非小细胞肺癌组织中PGSK-3β、TCF-4、NET-1的表达及意义

宋 曙，费嘉鸿，卞伟钢，林 辉，周 芬

(盐城市第一人民医院，江苏盐城224001)

研究证实，Wnt信号通路与肿瘤的发生、发展及其分化程度密切相关［1］。糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)对该通路具有负性调节作用，能抑制细胞增殖，而磷酸化的 GSK-3β(PGSK-3β)能抑制 GSK-3β 的活性，从而促进肿瘤细胞的发生、发展、侵袭及转移［2］。在非小细胞肺癌(NSCLC)中，T细胞因子4(TCF-4)的分布与其组织分型有关，且TCF-4 mRNA和蛋白的过表达与其分化程度有关;NET-1作为一个肿瘤增殖相关蛋白，可在多种恶性肿瘤中异常表达。GSK-3β和TCF-4共同作用于Wnt信号通路，其活性与NET-1具有相关性。2004年1月～2006年6月，我们观察了NSCLC 组织中 PGSK-3β、TCF-4、NET-1的表达，并探讨其临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择同期我院手术切除的NSCLC组织标本90份(观察组)，均经术后病理确诊。患者术前均未行放、化疗及免疫治疗。患者男42例、女48例，年龄35～75岁、平均48.5岁;腺癌58例、鳞癌32例;中低分化癌72例，高分化癌18例。

1.2 方法

1.2.1 标本染色及处理 所有标本经10%甲醛固定、石蜡包埋，4 μm连续切片。切片经二甲苯脱蜡、水化后，进行免疫组化SP法染色，并严格参照试剂说明书进行。其中，PGSK-3β羊抗人多克隆抗体原液购自美国Santa Cruz生物有限公司，NET-1兔抗人多克隆抗体由南通大学医学院病理教研室陈莉教授惠赠，TCF-4鼠抗人单克隆抗体和SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2.2 结果判断 PGSK-3β阳性染色多数定位于细胞质内，少数定位于细胞核中;TCF-4阳性染色定位于细胞质或细胞核中，NET-1阳性染色定位于细胞质或细胞膜中。三者均呈棕黄色颗粒。其阳性表达采用半定量积分法判断，阳性细胞百分比＜5%为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分;染色强度呈淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞百分比和染色强度两项积分相乘，0分为阴性，≥1～12分为阳性［3］。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS11.5统计软件，计数资料比较采用χ2检验或Fisher检验。相关分析采用Spearman等级相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC不同组织类型、分化程度 PGSK-3β、TCF-4、NET-1的阳性表达比较 见表1、2。

2.2 PGSK-3β、TCF-4、NET-1 在 NSCLC 组织中的相关性分析 PGSK-3β阳性表达与TCF-4、NET-1阳性表达均呈正相关(r分别为0.247 8、0.409 3，P均＜0.05)，TCF-4阳性表达与NET-1阳性表达亦呈正相关(r=0.260 9，P ＜0.05)。

表1 NSCLC不同组织类型PGSK-3β、TCF-4、NET-1阳性表达比较［例(%)］

表2 NSCLC不同分化程度PGSK-3β、TCF-4、NET-1阳性表达比较［例(%)］

3 讨论

经典的Wnt信号通路是Wnt蛋白与细胞膜上卷曲蛋白跨膜受体结合，将信号传到细胞内，激活胞质内的散乱蛋白，抑制GSK-3β表达，进而β-连接素(β-catenin)不能被磷酸化降解，致使β-catenin异常聚集［2］。异常聚集的β-catenin进入核内，与T细胞因子/白细胞移动增强因子结合，启动下游靶基因的表达。在Wnt信号传导通路中，GSK-3β是负性调节因素，β-catenin是正性调节因素，且GSK-3β是决定β-catenin磷酸化的关键激酶。对GSK-3β的抑制能使β-catenin不被磷酸化而降解，从而使β-catenin核聚集，抑制凋亡发生，促进肿瘤细胞的发生、发展、侵袭与转移［4，5］。本研究结果显示，中低分化癌PGSK-3β阳性表达率明显高于高分化癌。说明PGSK-3β升高可导致癌基因的表达增多，表现为细胞分化变低，肿瘤进展加快。

TCF-4作为转录因子，在无Wnt信号刺激时，对Wnt靶基因起抑制作用，可抑制下游基因的表达［6］;当有过量Wnt信号刺激时，TCF-4与β-catenin在细胞核内结合成复合体，特异性结合Wnt靶基因的启动子而激活其转录，对细胞生长发育起重要作用。在NSCLC中，TCF-4的亚细胞分布与其组织类型有关，且TCF-4 mRNA和蛋白的高表达与其细胞分化程度有关［7］。本研究结果显示，TCF-4在中低分化癌中的阳性表达率明显高于高分化癌。说明TCF-4在Wnt信号通路促进细胞恶性转化的过程中具有重要作用，是判断肿瘤细胞恶性进程的一个指标。

NET-1是一种肿瘤增殖相关蛋白［8］。已有报道，在多种恶性肿瘤中存在NET-1的异常表达［9］。本研究结果显示，NET-1在分化程度低的肺癌组织中表达水平显著升高，与邵伟伟等［10］研究一致。提示NET-1过度表达与细胞增殖有关，可明显促进肺癌的恶性进展。

本研究还观察了PGSK-3β、TCF-4、NET-1在不同组织类型肺癌间的表达。结果显示，肺腺癌中PGSK-3β、TCF-4、NET-1的阳性表达互高于肺鳞癌，但均无统计学差异。说明不同组织类型的NSCLC在Wnt信号通路促肺癌发生机制上没有本质差异。

PGSK-3β、TCF-4、NET-1 均是肺癌发生、发展的正性调控因子，且与肺癌组织的分化程度密切相关［11］。本研究发现，PGSK-3β、TCF-4、NET-1 阳性表达均呈正相关。说明NSCLC形成过程中虽然PGSK-3β与TCF-4作用于Wnt信号通路的不同环节，却起到了互相促进的作用;NET-1传导细胞分裂的信息引起细胞异向分化或去分化，三者在细胞分裂的过程中共同参与了细胞的无限增殖过程。

综上所述，我们认为PGSK-3β、TCF-4通过Wnt信号通路参与NSCLC的发生及分化，且与NET-1相互促进。

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