小鼠肝脏大部分切除后改良再生模型的建立

施国明 蔡加彬 俞静娴 柯爱武 董兆如 张弛 张鹏飞 邱双健 孙惠川 周俭 樊嘉

(复旦大学附属中山医院肝外科，上海 200032)

小鼠肝脏部分切除(partial hepatectomy，PH)模型是研究肝脏再生、急性肝损伤及肝肿瘤发生等的常用模型。此类模型的理想要求是:动物存活率高、可操作性强、重复性好、操作时间短等［1-4］。目前，国际上采用显微技术切除小鼠2/3肝脏的成功率为96%［5-6］。本研究在传统结扎法基础上制作小鼠肝脏大部分切除的改进型模型，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 实验材料 戊巴比妥钠(美国Sigma公司);6-0 proline缝线(美国强生生物公司)。

1.2 实验动物 8～10周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠50只(上海斯莱克实验动物有限责任公司)，体质量(30±2)g，随机分为实验组(n=30)、对照组(n=10)和空白组(n=10)。小鼠于恒温(21～22℃)动物房中饲养，实验期间小鼠自由饮食及饮水。

1.3 手术操作方法 用0.9%氯化钠溶液配制1%的戊巴比妥钠溶液，腹腔注射10 μL/g麻醉小鼠，将麻醉后的小鼠取仰卧位固定于手术台，腹部剃毛，用聚维酮碘消毒。用剪刀沿小鼠两下肋弓连线(腹部中部)偏左的位置横行剪开2.0～3.0 cm切口，全层切开腹壁，如腹壁动脉出现活动性出血，则用6-0 proline缝线缝扎止血;助手用眼科镊向上轻轻牵引肋弓，并剪离肝镰状韧带;用干棉签轻轻牵引肝左外叶、肝中叶，用眼科剪离断肝胃韧带、左外叶与右侧膈肌韧带、肝左外叶与右肾间的肝肾韧带等，最后完全游离肝左外叶和肝中叶;用6-0 proline缝线经肝中叶与肝右叶间的肝裂隙环绕肝左外叶和肝中叶的共同肝蒂，用6-0 proline缝针在肝蒂上方0.2 cm处穿右中叶肝表面，并用缝线结扎肝蒂，待肝左外叶和肝中叶颜色变暗红，在结扎线上方0.2 cm处切除小鼠肝脏的左外叶、左中叶和右中叶;检查肝切面有无渗血;用3-0尼龙线将小鼠腹肌、皮肤逐层缝合，消毒切口，皮下注射0.5 mL 0.9%氯化钠溶液。将手术后的小鼠采取右侧卧位，置于干燥柔软的纱布之上，在37℃的热板上复温至小鼠苏醒。术后3 d、7 d、14 d，分别取10只小鼠，用1%戊巴比妥钠溶液麻醉后处死，观察肝脏再生情况、称肝脏质量;观察术后14 d时小鼠存活情况。对照组小鼠的处理:开腹，用眼科剪游离与肝脏相连的韧带后，对小鼠进行切口缝合消毒，术后7 d处死。空白组小鼠处理:未行手术处理，直接麻醉后处死，观察肝及各肝叶质量。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16软件进行统计学处理。计量资料用表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 小鼠肝脏大部分切除术后存活情况 成功制作改良C57BL/6小鼠肝脏大部分切除模型。小鼠肝总质量(1.5±0.04)g;其中，肝左外叶和肝中叶(包括肝右中叶、肝左中叶)质量(1.0 ±0.02)g，占肝总质量的66.7%。因此，切除小鼠肝左外叶和肝中叶可以制备肝大部分切除模型。在小鼠肝大部分切除的手术过程中及手术后14 d内，小鼠存活率100%(30/30)。

2.2 小鼠肝再生情况 小鼠肝左外叶和肝中叶切除后，小鼠肝脏质量逐渐增加，术后第3天小鼠肝质量达原肝总质量的58.2%，术后第7天小鼠肝质量达原肝总质量的78.0%，术后第14天小鼠肝质量恢复至切除前原肝总质量的93.2%。

3 讨 论

制备小鼠肝脏大部分切除后再生模型是研究肝脏再生的基础，目前国内外报道有4种小鼠肝脏大部分切除后再生模型的制备方法，包括传统大部结扎法［7］、止血夹法［8］、基于血管定位的肝实质保留法［9］和基于血管定位的显微手术法［10］。这些模型各具特点，其中以传统大部结扎法最为经典和常用。Mitchell等［7］在传统大部结扎法中分步依次切除肝左外叶和肝中叶，小鼠手术死亡率为零，但这种方法操作时间较长(15～20 min)。当肝中叶和左外叶一并结扎时，该方法易致下腔静脉狭窄和肝脏充血，小鼠手术死亡率较高。止血夹法，即在传统结扎法中用钛金属止血夹代替丝线，虽然手术时间明显缩短，但仍可能引起下腔静脉狭窄和肝脏充血，导致小鼠手术中死亡。血管定位的肝实质保留法和显微手术法虽然可显著降低因结扎导致的下腔静脉阻塞的风险，与临床肝段切除术更接近，但这两种手术方法需要显微外科设备，技术要求较高，且手术耗时较长，不易推广。

本研究在传统大部结扎法的基础上，采用6-0 proline缝线环绕肝左外叶和肝中叶的共同肝蒂，并穿肝右中叶浅部固定绕肝蒂线，结扎并切除肝左外叶和肝中叶。这一技术的优点在于:(1)既可以避免传统结扎法因结扎位太高而导致的下腔静脉狭窄，又可以防止因结扎线脱落致大出血，小鼠的成活率100%;(2)结扎一步完成，操作简单，耗时短(10～12 min);(3)不需显微器械和技术，易于推广。这项技术的缺点是术中用6-0 proline缝线代替传统大部结扎法应用的丝线，成本相对较高。

本研究发现，切除小鼠肝左外叶和肝中叶后，肝脏出现代偿性增生，术后第7天可恢复至原肝总质量78.0%，术后14天恢复至原肝总质量93.2%。因此，本研究建立的小鼠肝脏大部分切除后再生模型完全符合肝脏再生研究的要求，可应用于肝再生及肝肿瘤发生的分子机制研究。

［1］Ding BS，Nolan DJ，Butler JM，et al.Inductive angiocrine signals from sinusoidal endothelium are required for liver regeneration［J］.Nature，2010，468(7321):310-315.

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