苍术炮制前后挥发油的急性毒性实验

刘艳菊，肖波，季光琼，许安安，李鑫 （湖北中医药大学药学院，湖北 武汉430065）

苍术为传统燥湿药，经湖北中医药大学生药教研室张秀桥教授鉴定为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.的干燥根茎，始载于《神农本草经》，列为上品，性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风、散寒、明目等功能，中国药典收载有生苍术、麸炒苍术［1］。生苍术燥性偏大，麸炒可缓和其燥性，并可增强健脾和胃作用［2］。苍术主要含挥发油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔类及少量的酚类、有机酸类等组成［3］。苍术挥发油的主要成分为β－桉叶醇、茅术醇、苍术酮、苍术素，具有降血压、利尿、促进胃排空和抗炎等作用［4］。目前，尚没有关于麸炒苍术挥发油对小鼠的急性毒性研究报告，现对苍术炮制前后挥发油进行急性毒性的实验研究，为今后充分研究其药理作用、临床安全用药提供实验依据。

1 材料

1.1 药品与试剂 苍术饮片（武汉市刘天保药业饮片厂，批号100501），麸炒苍术自制，食用调和油（武汉益海嘉里粮油工业有限公司）。

1.2 试验动物 昆明小鼠，体质量为（20±2）g，雌雄各半，由华中科技大学同济医学院提供，实验动物质量合格证证号：No.4200499460。

2 方法

2.1 生苍术及麸炒苍术挥发油的提取 水蒸气蒸馏提取法：称量1 000 g苍术饮片，装入10 000 mL水蒸气蒸馏提取器中，加入6 000 mL 纯化水提取，温度控制在100℃左右，至挥发油的量不再增加，蒸馏液用乙醚萃取，萃取后再用无水硫酸钠干燥，过滤，自然挥干，得挥发油，挥发油为淡黄色透明油状物。得到的挥发油，密封后置于4℃冰箱保存备用。麸炒苍术挥发油同法平行操作。计算生苍术、麸炒苍术挥发油的得率，分别为7.1%和4.8%。

2.2 剂量换算方法［5］2010年版中国药典记载临床上苍术处方剂量为3～9 g，设定9 g为成人用剂量，标准体质量成人以60 kg计，成人每天的剂量为9×103mg／60 kg＝150 mg·kg－1，小鼠以20 g计，由成人换算成小鼠用药剂量（mg·kg－1）为：小鼠＝成人×换算系数＝150 mg·kg－1×12.33＝1 849.5 mg·kg－1。单只小鼠生苍术挥发油和麸炒苍术挥发油每天灌胃剂量分别为131.31，88.776 mg·kg－1。

2.3 供试溶液的配制 称取生苍术挥发油2.27 g，在温水中加热使之成油状物，滴加食用调和油定容至10 mL，配制成质量浓度为0.227 g·mL－1生苍术挥发油溶液；称取麸炒苍术挥发油4.08 g，同法配制成0.408 g·mL－1麸炒苍术挥发油溶液，密封后置于4 ℃冰箱保存备用。

2.4 小鼠急性毒性试验 预试验前对小鼠进行7 d的喂养观察，观察期内小鼠自由采食、饮水。在反复大跨度摸索剂量范围的基础上，再做批量的预试验。

预试验将小鼠随机分成6组，每组4只，雌雄各半，各组按等比浓度灌胃给药，确定试验小鼠0%和100%死亡的剂量范围。根据预试验所用剂量，按公式求出正式试验的剂量比r。

式中：r＝相邻两组剂量的比值；b＝最大剂量；a＝最小剂量；n＝预分组数。

正式实验时将小鼠随机分成6组（溶剂对照组及苍术挥发油1，2，3，4，5五个实验组），每组10只，雌雄各半，组间计量比值为r，按1∶K（K＝1／r）等比稀释法，配制等比浓度挥发油药物，按0.2 mL／10 g灌胃给药，观察记录各组小鼠死亡数。

给药后观察小鼠体质量变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应（中毒反应的症状、严重程度、起始时间、持续时间、是否可逆）等，观察14 d。对濒死及死亡动物及时进行尸检，其他动物在观察期结束之后进行尸检，观察内脏器官体积、颜色及质地有无改变，若有肉眼可见病变进行病理组织学检查。

根据改良寇氏法公式计算半数致死量（LD50）：LD50＝lg－1［Xm－i（∑p－0.5）］；LD50的95%可信限＝lg－1（LD50±1.96×Sx50）；Sx50＝i

式中：Xm＝最大剂量组剂量的对数值；i＝剂间比的对数值；Σp＝各组死亡率之和；p＝各组死亡率；q＝各组存活率，q＝1－p；n＝各组动物数；Sx50＝log LD50的标准误差。

3 结果

3.1 苍术炮制前后挥发油对小鼠的急性毒性试验

生苍术挥发油对小鼠急性毒性试验的预试验结果：初步确定0%和100%死亡剂量分别是1 181.7，4 545.5 mg·kg－1。根据公式计算K＝0.71。

麸炒苍术挥发油对小鼠急性毒性试验的预实验结果：初步确定0% 和100% 死亡剂量分别是4 083.7，8 167.4 mg·kg－1。根 据 公 式 计 算K ＝0.84。

生苍术及麸炒苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验：试验结果见表1～4。

由改良寇氏法公式计算，生苍术挥发油LD50＝2 454.71 mg·kg－1，LD50的95%可信限为2 123.24～2 837.92 mg·kg－1。

由改良寇氏法公式计算，麸炒苍术挥发油LD50＝5 248.07 mg·kg－1，LD50的95% 可 信 限 为4 677.35～5 888.43 mg·kg－1。

根据化合物经口急性毒性（LD50）分级标准［6］，生苍术挥发油分级为低毒；而麸炒苍术挥发油分级为实际无毒。

3.2 小鼠中毒症状及死亡小鼠解剖结果 实验小鼠灌胃生苍术及麸炒苍术挥发油后，主要毒性症状为：行动迟缓、静卧、昏睡、呼吸减弱、心率减慢，直至死亡。毒性症状的轻重与剂量成正相关。小鼠死亡开始于给药后3.5 h，大多发生于给药后24 h以内。恢复期内小鼠无异常表现。

大部分小鼠死亡时，面部、尾巴发黑。4 h内死亡小鼠解剖无明显的病理变化；延长至48 h内死亡小鼠剖检时可见胃部胀大成气泡，膀胱集尿、胆汁分泌增多、肺充血或淤血；部分小鼠有肠道水肿，甚至胃底和十二指肠出血；晶状体混浊，其他未见异常。

表1 生苍术挥发油经灌胃给药的小鼠死亡分布表Tab 1 The death distribution table of volatile oil of Rhizoma Atractylodis by intragastric administration in mice death distribution table

表2 生苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验结果Tab 2 Results of acute toxicity of volatile oil of Rhizoma Atractylodis in mice

表3 麸炒苍术挥发油经灌胃给药的小鼠死亡分布表Tab 3 The death distribution table of volatile oil of the bran fried Rhizoma Atractylodis by intragastric administration in mice death distribution table

表4 麸炒苍术挥发油对小鼠的急性毒性试验结果Tab 4 Results of acute toxicity of volatile oil of the bran fried Rhizoma Atractylodis in mice

4 讨论

苍术经麸炒后，挥发油LD50大幅增加，毒性降低，该结果与临床用药相吻合，说明炮制对苍术挥发油质和量产生的影响，直接影响着苍术临床用药的安全性。

有关苍术炮制前后挥发油化学成分的变化，已有文献报道［7－8］，苍术生品及炮制品中的挥发油仅有量变而无质变，且苍术经麸炒后挥发油含量降低较多。生苍术中β－桉叶醇为主成分，其次是苍术酮、茅术醇，麸炒苍术中茅术醇为主成分，其次是苍术酮、β－桉叶醇。因此，推测苍术麸炒后挥发油毒性的降低不仅与挥发油量的降低有关，与挥发油中某些组分含量的降低也有一定的相关性。

苍术挥发油对小鼠机体的影响，苍术中含有的β－桉叶醇、茅术醇对小鼠有镇静作用，抑制小鼠自发活动［9］，这可能是给小鼠灌服苍术挥发油后中毒时出现活动减少、趴卧、对外界反映降低等临床症状的原因，而膀胱蓄尿可能与苍术挥发油的利尿作用有关［10］。苍术含有的苍术素能促进胆汁分泌作用［9］，这与解剖时出现的胆汁增多症状相符。小量苍术挥发油有抑制心搏、减慢心率及镇静作用；大量可致心脏麻痹，使呼吸麻痹而致死［11］。大剂量试验组中小鼠死亡的主要原因可能与其对心血管及呼吸抑制有关，而其具体的毒性成分及中毒机制尚有待更进一步探讨。

［1］ 中国药典.一部［S］.2010：153.

［2］ 龚千峰.中药炮制学［M］.北京：中国中医药出版社，2007：125.

［3］ 张秋华，张晓枫，张秋菊.苍术的化学成分与药理研究进展［J］.时珍国药研究，1997，8（6）：505－506.

［4］ 欧阳臻，江涛涛，缪亚东，等.苍术的化学成分道地性和药理活性研究进展［J］.时珍国医国药，2006，17（10）：1936－1938.

［5］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2006：1169.

［6］ 王生宁.中药毒性与临床前评价［M］.北京：科学出版社，2004：11.

［7］ 张亚东，吴洪元.四种炮制方法对苍术中挥发油的影响［J］.时珍国医国药，2003，14（1）：19－20.

［8］ 王爱武，田景奎，耿晖，等.苍术炒制前后挥发油成分的研究［J］.华西药学杂志，2004，19（6）：418－419.

［9］ 王玉良.苍术、白术的药理学研究［J］.日本医学介绍，1984，12（5）：30.

［10］刘国生，孙备，明亮.苍术挥发油与水溶性成分的主要药理作用比较［J］.安徽医科大学学报，2003，38（2）：124－126.

［11］罗熙财.服含苍术复方煎剂出现阿托品中毒样现象［J］.中国中药杂志，2000，25（11）：702.