非小细胞肺癌中CD44和nm23-H1的表达及临床意义

李雪曼，杨桂芳

(1.武汉大学中南医院病理科，湖北武汉430030;2.武汉市第三医院胸外科，湖北武汉430060)

肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，近年来，肺癌的发病率呈全球上升趋势，是全世界目前发病率和病死率最高的癌症。寻求新的肿瘤标志物与治疗靶点已成为肺癌研究的热点。CD44是一种与恶性肿瘤转移相关的重要黏附分子，nm23-H1是目前研究最多的肿瘤转移抑制基因，但它们是否为肺癌转移的基因标志物尚无定论。大量研究表明［1］，CD44可促进肿瘤的侵袭和转移，但其在肺癌研究方面的相关文献颇为少见。此外，已有nm23-H1基因与黑色素瘤、肝癌等多种人类肿瘤转移相关的报道［2］，但关于 nm23-H1基因缺失与肺癌的关系，目前国内少见报道。本研究通过免疫组织化学法检测CD44和nm23-H1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况，并探讨其与肺癌临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 标本

42例非小细胞肺癌癌标本为2011年7月至2012年10月手术切除或取活检(纤支镜或经皮肺穿刺)所得，经病理诊断为原发性肺癌，术前均未行放疗和化疗。其中男 29例，女13例;年龄39～81岁，平均63.5岁。鳞状上皮细胞癌20例，肺腺癌14例，大细胞未分化癌8例。按2009年国际肺癌研究协会(IASLC)TNM分期分级标准:Ⅰ期9例，Ⅱ期7例，Ⅲ期16例，Ⅳ期10例(均为纤支镜或肺穿刺取活检所得标本);分化程度:低分化12例，中分化24例，高分化6例。淋巴结转移19例，无淋巴结转移23例。另取癌旁组织21例(距肿瘤边缘3 cm)和肺部良性病变组织14例(分别为肺大泡8例，肺囊肿3例，肺脂肪瘤1例及错构瘤2例)作为对照。所有病理标本均用SP法进行免疫组化染色。

1.2 方法

1.2.1 试剂 一抗为小鼠抗人CD44单克隆抗体，小鼠抗人nm23-H1单克隆抗体。二抗为羊抗小鼠FTTC-IgG，抗体及链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2.2 免疫组织化学染色 应用SP法进行免疫组织化学染色。已知阳性片作为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。CD44主要定位于细胞膜，细胞膜呈棕黄色为阳性。nm23-H1主要定位于细胞质，细胞质中出现深棕色颗粒染色为阳性。随机观察10个高倍镜视野计算均值。

1.2.3 结果判定 CD44及nm23-H1蛋白表达根据阳性细胞所占观察同类细胞总数的百分率分为阳性或阴性，阳性细胞数≤5%为-;5% ～25%为+;25% ～50%为++;≥50%为+++。这两种蛋白表达呈+～+++时，均为阳性，染色结果由阳性细胞的染色强度和阳性细胞的百分率共同决定。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计处理，计数资料用例数及百分数表示，率的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌组织中CD44和nm23-H1蛋白的表达

非小细胞肺癌中CD44和nm23-H1的表达，见图1。其中CD44蛋白在肺癌组织中呈阳性表达，nm23-H1蛋白呈阴性表达。

图1 非小细胞肺癌中CD44和nm23-H1蛋白的表达(免疫组织化学染色×400)Fig 1 Expression of CD44 and nm23-H1 in lung tissues from patients with non-small cell lung cancer(Immunohistochemistry×400)

2.2 各组标本中CD44和nm23-H1蛋白的表达

免疫组织化学结果显示，CD44在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织，癌旁组织高于良性病变组织，而 nm23-H1则与之相反(P均 ＜0.01)，见表1。

表1 3组不同组织中CD44和nm23-H1蛋白的表达 例Tab 1 Expression of CD44 and nm23-H1 in different groups

2.3 CD44和nm23-H1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、有无淋巴结转移和病理分级的关系

非小细胞肺癌组织中CD44和nm23-H1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、有无淋巴结转移和病理分级的关系，见表2。结果显示，CD44蛋白的表达与肺癌淋巴结转移及临床分期呈正相关，nm23-H1蛋白表达与肺癌淋巴结转移及临床分期呈负相关，两者表达阳性率均与肿瘤分化程度无明显相关性。

表2 非小细胞肺癌组织中CD44和nm23-H1蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系Tab 2 Relationship between CD44 and nm23-H1 expression and clinical characteristics in non-small cell lung cancer

3 讨论

黏附分子蛋白CD44基因位于11号染色体短臂上，其作用主要有以下几个方面:①介导淋巴细胞与高内皮微静脉的结合，促使淋巴细胞归巢;②参与细胞与细胞之间，细胞与间质之间的相互作用;③激活和促进淋巴细胞的作用;④介导信号间转导;⑤ 参与细胞的迁移与增殖，调节细胞周期;⑥控制药物的吸收和调节细胞对药物的敏感性;⑦与肿瘤细胞的增殖和转移有关［3-4］，病理情况下，CD44可介导肿瘤细胞与宿主细胞及细胞外基质间的相互作用。有研究显示，非小细胞肺癌患者血清中CD44的表达与肺癌临床分期和转移呈正相关，与生存期呈负相关［5］;CD44表达越高，淋巴结转移越强［6］。本研究结果与上述研究基本相符，非小细胞肺癌组织中CD44表达率明显高于癌旁组织，而癌旁组织CD44表达高于良性病变组织，推测CD44蛋白表达可能与细胞的增殖、再生以及恶性转化有关。

核苷二磷酸激酶(NDBK)为nm23基因编码的蛋白产物，参与多种生物活动，在细胞信号传递﹑细胞分化﹑维持细胞的正常骨架等过程中起到重要作用［7］。NDBK可能通过两种途径参与细胞调节:①影响细胞微管的聚合及解聚。当nm23蛋白出现缺失或结构改变时，既可引起微管聚合的异常，导致癌细胞异倍体的增加，促进肿瘤的发生发展，又可通过影响细胞的迁移运动，促进肿瘤的浸润转移。②通过调节G蛋白的信号传递，发挥负调节作用，进而抑制肿瘤的发生发展［8］。本研究结果显示，nm23-H1在肺良性病变组织中的表达明显高于非小细胞肺癌组织及癌旁组织;在非小细胞肺癌中，nm23-H1蛋白的表达随癌细胞浸润程度的加深而逐渐降低，有淋巴结转移者的阳性表达较无淋巴结转移者明显降低，提示nm23-H1在肺癌的浸润及转移中发挥着负性调节作用。

本研究结果显示，肺癌有淋巴结转移者CD44蛋白表达明显高于无淋巴结转者，提示CD44蛋白的表达与肺癌的转移呈正相关。同时还发现肺癌有淋巴结转移者，nm23-H1蛋白的表达明显低于无淋巴结转移者，提示nm23-H1基因对肿瘤的抑制作用，说明其与肺癌的转移呈负相关。nm23-H1蛋白表达越低或缺失者，淋巴结转移越强［9］。不排除CD44的过度表达和nm23-H1的低表达在肺癌的发生发展中可能起协同作用。

本研究采用免疫组织化学法检测非小细胞肺癌组织中CD44和nm23-H1的表达，结果显示，两者的异常表达与肺癌的发生、分化、转移及临床分期关系密切，这为肺癌的诊断、分级、高危转移人群的筛选提供了可靠的依据，也为非小细胞肺癌的治疗提供了新的靶点，关于两者的过表达及低表达与肺癌复发及预后的关系有待进一步研究。

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［5］黄兰卿，梁红卫，容永璋，等.肺癌患者血清中sCD44V6含量及内镜活检组织中CD44V6表达的临床意义［J］.中华实验外科杂志，2005，22(10):1231-1232.

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