反相高效液相法测定石芽茶中山茶苷A的含量

布鸣

广西中医药研究院，广西 南宁 530022

石芽茶为山茶科杨桐属植物亮叶杨桐Adinandra nitida Merr.ex Li的干燥叶，俗称石崖茶。石芽茶中黄酮类化合物主要包括山茶苷A、山茶苷B和芹菜素等，其中山茶苷A的含量为最高，占总黄酮中90%以上[1-2]，但目前未见到有关其山茶苷A含量测定的报道。本课题组报道了石芽茶的槲皮苷含量测定及指纹图谱研究.[3-4]，现对不同产地的11批石芽茶药材采用反相高效液相色谱法测定山茶苷A的含量，并进行了方法学研究，结果准确，方法简便，为石芽茶的药用开发提供一定的质量控制依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20ATVP液相色谱仪；日本岛津SPD-20AVP检测器；威玛龙色谱工作站及软件5.20版。山茶苷A对照品(自制，纯度≧98%)；水为重蒸馏水(自制)；乙腈为色谱纯，其余均为分析纯试剂。石芽茶样品：20090204、20090711、20090712、20090711、20090802、20091118、20091210、20091215、20091221，由本院中药所黄云峰同志采集；20090605、20110311由金秀县科技情报所梁干君同志采集，以上样品均由本院中药所鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：XB-C18柱 (4.6 mm×250mm，5um)；检测波长：330m；流动相：乙腈-0.1%磷酸(20:80)；流速1.0ml·min-1；柱温为室温，理论塔板数按山茶苷A峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取山茶苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品药材粉末0.1g(过60目筛)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液4ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 精密称取山茶苷A对照品20.2mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成808μg/ml对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10μl，测定，计算，以对照品进样浓度(μg/ml)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线，回归方程为：Y=26262X+20958，r=1.000。结果表明：山茶苷A进样浓度在20.2～323.2μg/ml之间与峰面积积分值线性关系。

2.5 精密度试验 取同一份石芽茶供试品溶液(批号110311)10μl，重复进样5次，测定山茶苷A峰面积，其RSD为1.71%(n=5)。

2.6 重复性试验 取同一批号(110311)样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定，即得。结果测得山茶苷A平均含量为68.2mg/g，RSD= 0.53%(n=6)。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号110311)分别于配置后0、4、8、12、16h进行测定，即得。结果供试品中山茶苷A含量的RSD为1.43%，表明供试品溶液在16h内保持稳定(n=5)。

2.8 加样回收试验 精密称取已测知含量的同一批号供试品0.05g(含量：68.2mg/g)6份，加入1.012mg/ml山茶苷A对照品溶液3.4ml，再加入甲醇22.6ml，按供试品制备项下方法进行提取，测定，结果山茶苷A平均回收率为98.8%，RSD%为1.62 (n=6)，结果见表1。

表1 加样回收试验测量结果(n=6)

2.9 样品测定 取不同地区的11批石芽茶药材，按供试品溶液制备方法制备，分别进样10μl；同时取对照品溶液10μl，进样测定。按外标法(峰面积)计算石芽茶中山茶苷A的含量。结果见表2。

表2 11批石芽茶药材中山茶苷A的测量结果

t/min A． 山茶苷

t/min B. 石芽茶药材

3 讨论

3.1 山茶苷A作为石芽茶的主要黄酮成分，含量较高，测定山茶苷A的含量可作为控制本品质量标准的指标之一。由于其测定使用的流动相系统与槲皮苷一致[3]，只是最大紫外吸收波长不同，原拟定与槲皮苷一同测定，但经实验发现，采用50%甲醇提取所得槲皮苷含量比用甲醇高，且杂质较少；采用甲醇提取所得山茶苷A含量比用50%甲醇高，因此两者最佳提取溶剂不同，故把这两者分开测定。

3.2 对山茶苷A进行紫外扫描，结果其在330nm处有最大吸收，故确定检测波长为330nm，根据试验摸索，以乙腈-0.1%磷酸为流动相，考察不同比例，最后确定乙腈-0.1%磷酸(20:80)的比例较为适合。

3.3 从实验结果看，本分析方法精密度高，准确度、重复性都比较好，并且操作简便、快捷，为石芽茶的质量评价提供了良好的依据。

[1] 刘本国.亮叶杨桐叶中类黄酮的提取、鉴定与修饰[D].广州，华南理工大学，2007.

[2] 刘本国，战宇，许克勇，等.液质联用鉴定石芽茶中的类黄酮化合物[J].食品研究与开发，2007，28(3)：118-120.

[3] 宋志钊，刘元，李文琪.HPLC法测定亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量[J].中国民族民间医药杂志，2011，20(5)：27-28

[4] 刘元，宋志钊，李文琪.亮叶杨桐指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(6)：71-73.