雷公藤多甙对老年大鼠肾小球肾炎的疗效及炎症指标的影响

刘 珊 刘伦志 覃智慧 杨晓芬 (湖北民族学院附属民大医院肾内科，恩施 445000)

雷公藤多甙对老年大鼠肾小球肾炎的疗效及炎症指标的影响

刘 珊 刘伦志 覃智慧 杨晓芬 (湖北民族学院附属民大医院肾内科，恩施 445000)

目的:观察雷公藤多甙对老年大鼠肾小球肾炎的疗效及炎症指标的影响。方法:将老年清洁级Wistar大鼠(18月龄)随机分为雷公藤组、对照组、模型组，在雷公藤组及模型组大鼠上建立系膜增生性肾小球肾炎模型，雷公藤组采用雷公藤干预。结果:实验12周后，模型组及雷公藤组大鼠24 h尿蛋白均显著高于实验前及对照组水平(P＜0.05);雷公藤组24 h尿蛋白显著小于模型组(P＜0.05)。实验12周后，模型组及雷公藤组TG、TC均显著高于对照组(P＜0.05)，同时ALB显著低于对照组(P＜0.05)。雷公藤组大鼠TG及TC显著低于模型组(P＜0.05)，但ALB显著高于模型组(P＜0.05)。实验12周后，雷公藤组大鼠肾脏病理分级为0～1级的比例显著高于模型组(χ2=6.667，P=0.010)。实验12周后，与对照组及雷公藤组相比较，模型组肾小球系膜TNF-α及IL-6表达量显著升高(P＜0.05)。结论:雷公藤多甙可以抑制老年肾小球肾炎大鼠肾小球系膜内炎症因子的表达，改善组织学表现及临床症状。

肾小球肾炎;老年大鼠;雷公藤多甙;炎症因子

系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis，MsPGN)是一种原发性肾脏自身免疫性疾病，其病理学特征为弥漫性肾小球系膜细胞增生及不同程度系膜基质增多[1]。MsPGN发病机制尚不十分明确，且无特效治疗方法，疾病呈现进行性发展[2]，是各种原发性肾脏疾病中较为常见的一种。但多数免疫抑制剂药物对老年肾小球肾炎患者治疗效果较差[3]。雷公藤多甙是一种具有抗炎、免疫抑制作用的中药提取物，被用于治疗肾小球肾炎多年[4]。我们尝试在大鼠肾小球肾炎模型鼠上采用雷公藤多甙治疗，以期为临床研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选择清洁级Wistar大鼠30只，体重(200±30)g，雌雄对半。采用标准大鼠饲料喂养至18月龄(老年大鼠)。随机分为模型组、对照组、雷公藤组，每组10只。

1.2 肾小球肾炎模型制备 将模型组及雷公藤组大鼠建立慢性系膜增生性肾小球肾炎模型。具体方法为:切除大鼠右侧肾脏(诱导残余肾形成高滤过、高灌注、高跨膜压状态)，对照组行开腹手术但不切除肾脏。术后大鼠修养1周。模型组及雷公藤组大鼠接受弗氏佐剂(0.1 ml)及阳离子化牛血清白蛋白

(C-BSA)3 mg足垫皮下注射，1、2周末加强2次。第3周末，腹腔内注射C-BSA 4次，剂量分别为0.5、1.0、1.5、3.0 mg，次日再加强注射 2.0 mg。此后每日注射C-BSA，逐步增加剂量(每日增加0.5 mg)至5.0 mg/日，继而每周增加剂量1 mg/日至10 mg/日为止。对照组大鼠给予相应剂量生理盐水注射。

1.3 药物干预 雷公藤组大鼠自造模第5周起进行药物干预。具体方法为:每日雷公藤多甙片[24 mg/(kg·d)]，溶于水后灌胃。

1.4 尿蛋白及血生化测定 于实验开始前1日及处死大鼠前1日(第12周)将大鼠置于金属代谢笼收集24 h尿液。24 h尿蛋白=尿蛋白浓度×24 h尿量。处死大鼠时通过腹主动脉采血，冻存待测。检测指标包括:尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、白蛋白(ALB)。

1.5 组织学观察 处死大鼠时摘取肾脏行HE染色，光镜下观察大鼠肾脏病理并分级。具体分为4级:0级:正常;Ⅰ级:系膜增生呈现阶段性分布，但宽度小于毛细血管直径;Ⅱ级:系膜增生呈现弥漫性分布，宽度大于毛细血管直径;Ⅲ级:系膜增宽呈现弥漫状分布，且呈现团块状聚集。

1.6 肾小球系膜炎症因子表达 处死大鼠后留取肾小球系膜组织采用Western blot检测系膜组织肿瘤坏死因子 α(TNF-α)及白介素6(IL-6)的表达。

1.7 统计学方法 数据采用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料以x-±s表示，比较采用t检验。率的比较使用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组24 h尿蛋白定量测定 详细情况见表1。对照组实验前及实验12周时24 h尿蛋白定量测定无显著差异(P＞0.05)。实验前3组大鼠24 h尿蛋白定量检测相比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。12周后，模型组及雷公藤组大鼠24 h尿蛋白均显著高于实验前及对照组水平(P＜0.05);雷公藤组24 h尿蛋白显著小于模型组(P＜0.05)。

2.2 各组肾功能、血脂、血浆蛋白水平的比较 详见表2。实验12周后，3组大鼠在BUN及Scr上比较差异无统计学意义(P＞0.05)。模型组及雷公藤组TG、TC均显著高于对照组(P＜0.05)，同时ALB显著低于对照组(P＜0.05)。雷公藤组大鼠TG及TC显著低于模型组(P＜0.05)，但ALB显著高于模型组(P ＜0.05)。

2.3 各组大鼠肾脏病理分级 各组大鼠肾脏病理组织图片见图1(H＆E染色)，病理分级见表3，实验12周后，雷公藤组大鼠肾脏病理分级为0～1级的比例显著高于模型组，差异具有统计学意义(χ2= 6.667，P=0.010)。

2.4 各组大鼠肾小球系膜TNF-α及IL-6的表达

与对照组及雷公藤组相比较，模型组肾小球系膜TNF-α及IL-6表达量显著升高，见图2。

表1 各组24 h尿蛋白定量测定(mg/d)Tab.1 Determination of 24 h urine protein quantitative in each group(mg/d)

图1 各组大鼠肾脏病理Fig.1 Renal pathology of each group

表2 各组肾功能、血脂、血浆蛋白水平的比较Tab.2 Compare of renal function，blood fat and plasma proteins among three groups

表3 各组大鼠肾脏病理分级Tab.3 Classification of renal pathology in each group

图2 各组大鼠肾小球系膜TNF-α及IL-6的表达Fig.2 Compare of levels of TNF-α and IL-6 in glomerular mesangial among three groups

3 讨论

本研究尝试在老年大鼠上模拟系膜增生性肾小球肾炎，并采用雷公藤多甙进行干预，旨在为老年肾小球肾炎的临床研究提供参考。在动脉模型建立上借助单侧肾脏切除的方法建立残存肾脏的高滤过、高跨膜压、高灌注状态，这缩短了动物模型建立所需时间。同时使得原本分布于双侧肾脏的循环免疫复合物集中于单侧残余肾，其临床及免疫学指标改变更为明显。该动物模型的组织学改变、临床症状与人肾小球肾炎极为相似，符合我们的实验要求。

老年肾小球肾炎患者对药物的耐受性较差，反应欠灵敏[5]。雷公藤多甙是从中药雷公藤中提取的单体物质，其具有较强的免疫抑制、抗炎等作用。其在临床上被广泛用于治疗风湿性疾病、系统性红斑狼疮、炎症性肠病及肾炎[6]。有研究表明其可以延缓肾小球硬化、减轻肾小球肥大[7]。在提高肾小球血流量的同时，不增加肾小球内压力[7]。免疫学研究表明，雷公藤多甙通过多种途径抑制免疫应答反应，其可以诱导CD4+T淋巴细胞凋亡，激活抑制性T淋巴细胞。CD4+T淋巴细胞数量及功能受到抑制后，其下游的IL-6及TNF-α表达量将会下降[8]。从而减轻肾脏内过度的炎症反应，减缓疾病的进程。理论上，雷公藤是治疗肾小球肾炎的理想药物[9]。

我们的研究显示，12周后，模型组及雷公藤组大鼠24 h尿蛋白均显著高于实验前及对照组水平，而雷公藤组24 h尿蛋白显著小于模型组。尿蛋白量是衡量肾脏受损的主要临床指标，这说明雷公藤在改善老年肾小球肾炎大鼠的临床症状上具有确切疗效。在实验12周后，模型组及雷公藤组TG、TC均显著高于对照组，同时ALB显著低于对照组。雷公藤组大鼠TG及TC显著低于模型组，但ALB显著高于模型组。这说明雷公藤在改善肾小球肾炎大鼠肾功能的同时，具有维持营养状况及调节血脂的作用。进一步组织学分析发现，实验12周后雷公藤组大鼠肾脏病理分级为0～1级的比例显著高于模型组。分子学研究发现，雷公藤组大鼠肾小球系膜TNF-α及IL-6表达量显著低于模型组，与对照组相比无显著差异。这提示我们，雷公藤可能通过抑制系膜内炎症因子的表达而减轻肾脏内过度炎症反应。

综上所述，我们的研究显示雷公藤多甙可以抑制老年肾小球肾炎大鼠肾小球系膜内炎症因子的表达，改善组织学表现及临床症状。

[1]Liu H，Zhang XP，Yi ZW.Efficacy of antisense monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)in a rat model of mesangial proliferative glomerulonephritis[J]. Ren Fail，2013，35(10): 1418-1428.

[2]Kosaka S，Osada S，Kaneko T，et al.Cutaneous vasculitis and glomerulonephritis associated with C4 deficiency[J].Clin Exp Dermatol，2013，38(5):492-495.

[3]Fujiwara T，Komatsuda A，Ohtani H，et al.Proliferative glomerulonephritis with monoclonal IgG deposits in a patient with autoimmune hemolytic anemia[J].Clin Nephrol，2013，79(6): 494-498.

[4]Ren J，Wu X，Liao N，et al.Prevention of postoperative recurrence of Crohn′s disease:Tripterygium wilfordii polyglycoside versus mesalazine[J].J Int Med Res，2013，41(1):176-187.

[5]Fang W，Peng F，Yi T，et al.Biological activity and safety of Tripterygium extract prepared by sodium carbonate extraction[J].Molecules，2012，17(9):11113-11123.

[6]Li CJ，Xie FG，Yang JZ，et al.Two sesquiterpene pyridine alkaloids and a triterpenoid saponin from the root barks of Tripterygium hypoglaucum[J].J Asian Nat Prod Res，2012，14(10): 973-980.

[7]Xue M，Jiang ZZ，Wu T，et al.Protective effects of tripterygium glycoside-loaded solid lipid nanoparticles on male reproductive toxicity in rats[J].Arzneimittelforschung，2011，61(10):571-576.

[8]Fu Y，Zhao Z，Wu Y，et al.Therapeutic mechanisms of Tongmai Dasheng Tablet on tripterygium glycosides induced rat model for premature ovarian failure[J].J Ethnopharmacol，2012，139(1): 26-33.

[9]Li J，Lu Y，Xiao C，et al.Comparison of toxic reaction of Tripterygium wilfordii multiglycoside in normal and adjuvant arthritic rats[J].J Ethnopharmacol，2011，135(2):270-277.

[收稿2014-01-10 修回2014-02-19]

(编辑 倪 鹏)

Analyse curative effect and immune indices of tripterygium glycosides on aged glomerulonephritis rats

LIU Shan，LIU Lun-Zhi，TAN Zhi-Hui，YANG Xiao-Fen.Renal Department of Internal Medicine，Hubei Institute for Nationalities Affiliated People Hospital，Enshi 445000，China

Objective:To analyse the curative effect and immune indices of tripterygium glycosides on glomerulonephritis rats.MethodsAged Wistar rats were randomly divided into 3 groups，Group A:glomerulonephritis model rats

tripterygium glycosides treatment;Group B:healthy Wistar rats received no treatment;Group C:glomerulonephritis model rats received no treatment.Results12 weeks after experiment，Group A and Group C had higher levels of 24-hour urine protein than Group B and these of preexperiment(P ＜0.05).Group A had a lower level of 24-hour urine protein than Group C(P ＜0.05).Group A and Group C had higher levels of TG，TC than Group B，with lower levels of ALB than Group B(P ＜0.05).Group A had lower levels of TG，TC than Group C，but a higher level of ALB than Group C(P ＜0.05).Group A had a higher rate of 0-1 grades in pathology grade than group C(χ2=6.667，P=0.010).Group C had higher levels of TNF-α and IL-6 than Group B and Group A(P ＜ 0.05).ConclusionTripterygium glycosides can reduce the urine protein excretion of rats that with mesangial proliferative glomerulonephritis，rectify dyslipidosis，raise plasma-albumin，decrease the protein expression of TNF-α and IL-6 in glomerulus.

Glomerulonephritis;Aged rats;Tripterygium glycosides;Inflammatory factor

R392.9 R364.7

A

1000-484X(2014)05-0627-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.012

刘 姗(1979年-)，女，主治医师，主要从事肾小球肾炎的诊治方面研究，E-mail:huanghuaying_es@163.com。

·生物治疗·