“一测多评”测定木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

夏丽珍，李春娇，赖增发

（1.三明市中西医结合医院，福建 三明 365001；2.三明市药品检验所，福建 三明 365000）

木香为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，其中木香烃内酯（costunolide）和去氢木香内酯（dehydrocostuslactone）为挥发油的主要成分，此外还有菊糖和木香碱等。木香主要起行气调经止痛功效，是治脾胃虚寒气滞要药［1］。木香烃内酯和去氢木香内酯均为倍半萜内酯，性质不稳定，不易保存［2］。《中华人民共和国药典》（2010 版）一部中用外标对照法测木香烃内酯和去氢木香内酯香总量［3］。为更好控制其质量，节约对照品，提高检测效率，本实验以相对易得的木香烃内酯为内标，采用一测多评法［4］（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMA）建立去氢木香内酯的含量测定方法，并将一测多评方法与常规外标法进行比较，获得满意结果。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪；岛津LC-2010A高效液相色谱仪；Ultimate XB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Gemini C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Agilent Tc-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Waters sunfire C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；BP211D电子天平（德国塞多利斯股份公司）；KQ5200DE数控超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料 木香烃内酯（111524－201107）、去氢木香内酯（111525－201008）对照品均购自中国药品生物制品检定所，纯度100%；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯，木香样品为市售品（北京同仁堂股份有限公司）。

2 方法学考察

2.1 色谱条件 色谱柱为Ultimate XB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（65∶35）；柱温 25℃；流速：1.0 mL／min；检测波长 225 nm。上述色谱条件下，各组分分离度良好，见图1、图2。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取木香烃内酯对照品12.68 mg、去氢木香内酯对照品16.32 mg，分别置50 mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得各对照品储备液适量。再分别精密吸取上述各对照品储备液8 mL置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液（木香烃内酯 81.15 μg／mL，去氢木香内酯 104.4 μg／mL）。

2.3 供试品溶液的制备 取木香（批号201208562，过四号筛）粉末约0.1 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min（功率300 W，频率50 kHz），取出，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系 精密移取混合对照品溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25 mL 置 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密取20 μL注入液相色谱仪，以进样量对峰面积积分值进行线性回归，得回归方程：木香烃内酯 Y＝2179.4X＋4.6448（r＝0.9997）， 去氢木香内酯 Y＝874.1X＋0.6751（r＝0.9998），表明木香烃内酯在 0.0811～0.811 μg、去氢木香内酯在0.104～1.044 μg线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10 μL，重复进样6次，记录色谱峰，计算木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.56%、0.43%。

2.6 稳定性试验 取木香（批号201208562，过四号筛）粉末约0.1 g，精密称定，制备供试品溶液，分别于制备后 0、2、4、8、12、24 h 进样 10 μL， 记录色谱峰，计算得木香烃内酯和去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.16%、0.63%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 重现性试验 取木香（批号201208562，过四号筛）粉末约0.1 g，共6份，精密称定，分别制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积并计算含量及RSD。结果供试品中木香烃内酯、去氢木香内酯含量分别为1.5833%、2.5294%，RSD分别为1.3%、1.8%。

2.8 加样回收试验 取木香（批号201208562，过四号筛）粉末0.05 g，共6份，分别加入木香烃内酯对照品储备液3 mL、去氢木香内酯对照品储备液4 mL，制备供试品溶液，测定，计算得木香烃内酯、去氢木香内酯平均加样回收率分别为98.36%、98.64%，RSD分别为1.5%、1.8%。

3 方 法

3.1 色谱柱考察 取“2.4”项下制备的6个不同质量浓度的混合对照品溶液，分别进样20 μL，以木香烃内酯为内标，计算木香烃内酯对去氢木香内酯的校正因子，考察Ultimate XB-C18柱、Gemini C18柱、Agilent Tc-C18柱、Waters sunfire C18柱4种色谱柱对相对校正因子的影响，结果见表1。表明不同色谱柱所得到的相对校正因子基本一致。

表1 不同色谱柱的相对校正因子

3.2 高效液相色谱考察 取“2.4”项下制备的6个不同质量浓度的混合对照品溶液，分别进样20 μL，以木香烃内酯为内标，计算木香烃内酯对去氢木香内酯的校正因子，考察了岛津LC-2010A和Agilent 1200这2种高效液相色谱仪对相对校正因子的影响，结果见表2。表明在不同的液相色谱系统下所得到的相对校正因子基本一致。

表2 不同高效液相色谱的相对校正因子

3.3 色谱峰专属性考察 利用相对保留值r＝tR1／tR2进行定位，即以待测组分色谱峰与木香烃内酯色谱峰的相对保留时间来确定，去氢木香内酯与木香烃内酯峰相对保留时间的平均值为1.1452，RSD为1.7%。结果见表3。

表3 2种成分的保留时间及相对保留时间

4 样品测定

分别取各批样品制备供试品溶液，分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，测定。分别采用外标法和“一测多评”法计算木香中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，结果见表4。表明一测多评法可用于木香中木香内酯的含量测定。

表4 木香中木香烃内酯、去氢木香内酯的测定

5 讨 论

在一定的线性范围内，成分的量与检测器响应值成正比，即：W＝f（A）。测定时，以木香中木香烃内酯为内标，建立其与去氢木香内酯之间的相对校正因子（relative correction factor，RCF），然后通过校正因子计算其含量。计算公式为：Wm＝fkm×（Wk×Am）／Ak，Ak为内标物峰面积，Wk为内标物的浓度，Am为其它组分m峰面积，Wm为其它组分m的浓度。一测多评法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多组分的同时测定［5］。

木香中2个主要成分木香烃内酯和去氢木香内酯的含量都很高［6］，这也是建立含量指标测定的主要原因。用流动相甲醇-水（65∶35），分离效果明显，可以使木香烃内酯、去氢木香内酯与其它组分分离（分离度＞1.5）。选用甲醇、乙醇不同提取溶剂，结果显示甲醇作溶剂采用超声30 min，目标成分提取效率高［7］。因2个内酯成分的热不稳定性，故未考察回流和索氏提取等热提取方式。

参考内标峰的保留时间，再根据紫外吸收特征判断，即能够正确判断出目标峰的准确位置。结果表明：利用上述方法进行峰的定位是可行的。

本实验考察不同品牌的色谱柱和液相系统对木香烃内酯、去氢木香内酯之间相对校正因子的影响，说明实验中得到的校正因子具有较高的可信度，通过计算可知“一测多评”法与外标法测到的含量没显著性差异，“一测多评”法可以在对照品缺省的情况下实现定量测定的要求。

［1］雷载权，陈松育，高学敏，等.中药学［M］.上海：上海科学技术出版社，1995：161.

［2］刘俊红，李棣华，伍孝先.提取木香中木香烃内酯及去氢木香内酯影响因素的初步研究［J］.时珍国医国药，2009，20（12）：3013-3014.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：57-58.

［4］王智民，高慧敏，付雪涛，等.一测多评法中药质量评价模式方法学研究［J］.中国中药杂志，2006，31（23）：1925-1928.

［5］王智民，钱忠直，张启伟，等.一测多评法建立的技术指南［J］.中国中药杂志，2011，36（6）：657-658.

［6］赵小民，殷高彬.不同产地木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的 HPLC 测定［J］.安微医药，2009，13（6）：617-618.

［7］李慧，陈宝田，翁立冬，等.木香炮制品中木香烃内酯和去氢木香内酯的 HPLC 测定［J］.中草药，2007（11）：1659-1661.