胃癌组织Stathmin表达及其与血管生成关系

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(1 青岛大学医学院附属青岛市市立医院病理科，山东 青岛 266071； 2 青岛市黄岛区中医医院病理科)

胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，在我国胃癌占所有恶性肿瘤死亡率的第一位[1]。目前随着诊疗水平的不断改善，早期胃癌病人的生存率大幅度提高，但是晚期胃癌病人的预后仍然较差。胃癌的浸润、转移是造成胃癌病人死亡的主要原因，因此了解胃癌发生发展机制是预防和治疗的关键。微管不稳定蛋白(Stathmin)是一种高度保守的细胞内可溶性磷酸蛋白质，在细胞周期的不同阶段通过磷酸化和去磷酸化作用来调节细胞微管系统的动力学平衡，控制细胞周期，改变细胞的增殖、分化等生物学行为[2]。Stathmin的表达在恶性肿瘤发生、发展及肿瘤细胞对化疗药物的敏感性上具有重要作用。Endoglin(CD105)是新生血管内皮的重要标记物。本实验应用免疫组织化学方法检测胃癌组织Stathmin和CD105的表达，探讨其与胃癌临床病理特征之间的关系，并进一步研究Stathmin的表达与微血管生成的关系。

1 材料与方法

1.1 材料来源

2012年1月—2012年7月，我院接受根治性胃癌手术切除并经病理证实为腺癌的病人120例，收集其胃癌组织及癌旁组织标本(与癌组织距离>5 cm)，所有病例术前均未接受放疗和化疗。另外，收集30例非肿瘤胃黏膜组织作为对照组。

1.2 方法

所有标本均经过40 g/L的中性甲醛固定、石蜡包埋及常规连续切片。然后切片常规脱蜡,高温高压下热抗原修复,严格按照免疫组织化学 SP试剂盒说明书的操作步骤检测Stathmin和CD105的表达，采用CD105标记胃癌组织微血管并检测微血管密度(MVD)值。以原位肺腺癌及淋巴结组织作为Stathmin和CD105的阳性对照,以同种动物非免疫血清代替一抗作为阴性对照。鼠抗人CD105单克隆抗体购自北京中杉金桥公司；Stathmin兔抗人单克隆抗体、即用型SP试剂盒、DAB 显色试剂盒均购自福州迈新公司。

1.3 结果判定

由两位医师分别双盲阅片并进行结果判定，显微镜下观察染色结果，Stathmin表达主要定位于细胞浆，呈棕黄色颗粒状。每张切片随机取5个高倍(400倍)视野，每个视野计数100个细胞。按照肿瘤细胞着色强度和阳性细胞率分别进行计分。着色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分；阳性细胞率计分：阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。总评分值(阳性细胞率计分乘以着色强度计分)≤3分为阴性，>3分为阳性。CD105主要表达于肿瘤间质的血管内皮细胞上，CD105阳性细胞为内皮细胞膜或胞浆呈棕黄染色。MVD测定参照WEIDNER[3]报道的微血管计数方法，记录5个血管密度最高的视野中微血管数，取平均数作为MVD值。

1.4 统计学处理

应用SPSS 17.0软件进行统计学处理。各组间阳性表达率比较采用χ2检验，两组均数的比较采用独立样本t检验，多组均数的比较采用Kruskal-Wallis法，相关性采用Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 各组织中Stathmin的表达

Stathmin表达主要定位于肿瘤细胞的胞质，呈棕黄色颗粒状。胃癌组织、癌旁组织及肿瘤胃黏膜组织中Stathmin阳性表达分别为81例(67.5%)、28例(23.3%)、4例(13.3%)，胃癌组织中Stathmin阳性表达率明显高于癌旁组织、非肿瘤胃黏膜组织(χ2=59.37,P<0.01)。

2.2 各组织中CD105的表达及 MVD计数

CD105在胃癌组织的微小血管上表达较强，呈棕褐色，分布有异质性，多数分布于肿瘤实质边缘的间质区，常紧邻肿瘤细胞，而在大血管上染色不明显。胃癌组织、癌旁组织及非肿瘤胃黏膜组织MVD平均值分别为15.43±3.75、4.90±3.17、0.73±0.21，差异有显著性(H=96.85，P<0.01)。

2.3 胃癌组织中Stathmin表达及MVD值与胃癌临床病理参数的关系

胃癌组织Stathmin表达及MVD值与病人性别、年龄、肿瘤直径无关(P>0.05)，而与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期有关(χ2=5.99～10.69，t=6.20～8.39，P<0.05)。见表1。

2.4 胃癌组织中Stathmin表达及与MVD的关系

Stathmin表达阳性胃癌组织MVD值为18.54±3.92，表达阴性胃癌组织MVD值为8.96±3.41，两者比较差异有显著性(t=13.06，P<0.01)。相关分析显示，Stathmin在胃癌组织的表达与MVD值呈正相关(r=0.86，P<0.01)。

3 讨 论

Stathmin是近年来发现的在细胞的增殖和分化中十分重要的可溶性磷酸蛋白质，该蛋白由149个氨基酸组成，相对分子质量为19 000。最初发现Stathmin在细胞有丝分裂期纺锤体的聚合和解聚中发挥重要作用，Stathmin通过调节微管系统的动态平衡从而调控细胞周期，并以此调节细胞的生物学行为。Stathmin促微管解聚的活性受其自身磷酸化水平的调节。近年来研究显示，其与肿瘤的发生发展关系密切[4-5]。有研究结果显示，Stathmin在多种恶性肿瘤中的高表达与肿瘤的生物学特性及预后密切相关[4]。TROVIK等[5]在研究子宫内膜癌时发现，高表达的Stathmin与肿瘤的侵袭进展及预后密切相关。JEON等[6]在研究食管癌、胃癌时发现，Stathmin的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和临床分期有密切关系。本研究结果显示，Stathmin的高表达与病人性别、年龄、肿瘤直径无关，而与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关，与文献报道的结果一致。提示Stathmin高表达在胃癌的发生发展中发挥重要作用，推测Stathmin可以作为判断胃癌生物学行为的指标之一。

近年来对肿瘤血管生成的研究显示，血管生成在实体肿瘤的恶变、生长、转移等方面起至关重要的作用。CD105是一种较特异性地代表新生血管的因子，主要表达于各组织血管内皮细胞表面，但其并非泛血管标记，与传统内皮标记因子相比，能够更好标记新生血管内皮细胞，因其高表达于活化-增殖的内皮细胞表面，故更适用于肿瘤新生血管的研究。以CD105为标记计数的MVD是评价肿瘤血管形成较为理想的指标[7]。有研究显示，MVD在结直肠癌组织中较腺瘤组织和正常黏膜显著增加，与肿瘤的Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关，因此认为肿瘤的微血管数量是肿瘤病人的危险因素，数量越多预后越差，越容易发生转移[8]。YOSHIE等[9]在研究子宫内膜周期性再生中发现，Stathmin的表达导致了HIF-1α与VEGF的累积，从而刺激子宫内膜血管生成；另外有研究显示，Stathmin能上调血管内皮锌指蛋白(Vezf1)，而Vezf1则是胚胎血管形成的重要转录调控子，从而提示Stathmin参与了血管形成的过程[10]。MISTRY等[11]研究显示，通过反Stathmin核酶抑制人脐静脉内皮细胞中Stathmin的表达，能够抑制人脐静脉内皮细胞血管生成。此外，近期有研究显示，Stathmin在子宫内膜异位症组织中的高表达可能与子宫内膜异位症的发生、发展及血管生成密切相关[12]。本文的研究结果显示，Stathmin阳性的胃癌组织中MVD值远高于Stathmin阴性者，且Stathmin在胃癌组织表达与 MVD值呈正相关，推测Stathmin可能通过增加肿瘤新生血管形成，从而促进肿瘤的生长、浸润和转移。Stathmin参与调节微管系统的动态平衡以及细胞骨架的重构，而内皮细胞的活性在调节血管生理功能方面起着重要的作用，Stathmin可能是通过趋化募集血管内皮细胞的迁移，同时提高肿瘤微环境中的HIF-1α和VEGF等多种促血管生成因子的含量，从而调控血管和管道形成的。但是，有关Stathmin与胃癌新生血管形成的关系仍需做进一步研究，从而进一步揭示胃癌发生及转移的分子机制。

表1 Stathmin表达及MVD值与胃癌临床病理参数的关系

综上所述，Stathmin高表达在胃癌的发生发展中发挥重要作用，并与胃癌组织中微血管生成有关，可以作为判断胃癌恶性生物学行为的指标之一。此外，Stathmin在胃癌的新生血管形成过程中起着重要作用，或可成为肿瘤抗血管生成治疗的新靶点。

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