在伴有淋巴结转移组中的表达高于无淋巴结转移组(P＜0.05);与肿瘤直径和组织学分级无关(P ＞0.05;P ＞0.05)。

Abtahian等[5]动物实验研究结果提示:在淋巴管生成过程中，Syk是内皮细胞生长的重要调控因子。陈贤亮[6]、张大坤等[7]研究结果为:Syk 在有淋巴结转移组中低表达，无淋巴结转移组高表达。Syk蛋白表达与VEGF-C蛋白表达呈负相关，认为Syk基因可能通过抑制NF-κB的活性下调VEGF-C活性，进而抑制乳腺癌的淋巴结转移。本研究结果显示:Syk蛋白表达与VEGF-C蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05)。淋巴结转移组Syk蛋白表达缺失，VEGF-C蛋白高表达，与上述研究结果相符。Syk蛋白正常表达可能下调VEGF-C蛋白表达，阻滞癌组织淋巴管和毛细血管新生，进而抑制了乳腺癌细胞通过淋巴管道转移，提示Syk为乳腺癌的抑癌基因。

总之，根据近年来的基因协同假说，在乳腺癌的癌细胞迁徙和转移中，Syk和VEGF-C可能起协同作用，可作为判断预后的重要指标。

[1]Coopman PJ，Do MT，Barth M，et al.The Syk tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells[J].Nature，2000，406(8):742-747.

[2]韩艳春，刘鲁英，张 骞，等.乳腺癌组织中 VEGF-C和p38 MAPK的表达及与伴淋巴结转移的关系[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2013，22(1):20-25.

[3]Zhao YC，Ni XJ，Li Y，et al.Peritumoral lymphangiogenesis induced by vascular endothelial growth factor C and D promotes lymph node metastasis in breast cancer patients[J].World J Surg Oncol，2012，20(10):165.

[4]Wu QW，She HQ，Liang J，et al.Expression and clinical significance of extracellular matrix protein 1 and vascular endothelial growth factor-C in lymphatic metastasis of human breast cancer[J].BMC Cancer，2012，27(12):47.

[5]Abtahian F，Guerriero A，Sebzda E，et al.Regulation of blood and lymphatic vascular separation by signaling proteins SLP-76 and Syk[J].Science，2003，299(5604):247-251.

[6]陈贤亮，李 良，张雅洁.Syk基因对乳腺癌血管内皮生长因子-C表达的调控作用[J].中华病理学杂志，2011，40(12): 805-809.

[7]张大坤，徐建中，付晓君，等.Syk与VEGF-C在乳腺癌中的表达及临床意义[J].解剖与临床，2012，17(6):474-476.

[收稿2013-09-21 修回2013-11-11]

(编辑 张晓舟)

Syk and VEGF-C in breast cancer's expression with lymph node metastasis

ZHANG Xi-Feng，ZHAO Hong-Bing.Shangqiu Medical School，Shangqiu 476100，China

Objective:To explore the relationship of Syk and VEGF-C expression in breast cancer with lymph node metastasis.MethodsThe expression of Syk and VEGF-C in 40 cases of breast cancer were determined using immunohistochemistry assay.Then，the positive rates of Syk and VEGF-C were compared with lymph node metastasis.ResultsThe expression rate of VEGF-C and Syk in breast cancer was respectively 77.5%(31/40)，37.5%(15/40).VEGF-C protein expression was not significant related with the tumor diameter(P ＞0.05)and histological grade(P ＞0.05)，but was significantly associated with lymph node metastasis(P ＜0.05).Syk protein expression was not significant related with tumor diameter(P ＞0.05)and the histological grade(P ＞0.05)，and was associated with lymph node metastasis(P ＜0.05).The difference of Syk and VEGF-C had statistics significance(P ＜0.05).ConclusionSyk and VEGF-C involved in the lymphatic invasion and metastasis，may be an important indicator of prognosis.

Breast cancer;Syk;VEGF-C

R737.9

A

1000-484X(2014)05-0681-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.025

①郑州大学第一临床医院，郑州450052。

张喜凤(1969年－)，女，副教授，主要从事乳腺癌、宫颈癌方面的研究，E-mail:zhbzxfzzy@126.com。