热休克蛋白27、转化生长因子-β1在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

陈霞，袁国跃，王东，王莹，李梅

(江苏大学附属医院内分泌科，江苏镇江212001)

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占所有甲状腺恶性肿瘤的60% ～70%，病理组织学和某些具有显著的假乳头结构的良性乳头状增生性疾病不易鉴别，影响临床诊断和治疗。本研究通过对甲状腺乳头状癌细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)蛋白质表达变化进行检测，以探讨这两种细胞因子在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 取江苏大学附属医院病理科2009年1月至2011年12月外科手术切除的甲状腺标本及存档蜡块共130例，经组织病理明确诊断，其中甲状腺乳头状癌50例，男10例，女40例，年龄17～73岁，中位年龄44岁;甲状腺腺瘤50例，男10例，女40例，年龄14～73岁，中位年龄44岁;正常甲状腺组织30例，男6例，女24例，年龄11～73岁，中位年龄47岁。

1.2 免疫组化染色

1.2.1 HSP27、TGF-β1检测 采集标本，甲醛固定，常规脱水透明、浸蜡、包埋，部分已为蜡块包埋，连续切片，厚度约为4 μm，APES防脱玻片(北京金麦克公司)黏附，采用免疫组织化学法，分别对HSP27、TGF-β1进行染色(兔抗人 HSP27 多克隆抗体、兔抗人TGF-β1多克隆抗体、免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司;DAB显色试剂盒购于北京康为世纪生物有限公司)，采用已知阳性对照片(购自福州迈新生物技术开发有限公司)进行阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。染色步骤严格按照试剂盒产品说明书进行。

1.2.2 结果判断 取染色效果较好的组织切片，避开肿瘤坏死及边缘区域，在高倍视野下(×400)随机选取5个阳性细胞数较多的视野进行计数，采用半定量积分法对每张切片的阳性细胞率及阳性细胞着色强度分别进行分级记分。阴性为0分，阳性细胞数≤10%为1分，11% ～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。同时根据染色强度评分，不着色为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐色为3分。阳性细胞百分比与染色强度之积＞3分即为免疫反应阳性。所得结果可分为4个等级:(－)0～2分，(+)3～4分，(++)6～8分，(+++)9～12分。

1.3 统计学处理

应用SPSS 16.0统计软件包进行统计分析。两样本阳性率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HSP27、TGF-β1在3 种甲状腺组织中的免疫组化结果

HSP27在正常甲状腺组织中呈阴性表达或低表达，而在富于癌细胞的增生区高表达，免疫组化染色呈现棕黄或者棕褐色，对应肿瘤周围组织中仅见散在梭形细胞和血管内皮细胞的胞质着色。TGF-β1在癌细胞的胞质呈阳性表达，富于癌细胞的增生区域尤为突出，免疫组化染色呈棕黄或者棕褐色，正常甲状腺组织中呈阴性表达或低表达。见图1。

图1 HSP27、TGF-β1在3种甲状腺组织中的免疫组化结果(×400)Fig 1 Immunohistochemistry results of HSP27、TGF-β1in different thyroid tissues

2.2 HSP27、TGF-β1在3 种甲状腺组织中的阳性表达率比较

甲状腺乳头状癌组织与甲状腺腺瘤组织相比，HSP27、TGF-β1的阳性表达率差异有统计学意义(χ2=5.002，P ＜ 0.05;χ2=3.933 9，P ＜0.05);甲状腺乳头状癌组织与正常甲状腺组织相比，HSP27、TGF-β1阳性表达率差异亦有统计学意义(χ2=4.301 1，P ＜ 0.05;χ2=4.983 5，P ＜0.05);甲状腺腺瘤组织和正常甲状腺组织间的HSP27、TGF-β1阳性表达率比较，差异无统计学意义(χ2=0.013 6，P ＞0.05;χ2=0.222 6，P ＞0.05)。见表 1。

表1 HSP27、TGF-β1蛋白在3种甲状腺组织中的表达Tab 1 Expression of HSP27 and TGF-β1in different thyroid tissues

3 讨论

正常组织细胞内HSP27的表达水平很低［1］。应激状态可致胞内HSP27磷酸化并致其寡聚体解聚，HSP27表达上调［2］。HSP27在肿瘤发病中的作用与其对细胞的影响有关，它在细胞凋亡信号通路中可与相关活性蛋白相互作用并抑制凋亡信号的转导，抑制细胞凋亡［3］。对高度恶性甲状腺疾病的研究发现，恶性甲状腺疾病细胞系C-643中HSP27-1高表达，且这种高表达与HSP对HSP27-1表达基因启动子的活化直接有关［4］。本资料结果显示HSP27在正常甲状腺组织及甲状腺腺瘤组织中阳性表达率较低，而在甲状腺乳头状癌中阳性表达率明显升高，表明HSP27的阳性表达率高同样与甲状腺乳头状癌发病密切相关。

临床研究发现，人类激肽释放酶2、早期前列腺癌抗原、尿激酶型纤溶酶原激活物/尿激酶型纤溶酶原激活物受体、TGF-β1、IL-6/IL-6受体的表达与肿瘤的发生发展密切相关，这些因子均可用于早期肿瘤的预测和肿瘤患者的病情判断［5］。TGF-β1与其受体(如TGFβ1R1)结合后可抑制多种细胞增殖、分化并促进细胞间质形成［6］。且TGF-β1具有调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、细胞外基质形成、肿瘤血管形成、细胞黏附和迁移以及抑制机体抗肿瘤免疫等作用［7］。在肿瘤细胞中，TGF-β1可以上调基质金属蛋白酶-9，促进细胞外基质降解，利于肿瘤细胞浸润和转移［8］。这均说明TGF-β1与肿瘤的发生、发展有着密切关系。本研究结果中甲状腺乳头状癌组织中TGF-β1的阳性表达率明显高于甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织。另有研究发现甲状腺低分化癌DH-14-3细胞可表达IL-8、TGF-β1、血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶-1和甲状旁腺相关蛋白［9］，说明TGF-β1阳性表达率与甲状腺乳头状癌发生、发展有关。

综上所述，HSP27和 TGF-β1在甲状腺乳头状癌中阳性表达率显著升高，可能是甲状腺乳头状癌发生、进展及预后判断的重要生物学标志物，可作为甲状腺良恶性病变鉴别诊断及评估甲状腺乳头状癌预后的参考指标。

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