新型黄烷酮类芳香化酶抑制剂的合成及其活性研究

周雪亮，周 渊，陈天维，胡雯雯，孙荣泰

（徐州医科大学，江苏 徐州 221000）

芳香化酶CYP19是雌激素生物合成过程中的一个关键酶[1]，雌激素与多种常见的女性疾病（乳腺癌、卵巢癌等）的病理过程有着密切的联系，抑制芳香化酶CYP19的活性可以抑制雌激素的生成，从而减少绝经后妇女乳腺癌等疾病的发病率[2]。而以芳香化酶为靶标的研究一直都是抑制剂研究的热点，目前已有多个芳香化酶抑制剂进入临床试验阶段或已上市[3]。

当前，针对(-)-Pinostrobin衍生物的设计、合成及其生物活性研究目前仍是空白，构效关系也一直尚未明确[4]。因此，本项目以合成先导化合物(-)-Pinostrobin为基本目标，并对其A环，B环以及C环分别进行结构修饰，采用分子对接的方法，利用简单的原料，快速、简便地合成一系列具有潜在抗芳香化酶CYP19活性的黄烷酮类化合物，合成得到的产物经氢核磁共振谱等表征确认结构，同时构建可供活性筛选的化合物库，为进一步研究其构效关系，开发新型芳香化酶抑制剂奠定基础。

1 资料与方法

1.1 试剂与仪器

反应IKEA搅拌器中、温控油浴下进行，薄层层析法（TLC）跟踪检测反应进程。称量样品是用电子天平FA1204B进行称量，化学反应是用型号为MR Hei-Tec的磁力搅拌器完成的；TLC使用的GF2高效硅胶板及柱层析采用的硅胶（200-300目）均为青岛海洋化工厂生产；酶联免疫法则是采用雌酮ELISA试剂盒直接检测反应体系中的雌酮浓度。

1.2 抗芳香化酶CYP19活性研究

实验中采用人胎盘微粒体作为酶源，雄烯二酮作为底物，体外进行芳香化反应，用酶联免疫法(ELISA) 检测生成的雌酮浓度。将体外反应液加入96孔板中，20 μl／孔，加入一定浓度的黄烷酮类化合物后反应30 min，用酶联免疫检测仪在波长为620 nm处测定每孔的光密度值，以阿那曲唑为阳性对照，并计算酶抑制率，作为化合物抑制活性的表征值。

2 结 果

2.1 黄烷酮类化合物反应结果

2.2 抗芳香化酶CYP19活性研究结果

利用雌酮ELISA试剂盒直接检测反应体系中的雌酮浓度，用酶联免疫检测仪在波长为620 nm处测定每孔的光密度值，并计算相应的黄烷酮类化合物酶抑制率。实验在目标化合物浓度为50 μmol/L的条件下进行，阳性对照为阿那曲唑，经多次重复实验及统计分析（n=3，P＜0.05），得到测试结果。实验结果见表2。

表2 芳香化酶CYP19抑制活性结果（n=3，）

表2 芳香化酶CYP19抑制活性结果（n=3，）

编号 终浓度（μmol/L） 抑制率（%）1 50μmol/L 46.61±3.22 2 50μmol/L 47.35±4.21 3 50μmol/L 81.49±2.78 4 50μmol/L 86.45±3.92 5 50μmol/L 75.89±4.12 6 50μmol/L 85.21±3.91 7（阿那曲唑） 50μmol/L 95.68±2.59

3 讨 论

黄烷酮类化合物可从自然界多种植物中提取分离得到，是一种具有“优势结构”的物质，(-)-Pinostrobin是其中的一种[5]，已有大量文献表明，(-)-Pinostrobin具有多种生物活性作用，特别对芳香化酶CYP19有明显的抑制作用[6]。

酶联免疫活性测试表明，由(-)-Pinostrobin结构衍生的黄烷酮类化合物对芳香化酶CYP19具有明显的抑制作用，通过提高黄烷酮类化合物的浓度，酶抑制率显著提高。当终浓度为50 μmol/L时，化合物3、4、5、6酶抑制作用显著提高，抑制率＞50%，其中化合物3、4、6酶抑制率＞80%，甚至接近阳性对照组，表明化合物3、4、6是具有潜在的药物开发和研究价值的黄烷酮类化合物。

通过上述实验，以先导化合物(-)-Pinostrobin为骨架衍生的黄烷酮类化合物简单易得，反应快速，产出率较高，结构中含有A环、B环、C环三个活性环骨架，具有潜在抑制芳香化酶CYP19的活性作用。通过进一步生物活性筛选，对于抑制率＞80%的化合物，其进一步的构效关系研究对开发新型芳香化酶抑制剂具有重要的价值和意义。