基于CYP450酶系对比研究香附与来曲唑对大鼠卵泡发育的影响及其机制

周婷

（湖南省长沙市中医院 长沙410100）

近年来第三代芳香化酶抑制剂来曲唑在促排卵中的应用愈来愈受到关注，其可阻断雄激素转化为雌激素，降低雌激素浓度，从而增加促性腺激素的分泌而促进卵泡发育。临床研究也表明中医中药可以促卵泡发育及排卵，其中香附使用率高，因香附有“气中之司，妇科之帅”之称，为妇科调经之要药。笔者通过动物实验对比观察香附与来曲唑对卵巢组织P450arom的影响，探讨香附的作用靶点和作用机制，以更好地指导临床用药。

1 资料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级成熟雌性SD大鼠48只，购自上海斯莱克实验动物中心 [许可证号：SCXK（沪）2009-0005号]，周龄 6周，体重 180～200 g，平均(192±10)g。每日定时作阴道涂片检查，选择动情周期4～5 d，连续两个正常动情周期的大鼠用于实验。全部动物均于湖南中医药大学普通动物房饲养，恒温22℃，12h光照，12h黑暗交替，自由摄取食物和水。

1.1.2 实验药物及主要试剂 来曲唑（芙瑞）：2.5 mg/片（江苏恒瑞医药股份有限公司，购自湖南中医附一医院，产品批号09061656）；醋香附中药配方颗粒：0.5g/袋，每袋相当于中药饮片10 g（广东一方制药有限公司，购自湖南中医附一医院，产品批号0908044）；Aromatase试剂盒（购自于武汉博士德有限公司）。

1.2 实验方法 将具有规律动情周期的48只清洁级雌性SD大鼠按随机排列表法分为四组并编号：A组：空白对照组（12只）；B组：香附组（12只）；C组：来曲唑组（12只）；D组：香附+来曲唑组（12只）。同步化大鼠性周期后于大鼠的第一个性周期的动情前期开始灌胃，用药剂量按照人与大鼠用药剂量换算公式计算，分别溶于2 mL蒸馏水溶液中对大鼠进行灌胃：A组：蒸馏水溶液10 mL/kg灌胃；B组：香附水溶液10 mL/kg灌胃，药物浓度为0.1 g/mL（取人1 d用药剂量10倍实验）；C组：来曲唑水溶液10 mL/kg灌胃，药物浓度为0.025 mg/mL；D组：来曲唑水溶液10 mL/kg+香附水溶液10 mL/kg灌胃。每日同一时间灌胃一次，持续灌胃9 d后断头处死，取卵巢标本行免疫组化和HE染色。各级卵泡采用计数，免疫组织化学结果采用平均灰度值。

1.3 统计学处理 采用SPSS15.0软件分析数据。计数资料采用χ2检验，计量资料以(±S)表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

B、C、D三组均可增加大鼠次级卵泡数目，其中C组较B组增加更多，D组则多于C组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；B、C、D三组均能抑制卵巢颗粒细胞中P450arom的表达，其中D组和C组的抑制效果最强，而B组作用优于A组但弱于C组。见表1。

表1 各组大鼠次级卵泡计数及卵巢组织P450arom的表达 (±S)

表1 各组大鼠次级卵泡计数及卵巢组织P450arom的表达 (±S)

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3 讨论

第三代芳香化酶抑制剂是治疗绝经期乳腺癌的内分泌新药，其中来曲唑在促排卵中的应用愈来愈受到关注。临床用于促排卵一般在月经周期第3～7天，2.5 mg/d，口服，其通过与亚铁血红蛋白中的铁原子结合，与内源性底物竞争芳香化酶的活性位点，从而可逆地抑制该酶的活性，选择性抑制雌激素生物合成，有效地阻断雄烯二酮及睾酮向雌激素转化，且只降低体内雌激素水平，而不影响其他甾体激素生物合成[1]。香附味辛、微苦、微甘、平，归肝、脾、三焦经，有行气解郁、调经止痛之功效。现代药理研究表明，香附具有雌激素样作用，可使子宫平滑肌松弛，皮下注射或阴道内给药，以子香烯的作用最强，可出现阴道上皮细胞完全角质化，此可能是治疗月经不调的主要理论依据之一[2]。临床研究表明中医中药调经以促卵泡发育、促排卵疗效确切、可提高妊娠率的中药为主，其中香附使用率高，其能解气、血、痰、火、湿、食六般郁邪，调经常配合当归、川芎、熟地、红花、川楝子、桃仁等，因此香附为妇科调经之要药。在卵巢内部，由于p450arom受抑制，使雄激素转化为雌激素受阻，导致雄激素在卵泡内短暂积聚，从而增强FSH受体的表达并促使卵泡发育。说明P450arom在卵泡发育和排卵过程中起着重要作用，是卵泡发育和排卵的关键机制之一。本研究从卵泡数目、卵巢组织P450arom方面对比观察香附和来曲唑对大鼠卵泡发育及排卵的影响，以探索香附调经的作用靶点及其机制。实验结果表明：（1）香附和来曲唑都可促进大鼠卵泡发育；（2）香附和来曲唑均能下调卵巢组织P450arom表达，以促进卵泡发育和排卵；（3）通过香附与来曲唑对大鼠卵巢组织P450arom的表达，进一步推测两者促卵泡发育可能具有相同的作用靶点和作用机制。

[1]Kilic-Okman T,Kucuk M,Altaner S.Comparison of the effects of letrozole and clomiphene citrate on ovarian follicles,endometrium,and hormonelevelsin therat[J].Fertil Steril,2003,80(6):1 330-1 332

[2]王洁琳,郑志群.第三代芳香化酶的促排卵作用的研究进展[J].医学综述,2007,13(15):1 176-1 178