不同产地天门冬水提液抗氧化能力比较

欧立军 危 革 周红灿 郑 镇 李军桃 (怀化学院生命科学系，湖南 怀化 48008)

不同产地的同种药材，其活性成分的种类及含量均有所不同，导致其药效的差异，从而中药材讲究道地性〔1～5〕。对道地药材的判断方法很多，如高效液相色谱法〔6～9〕、光谱法〔10～12〕和分子标记〔13～16〕等方法，但少见从药理学角度进行中药材的道地性分析。天门冬为天门冬属植物，具有较强的抗氧化能力〔17～20〕。对天门冬药材的道地性探讨较少，仅见通过ITS序列初步认为贵州产天门冬遗传多样性较大，可能是其道地产区〔14〕。本文从药理学角度对不同地区天门冬进行抗氧化能力比较。

1 材料与方法

1.1 试验材料 我国贵州、湖南、广东、广西、云南、青海和浙江7个省产的天门冬。昆明种健康雄性小鼠，2月龄，体重(20±2)g，分为空白对照组、衰老模型组和给药组，每组10只。

1.2 实验方法

1.2.1 药剂制备 天门冬低温烘干后，粉碎成粗粉。取天门冬粗粉20 g，加水160 ml煮提3次，1 h/次，合并3次提取液，过滤后浓缩得天门冬水提液;把所得的药剂稀释到生药浓度0.7 g/ml，冷藏备用。

1.2.2 衰老和给药模型的构建 对照组每天皮下注射生理盐水;衰老模型组每天注射 D-半乳糖(7 mg/ml，经130℃灭菌，100 mg/kg);给药组每天注射 D-半乳糖(上海试剂二厂)(100 mg/kg)，同时灌胃天门冬水提液(2 g/kg)。各组分笼饲养，自由进水。

1.2.3 生理指标测定 连续给药30 d后，断头处死，取血，3 000 r/min离心取血清;取肝脏、脑、心、肺称重，用生理盐水分别制成1%和10%的匀浆。南京建成产试剂盒进行起氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的测定。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0进行分析，数据以s表示，各组之间差异的比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 天门冬对小鼠脑NOS、CAT、SOD活性与NO和MDA含量的影响 各地区天门冬水提液均能提高小鼠脑的SOD、NOS和CAT的活力，使NO含量上升，MDA含量降低(均P＜0.05);不同产区天门冬的提高或降低比率存在明显差异，贵州和湖南产天门冬提高抗氧化系统酶活性明显高于其他产区天门冬，且升高NO含量和降低MDA含量同样与其他产区天门冬存在显著差异(均P＜0.05)。见表1。

2.2 天门冬对小鼠肝NOS、CAT、SOD活性与NO和MDA含量的影响比较 7个给药组小鼠肝的NOS、CAT和SOD活性及NO含量都比衰老组高，MDA含量比衰老组低，SOD活性和NO含量比对照组低(均P＜0.05);不同产区天门冬的效果存在显著差异，贵州和湖南产天门冬效果最好，云南和青海产天门冬次之，其他产区一般(P＜0.05)。见表2。

2.3 天门冬对小鼠血清NOS、CAT、SOD活性与NO和MDA含量的影响 7个给药组小鼠血清的SOD、NOS和CAT活性、NO和MDA含量与衰老组差异显著(均P＜0.05);贵州和湖南产天门冬的抗氧化效果显著优于其他产区(P＜0.05)。见表3。

表1 不同产地天门冬水提液对脑NOS、CAT、SOD活性与NO和MDA含量的影响( s，n=10)

表1 不同产地天门冬水提液对脑NOS、CAT、SOD活性与NO和MDA含量的影响( s，n=10)

与衰老组比较:1)P＜0.05，与其他产地天门冬比较:2)P＜0.05;下表同

处理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)对照组 98.31±4.44 1.48±0.035 32.34±0.98 1.43±0.08912.50±1.06衰老组 63.99±4.20 1.35±0.057 20.67±2.16 2.59±0.255 5.08±0.85给药组 贵州产 93.47±4.051)2) 1.63±0.0551)2) 47.80±1.811)2) 1.09±0.0281)2) 22.02±1.831)2)湖南产 92.25±3.641)2) 1.59±0.0291)2) 48.47±2.481)2) 1.15±0.0471)2) 21.37±1.361)2)广东产 74.31±3.471) 1.41±0.0641) 38.36±2.141) 1.39±0.0581) 16.02±1.781)广西产 76.67±5.141) 1.39±0.0341) 36.24±3.251)1) 1.41±0.0971) 15.39±2.131)云南产 85.21±3.981) 1.48±0.0671) 40.47±2.401) 1.34±0.0551) 18.44±1.501)青海产 79.68±2.471) 1.42±0.0401) 42.80±3.031) 1.29±0.0741) 19.21±2.141)浙江产 86.34±3.191) 1.44±0.0641) 34.56±1.681) 1.37±0.061) 17.57±1.391)

表2 天门冬不同提取液对小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影响( s，n=10)

表2 天门冬不同提取液对小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影响( s，n=10)

?处理对照组 55.65±2.81 0.84±0.130 54.61±3.32 1.32±0.2734.95±0.017衰老组 49.54±2.88 0.74±0.117 45.72±4.5 1.75±0.136 1.91±0.016给药组 贵州产 51.87±3.011)2) 1.11±0.2231)2) 57.28±3.141)2) 1.14±0.1241)2) 3.75±0.0451)2)湖南产 52.36±2.751)2) 1.08±0.1941)2) 58.01±2.241)2) 1.18±0.0381)2) 3.98±0.0321)2)广东产 50.35±3.551) 0.79±0.1141) 54.10±1.871) 1.34±0.0471) 3.01±0.0181)广西产 50.24±2.671) 0.82±0.1321) 53.26±3.021) 1.30±0.0871) 2.89±0.0231)云南产 50.87±4.381) 0.87±0.1231) 55.14±2.221) 1.28±0.0741) 3.31±0.0501)青海产 51.47±1.801) 0.90±0.1141) 54.87±2.571) 1.33±0.0571) 3.43±0.0421)浙江产 50.89±2.491) 0.82±0.1341) 52.14±1.451) 1.39±0.0771) 3.12±0.0321)

s，n=10)表3 天门冬不同提取液对小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影响(

s，n=10)表3 天门冬不同提取液对小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影响(

处理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)对照组 96.42±9.29 46.52±3.32 0.61±0.083 24.96±3.80987.64±46.14衰老组 72.58±6.47 43.76±4.51 0.072±0.0132 29.64±4.46 503.26±27.08给药组 贵州产 102.65±8.131)2) 57.21±3.431)2) 0.85±0.0541)2) 22.67±2.211)2) 985.52±32.121)2)湖南产 99.10±7.581)2) 59.54±3.191)2) 0.74±0.0201)2) 21.35±1.321)2) 978.36±35.031)2)广东产 95.36±8.741) 49.36±4.141) 0.58±0.081) 23.44±1.941) 805.36±40.241)广西产 96.31±9.271) 50.17±2.321) 0.54±0.0221) 23.78±1.871) 824.31±30.021)云南产 97.87±8.301) 55.39±3.231) 0.64±0.0521) 22.98±2.071) 905.21±25.051)青海产 95.87±7.811) 54.18±4.141) 0.65±0.0521) 23.07±2.571) 918.39±30.041)浙江产 94.25±7.491) 51.02±3.341) 0.58±0.0411) 23.57±3.071) 836.25±40.021)

3 讨论

衰老是生命的必然过程，提高抗氧化系统酶活性，抑制脂质过氧化反应，清除自由基，是中药材抗氧化，延缓衰老的重要机制〔21〕。MDA是脂质过氧化物的分解产物，可间接反映机体自由基水平的代谢情况〔22，23〕。随着年龄的增长，NO的含量逐渐下降，许多生理作用不能发挥而加速机体衰老进程〔24〕，NO的生成量与NOS的活性密切相关〔25〕。SOD和CAT广泛存在于各类生物体中，是机体重要的抗氧化酶，可催化生物体内的超氧自由基发生歧化反应，降低自由基代谢产物MDA的生成〔26～31〕。本文结果表明，7个省产天门冬都可以提高提高机体内各种抗氧化系统相关酶活性，增加NO生成量，从而达到减少机体过氧化损伤程度而延缓衰老。

针对传统药用植物的品质退化进行品质改良，选育优良品种，是优化中草药品质的根本途径，选育出优质、高产、稳产、熟期适当、抗性强和适应性广，是各种药用植物育种的共同目标〔32，33〕。天门冬在我国分布较广，主要依靠野生资源。近些年由于天门冬用量大增，野生天门冬资源逐年减少，且生态破坏严重，因此人工栽培成为解决天门冬资源紧张和保护环境的必要手段，而优异种质是人工栽培的重要方面。本文研究认为，贵州和湖南产天门冬具有更有效地抗氧化损伤和减少过量自由基的损伤能力，有更明显的抗衰老效果。因此，这些地区可以成为人工栽培天门冬及引种的首选，并可以从中选育出抗氧化能力强、产量高和适应性广的优良新品种。

1 袁 晓，高俊飞，舒楚金，等.不同产地决明子中9种蒽醌类成分的测定〔J〕.中草药，2012;43(9):1773-5.

2 白雪媛，赵 雨，刘海龙，等.不同产地人参中的总糖、还原糖和可溶性多糖含量的比较研究〔J〕.中国现代应用药学，2012;29(2):39-42.

3 梁臣艳，覃洁萍，陈玉萍，等.不同产地防风挥发油的GC-MS分析〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012;18(8):80-3.

4 鞠成国，徐 刚，宋勇军，等.不同产地生制狗脊中总酚酸含量比较〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012;18(10):24-6.

5 吴雪松，叶正良，郭巧生，等.东北不同产地人参及其加工品外观性状及非皂苷类成分比较分析〔J〕.中国中药杂志，2012;37(16):2383-7.

6 蔡晓翠，贺金华，徐 芳，等.新疆道地药材伊贝母HPLC-ELSD指纹图谱研究及西贝母碱的含量测定〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012;18(21):82-5.

7 胥秀英，郑一敏，傅善权，等.重庆道地药材青蒿高效液相色谱指纹图谱研究〔J〕.时珍国医国药，2009;20(5):1188-9.

8 袁清照，张水寒，李顺祥，等.吴茱萸道地药材的高效液相指纹图谱研究〔J〕.中草药，2010;41(9):1534-8.

9 崔 洋，王 巧，张兰桐，等.河北道地药材连翘的高效液相色谱指纹图谱研究〔J〕.中草药，2010;41(2):297-301.

10 王钢力，石 岩，魏玉海，等.近红外光谱鉴别冬虫夏草道地药材〔J〕.中草药，2006;37(10):1569-71.

11 郭兰萍，黄璐琦，Christian WH.近红外光谱技术及其在中药道地性研究中的应用〔J〕.中国中药杂志，2009;34(14):1751-7.

12 白 雁，李雯霞，王 星，等.近红外光谱法测定道地产区生地黄中梓醇的含量〔J〕.中国实验方剂学杂志，2010;16(13):45-7.

13 刘 颖，刘东吉，刘春生，等.基于 HMGR、SQS1、β-AS基因 CNVs的甘草道地性机制研究〔J〕.药学学报，2012;47(2):250-5.

14 欧立军，张人文，谈智文，等.我国不同地区天门冬核DNA ITS序列分析〔J〕.中草药，2011;42(7):1402-6.

15 刘明珍，陈乃富，刘秀珍，等.道地药材霍山石斛及其相似种的分子鉴定〔J〕.生物学杂志，2009;26(5):34-6.

16 曹 亮，李顺祥，魏宝阳，等.吴茱萸RAPD体系构建及道地性遗传背景研究〔J〕.中草药，2010;41(6):975-8.

17 李 敏，费 曜，王家葵.天冬药材药理实验研究〔J〕.时珍国医国药，2005;16(7):580-2.

18 曲凤玉，毛金军.天门冬对D-半乳糖衰老模型小鼠红细胞膜、干细胞膜MDA影响的实验研究〔J〕.中草药，1999;30(10):763-4.

19 张鹏霞，曲凤玉.天门冬醇提取液对D-半乳糖致衰小鼠脑抗氧化作用的实验研究〔J〕.中国老年学杂志，2000;20(1):42.

20 赵玉佳，孟祥丽.天门冬水提液及其纳米中药对衰老模型小鼠NOS、NO、LPF的影响〔J〕. 中国野生植物资源，2005;24(3):49-51.

21 袭 月，杜冠华，屈志炜.常用补益中药抗脂质过氧化作用比较〔J〕.中国中药杂志，1996;31(2):83-6.

22 吴秋萍，王 姣，乐国伟，等.加热或丙二醛氧化大豆蛋白对小鼠体内自由基水平及抗氧化能力的影响〔J〕.营养学报，2011;33(1):14-8.

23 田 卉，周海洋，刘 梅.刺山柑提取物的体外抗脂质过氧化作用〔J〕.中药药理与临床，2011;27(6):69-70.

24 Mollace V，Rodino P，Massoud R，et al.Aged-dependent changes of NO synthase activity in rat brain〔J〕.Biochem Biophy Res Commun，1995;215(3):822-7.

25 张 林，戴体俊，刘红亮，等.硫喷妥钠麻醉前后鼠脑 NOS活性，NO的动态变化〔J〕.中国药理学通报，2001;17(3):3191.

26 夏花英，张江虹，谢月霞，等.左归丸对D-半乳糖致衰老大鼠血液抗氧化能力和淋巴细胞DNA损伤的影响〔J〕.中华中医药杂志，2012;27(11):2937-8.

27 刘 丹，尹 东，曾 姝，等.川芎嗪对LPS致心肌细胞损伤的影响及机制研究〔J〕.中国药理学通报，2012;28(11):1531-5.

28 倪庆纯，郭健敏，肖百全，等.两种中药组方对D-半乳糖诱导的衰老模型裸鼠皮肤的影响〔J〕.中草药，2012;43(9):1808-13.

29 杨宏志，李 静，陈明星.开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)抗氧化活性研究〔J〕.中国食品学报，2012;12(8):73-7.

30 黄敬群，文 娟，王四旺，等.槲皮素对大鼠痛风性关节炎抗炎抗氧化活性研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012;18(2):169-73.

31 张利敏，侯志飞，王 刚.N-(2-乙酰氧基)苯甲酰基 -吡咯烷-2-酮对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响〔J〕.中国老年学杂志，2012;32(2):334-5.

32 傅大立，赵东欣，孙金花，等.辛夷挥发油含量及良种选育指标研究〔J〕.河南农业大学学报，2004;38(2):179-83.

33 陈 翠，康平德，杨丽云，等.云南重楼不同地理种源分析评价与研究利用〔J〕.西南农业学报，2009;22(6):1722-6.