干化学酶法检测阴道分泌物诊断阴道炎的价值

夏 东，王成浩，苏 倩

(安徽医科大学第二附属医院，合肥230601)

阴道分泌物检查是检测女性泌尿生殖道健康水平的一个重要项目，目前主要采用常规镜检法，但该法存在明显的影响因素，如检测人员经验、阴道分泌物涂片质量等，都会影响检验结果的准确性。近年来，基于干化学酶法的研究成果——阴道炎五联检，结合pH，可间接反映阴道分泌物中乳酸杆菌、白细胞、厌氧菌、念珠菌和滴虫等的状况。但该法能否作为各种阴道炎(如细菌性、念珠菌性和滴虫性)的诊断依据，还有待进一步论证。为此，我们对干化学酶法阴道炎五联检与常规镜检法检测阴道分泌物的结果进行比较。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选择2013年7～9月在我院行阴道分泌物检查者978例，年龄17～55岁。用无菌拭子收集的患者阴道后穹窿分泌物。主要仪器及试剂:奥林帕斯显微镜、联检分析仪woMOI(安图实验仪器公司)、SHW-200恒温干浴器(恒丰仪器制造有限公司)、生理盐水、10%氢氧化钾及阴道炎五联检试剂盒(郑州安图生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 镜检方法 以常规镜检法作为金标准。阴道分泌物涂湿片，显微镜下观察清洁度、乳酸杆菌、白细胞、线索细胞、滴虫、念珠菌，并通过革兰染色进行确认。结果按以下标准进行判读:乳酸杆菌，革兰阳性长杆菌＜6个/HP为阴性，革兰阳性长杆菌≥6个/HP为阳性;白细胞，≥15个/HP为阳性，＜15个/HP为阴性;细菌性阴道炎(BV)，每视野线索细胞＜20%为阴性，≥20%为阳性;念珠菌，随机镜检10个高倍镜视野，未见念珠菌孢子或菌丝为阴性，有念珠菌孢子及或菌丝为阳性;滴虫，随机镜检10个高倍镜视野，未见滴虫为阴性，有滴虫为阳性［1］。

清洁度分级以常规镜检为标准，分级标准:Ⅰ级:杆菌多，球菌阴性，上皮细胞满视野，白细胞0～5个/HP;Ⅱ级:杆菌中量，球菌少量，上皮细胞占1/2视野，白细胞6～15个/HP;Ⅲ级:杆菌少，球菌多，上皮细胞少量，白细胞16～30个/HP;Ⅳ级:杆菌阴性，球菌大量，上皮细胞阴性，白细胞 ＞30个/HP［2］。Ⅰ ～Ⅱ级判定为正常，Ⅲ ～Ⅳ级判定为异常。常规镜检检出滴虫和真菌认为是滴虫性阴道炎或真菌性阴道炎。

1.2.2 阴道分泌物五联检方法 严格按照说明书进行操作。具体步骤:取一加样试管滴稀释液6～8滴，将取有分泌物的棉拭子置于该试管内，充分刷洗后，用手指挤压试管壁，使棉拭子吸收的液体充分回流试管。取出连卡检，用吸管在每孔内加1滴样本液，在唾液酸苷酶反应孔滴加显色液，37℃温箱15 min，在乙酰氨基葡萄糖苷酶孔加终止液，上机检测自动判读结果。正常:所有指标均阴性;BV:唾液酸苷酶阳性和(或)脯氨酸氨基肽酶阳性，乙酰氨基葡萄糖苷酶阴性;念珠菌性阴道病:pH≤4.6，乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性;滴虫性阴道病:pH≥4.8，乙酰氨基葡萄糖苷酶阳性。细菌性、念珠菌或滴虫性以外的阴道炎:过氧化氢阳性，白细胞酯酶阳性。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法清洁度检测结果比较 相对于显微镜法，干化学酶法对Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级标本的分级正确率分别为 63.1% 和 59.7%(χ2=5.83，P ＜0.05)。见表1。

表1 两种方法清洁度分级符合情况(例)

2.2 干化学酶法对乳酸杆菌的检出效果评估 相对于显微镜法，干化学酶法对乳酸杆菌检出符合率为99.3%(χ2=3.60，P ＞0.05)。见表 2。

表2 两种方法对乳酸杆菌检出情况(例)

2.3 干化学酶法对真菌的检出效果评估 相对于显微镜法，干化学酶法对念珠菌的检出符合率为96.3%(χ2=0.45，P ＞0.05)。见表3。

表3 两种方法对念珠菌检测出情况(例)

2.4 干化学酶法对滴虫的检出效果评估 相对于显微镜法，干化学酶法对滴虫检出符合率为97.1%(χ2=25.14，P ＜0.05)。见表4。

表4 两种方法对滴虫性阴道炎检出情况(例)

2.5 干化学酶法对BV的检出效果评估 相对于显微镜法，干化学酶法对BV检出符合率为99.8%(χ2=4.00，P ＜0.05)。见表5。

3 讨论

阴道炎是妇科常见病，通常由细菌、真菌等引起。目前，阴道分泌物常规、基于过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞酯酶的检测试剂盒等都是辅助诊断阴道炎的常用方法［3，4］，但这些方法都存在明显的影响因素，会影响检验结果的准确性。因此，寻求检出准确率和检出率高的方法，对临床诊断与治疗有重要意义。

表5 两种方法对BV检出情况(例)

基于干化学酶法的阴道炎五联检，结合pH，将细菌性、念珠菌性、滴虫性以及其他不明原因的阴道炎加以区分，已有文献［5］报道。阴道分泌物清洁度分为四级，Ⅰ ～Ⅱ级为正常，Ⅲ ～Ⅳ级为异常［6］。在常规镜检中，清洁度判定标准主要依据白细胞、阴道杆菌、上皮细胞及杂菌的多寡。干化学酶法则单纯依据白细胞酯酶。故标本性状会严重干扰干化学酶法的准确性，如生理期标本，许多Ⅲ～Ⅳ级标本，会由于标本性状的干扰，被干化学酶法误判为Ⅰ～Ⅱ级。因此，对于清洁度的分级，最好结合常规镜检。

过氧化氢是阴道微生态菌群中有益菌，对有害菌(如阴道加特纳氏菌、支原体和念珠菌等)有抑制、杀灭作用;并且过氧化氢浓度与乳酸杆菌的数量呈正相关。本研究表明，干化学酶法对乳酸杆菌检出符合率为99.3%，与常规镜检相当。

目前实验室最常分离到的致病真菌是白色念珠菌。常规镜检法检测念珠菌，镜下不易观察到念珠菌孢子及菌丝，极易漏检及误检。乙酰氨基葡萄糖苷酶和脯氨酸氨基肽酶均为白色念珠菌的特异性酶。故干化学酶法的阴道炎五联检，通过检测两种酶的活性来判定念珠菌感染，可以降低念珠菌漏检率。

滴虫培养是公认的诊断滴虫性阴道炎的金标准，但临床上检测滴虫基本上是靠常规镜检。显微镜镜检对镜检人员经验性要求高，且气温低可影响滴虫的活动性而导致漏检。研究表明，滴虫具有乙酰氨基葡萄糖苷酶特异性酶，故可以通过检测乙酰氨基葡萄糖苷酶来判定滴虫感染。阴道炎五联检通过pH值和氨基葡萄糖苷酶活性的联合检测，排除了白带标本温度和离体时间影响，弥补悬滴法在温度低和离体时间长时滴虫检出率下降的缺陷，为临床诊断滴虫性阴道炎提供了更可靠的数据。

BV是育龄妇女最常见的下生殖道感染性疾病，占阴道感染的40% ～60%［7］。阴道加特纳菌是引起BV的主要病原菌。湿片法找线索细胞诊断BV，其准确性已得到证实［8］，但易受各种因素干扰。阴道炎五联检的诊断依靠对致病菌特异性代谢酶类的生化检测，通过测定过氧化氢浓度、唾液酸苷酶活性和脯氨酸氨基肽酶活性等指标来诊断 BV［5，9］，结果更准确可靠、稳定性更好。但是考虑到线索细胞是判断BV的必要条件，通过线索细胞诊断BV的阳性预期值为85%～90%，故阴道炎五联检可作为常规镜检方法的补充。

综上所述，干化学酶法检测阴道分泌物五项指标具有较高的灵敏度，是一种较好的阴道分泌物常规检查方法。

［1］吴国友，洪晓平，马小红，等.阴道炎五联检对妇科病筛查的临床应用研究［J］.中国卫生检验杂志，2011，21(4):952-954.

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［6］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社，2006:324.

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