通络定眩方对椎动脉型颈椎病兔血液流变学、ET、NO的影响

胡兆斌,傅 强

(南京中医药大学,南京,210046)

椎动脉型颈椎病(CSA)是颈椎病的常见类型之一,好发生于中老年人,是以眩晕、头痛甚至猝倒等临床表现为主的椎-基底动脉供血不足症候群。其研究在国内日渐增多,目前大多数临床医生首选保守治疗。通络定眩方是扬州市中医院研制的院内合剂,是历代医家在治疗CSA过程中总结出来的经验用方。为探讨通络定眩方对CSA的疗效及其与NO、ET、血液流变学的关系,进行了通络定眩方的实验研究,现总结报告如下。

1 材料和方法

1.1 实验动物与分组

选用来自封闭群的普通大耳白兔雌性,合格证号:SCXK(苏)2007-0008,由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供,体质量2.0～2.5 kg,实验前适应性喂养3 d后随机分为4组,即空白组、通络定眩方治疗组、模型组、颈复康治疗组,每组10只。

1.2 试验条件

给药前后,试验动物分笼饲养,喂饲全价饲料(由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供),自由饮水,室温(24±5)℃。

1.3 实验药物及试剂

消痔灵注射液:北京双鹤高科天然药物有限责任公司生产,批号:110503;颈复康颗粒:承德中药集团有限公司生产;ET、NO放免分析测定盒:上海越研生物科技有限公司生产,通络定眩方:扬州市中医院药剂科生产,为骨科临床专用药;乌拉糖:上海贝合化工有限公司,批号20030522;低分子肝素:深圳市天道医药有限公司,批号:040319;戊巴比妥钠:北京化学试剂公司,020402,Q(H82-F158-2002)。

1.4 实验仪器

722分光度计(上海美谱达仪器有限公司生产);THERMOMultiskan MK3全自动酶标仪;离心机H-1600RW(上海利鑫坚离心机有限公司);恒温水浴DU-30G(杭州汇尔仪器设备有限公司);普利生血流变仪LBY-N6A(北京普利生仪器中心制造)。

1.5 造模方法

采用成都中医药大学临床医学院朱明双等[1]注射硬化剂法建立椎动脉型颈椎病家兔模型,用脱毛剂硫化钠去除各家兔颈部和枕后的体毛,经颅多普勒(TCD)检测各家兔椎-基底动脉血流速度并记录。紧接着抽取10 mL消痔灵硬化剂注射于兔左侧C3～C5颈椎横突侧面,并在第2周和4周重复注射。然后再次行TCD检测,选取其中左右两侧椎动脉和基底动脉血流速度均减小大于10 cm/s的家兔作为成功模型。

1.6 给药方式

采用扬州市中医院院内合剂通络定眩方(川芎10g、当归10g、天麻10g、黄芪15g、葛根15 g、茯苓 15 g、白术 15 g、半夏 6 g、陈皮 6 g、甘草6 g)及颈复康颗粒,均按计量换算公式[2]:dB=dA×RB/RA×(WA/WB)1/3计算,通络定眩方以5.20g(生药)/(kg·d)的剂量以体质量10 mL/kg熬制成为药液,颈复康颗粒0.72 g/(kg·d)的剂量以体质量10 mL/kg蒸馏水稀释制成混悬液,灌胃,另2组以也以体质量10 mL/kg生理盐水灌胃。

1.7 观察指标

1.7.1 血液流变学检测:采用肝素抗凝血5mL在普利生血流变仪上测定。

1.7.2 ET、NO检测:各动物心脏采血,抗凝血3000 r/min,离心15 min,分离血浆,-20℃保存;非抗凝血2000 r/m离心10 min,分离血清,-20℃保存,酶联免疫法检测血浆中ET含量,化学法检测血清中NO含量。

2 结 果

2.1 动物一般情况

4组动物造模4周后因各种原因减少,其中模型组成功模型最少,只有6只造模成功,故每组选取6只成功模型,加上空白组总共24只。造模各组动物早期注射侧颈部肌肉出现条索状和肌张力增高,后期部分动物颈部出现偏斜甚至扭曲。

2.2 血液流变学检测结果

见表1、表2。

表1 各组血液流变学的结果比较(,n=6)

表1 各组血液流变学的结果比较(,n=6)

组别 全血高切黏度/(mPa/s)全血中切黏度/(mPa/s)全血低切黏度/(mPa/s)空白组 2.70±0.40 3.73±0.53 7.30±0.70模型组 2.78±0.25 3.79±0.13 6.88±0.14颈复康治疗组 3.99±0.28 4.44±0.28 8.36±0.40通络定眩方治疗组 2.58±0.68 3.43±0.65 8.47±0.12

表2 各组血液流变学的结果比较(,n=6)

表2 各组血液流变学的结果比较(,n=6)

注:经统计学检验所有数据均符合正态性方差齐性,组内比较采用配对t检验,组间比较采用成组t检验,分别检验血液流变学各项指标。

组别 血浆黏度/(mPa/s) 红细胞压积/% 血沉/(mm/h)空白组 1.24±0.03 0.29±0.040 1.33±0.50模型组 1.23±0.04 0.27±0.040 1.00±0.00颈复康治疗组 1.57±0.05 0.37±0.016 1.33±0.50通络定眩方治疗组 1.27±0.06 0.28±0.040 1.00±0.00

从表现1、2结果得出,全血高切:模型组与空白组相比P<0.001,通络定眩方与模型组相比P<0.001,通络定眩方与颈复康相比P=0.876;全血中切:模型组与空白组相比P=0.001,通络定眩方与模型组相比P=0.02,通络定眩方与颈复康相比P=0.810;通络定眩方与颈复康相比p=0.301;全血低切:模型组与空白组相比P=0.001通络定眩方与模型组相比P=0.001。通络定眩方与颈复康相比P=0.276;血浆黏度:模型组与空白组相比P<0.001,通络定眩方与模型组相比P<0.001,通络定眩方与颈复康相比P=0.949;压积:模型组与空白组相比P<0.001,通络定眩方与模型组相比P<0.001,通络定眩方与颈复康相比P=0.345。这说明模型组全血低切、中切、高切黏度明显高于空白组、颈复康治疗组、通络定眩方治疗组(P<0.05),而颈复康治疗组、通络定眩方治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。提示:通络定眩方改善家兔实验性椎动脉型颈椎病的血液流变学的作用较好,与颈复康颗粒相当。

表3 ET、NO测定结果(,n=6)

表3 ET、NO测定结果(,n=6)

注:经统计学检验所有数据均符合正态性方差齐性,组内比较采用配对 t检验,组间比较采用成组t检验,分别检验ET、NO。

组别 NO实验前/(ng/L) NO实验后/(ng/L) ET实验前/(μ mol/L) ET实验后/(μ mol/L)空白组 114.34±25.94 - 242.80±96.93 -模型组 76.21±14.71 74.40±11.40 278.28±40.27 524.62±127.62颈复康治疗组 70.00±13.54 102.23±21.72 393.66±22.05 334.04± 34.16通络定眩方治疗组 76.93±10.67 97.31±10.40 343.46±19.67 215.59±101.92

2.3 NO、ET测定结果

从表3结果得出,ET:治疗前后比较,颈复康 t=-3.223,P=0.023;模型组 t=4.781,P=0.005;通络定眩方,t=-2.727,P=0.041;通络定眩方和模型组比较,t=-5.372,P<0.001;颈复康和通络定眩方比,t=2.401,P=0.037,差异均有统计学意义。NO:治疗前后比较,颈复康 t=3.054,P=0.028;通络定眩方t=4.957,P=0.004;模型组t-4.362,P=0.007;通络定眩方和模型组比较,t=6.010,P<0.001,差异有统计学意义;通络定眩方和颈复康比较,t=1.045,P=0.320,差异无统计学意义。提示:通络定眩方在增加血清NO、降低血浆ET方面有较好效果,甚至对后者的作用优于颈复康颗粒。

3 讨 论

血液动力学因素在椎-基底动脉缺血发病机制中占有重要地位,陈军等[3]临床观察发现,CSA患者的血液黏度基本都偏高,当对患者进行相应治疗后检测发现血液黏度水平均有所下降,提示高血黏度可能是CSA患者发病的一个诱因,临床上针对CSA患者症状给予服用一些降低血黏度的药物,其症状可得到一定程度的缓解,也从另一个侧面支持这个观点。陈健等[4]对椎动脉型颈椎病患者的血液流变学进行检测,发现多项指标明显异常,当患者进行相应治疗后各项异常血液流变学指标均有明显改善,说明血液黏度的变化具有一定的可逆性,且患者全血黏度得到改善后其相应症状也有明显好转或消失,但针对血液黏稠度的治疗并不能使患者本身椎体骨质增生及椎基动脉血管弹性发生改变。根据近年相关实验结果作者认为,血液本身的黏稠度增加、灌流量减少是导致椎动脉型颈椎病的主要原因。

ET是由血管内皮细胞中产生的具有生物活性的缩血管活性肽,其可导致血管痉挛甚至破坏组织器官的功能。冯世庆等[5]采用放射免疫方法研究ET在CSA患者血浆中的变化,发现CSA患者血浆内ET含量约为正常对照组3倍;相关手术治疗后CSA患者的血浆ET含量约为术前的2/3。目前大多数学者认为,ET作为一种体液因子参与心脑血管疾病的发病,并有可能是椎动脉型颈椎病发病的重要体液因素之一,李俊华等[6]通过手术方法建立一侧椎动脉受压模型,实验中观察到模型组的5次血浆内皮素测值均明显高于正常组,说明CSA发病与ET水平之间有着必然联系,并认为ET含量的高低可以作为衡量CSA的指标。伍海昭等[7]测得46例CSA患者在发作期内ET、NO水平逐渐升高,当CSA患者病情处于稳定期时,ET升高、NO减低,结果说明ET和NO可能参与了椎动脉型颈椎病人的发病。

NO是由L-精氨酸和分子氧为底物经几种不同的氧化亚氮合酶(NOS,Nitric oxide synthase)催化合成,属于一种内源性的血管舒张剂,同时NO也可以作为血小板聚集抑制因子、炎症介质和神经递质参与机体其他反应。由于NO具有松弛血管平滑肌、舒张血管和抑制内皮细胞过度增殖等生理功能,血管内皮细胞通过释放NO来松驰血管平滑肌,使血管扩张,并抑制内皮细胞的松弛,在调节血管张力、血液流速和血管内皮细胞的增殖中起着极其重要的作用。CSA患者的血管内皮受到损害,血清中NO含量减少,且缺血缺氧亦可直接抑制内皮细胞合成、释放NO,缺氧产生的自由基也抑制NO活性,NO的失调刺激会内皮毒素释放,引起血管内皮细胞迅速增殖,同时进一步加重了椎-基底动脉的狭窄和缺血,甚至导致脑部供血不足。

本病病机主要为虚、寒、瘀、痰四气杂合而致病,其中以气虚为本,寒、瘀、痰为标,而气虚血瘀的本虚标实之证伴随疾病的始终,采用自拟方通络定眩方治疗本病,取得良好的临床疗效。通络定眩方由川芎、当归、天麻等10味药物组成,其主要功效是燥湿化痰、补气活血,通络止眩,方中葛根味甘辛性凉,轻扬升散,为太阳经之表药,善治因经气不利、筋脉失养所致的项背头痛,是为君药;白术、茯苓健脾燥湿,陈皮燥湿化痰,半夏祛湿化痰、止眩,川芎能“上行头目、下行血海、中开郁结、旁通经络”,为“血中气药”,具有活血行气、祛风止痛之功效,俱为臣药;当归辛行温通,为补血活血要药,可补血活血,通络止痛,天麻祛风通络,既平肝,又息风,为治疗眩晕、头痛之要药,不论虚证、实证,随不同配伍皆可应用,黄芪补气以行血,同为佐药;甘草调药和中,是为使药。诸药合用,共奏燥湿化痰、补气活血,通络止眩之功。本方可随症加减,在改善头痛、眩晕症状方面效果显著。

本研究结果表明,“通络定眩方”对椎动脉型颈椎病模型兔具有降低血黏度,抑制血小板的黏附与聚集的作用,能增加大脑血流量和供氧量,并且能够降低椎动脉型颈椎病患者的红细胞聚集指数、血浆黏度、全血黏度,增强红细胞变形的能力,改善血液流变学,通过降低血液黏度,扩张血管,改善局部血液循环,从而达到患者患者临床症状与体征的效果。

[1]朱明双,郑重,黄勇,等.注射硬化剂法制作家兔椎动脉型颈椎病动物模型[J].中医正骨,2000,12(12):11.

[2]孙敬方.动物实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2001:368.

[3]陈军,李静.推拿对椎动脉型颈椎病患者血液流变学及血清氧化亚氮与血清内皮素的影响[J].时珍国医国药,2008,19(8):2028.

[4]陈健,金忠提,周忠富,等.颈椎退变性眩晕患者的血液流变学变化及加味补阳还五汤对其治疗作用的研究[J].中国中医骨伤科,1995,3(1):4.

[5]冯世庆,杨明杰,孔晓红,等.椎动脉型颈椎病血浆内皮素变化[J].中华骨科杂志,1997,17(6):387.

[6]李俊华,潘子毅.椎动脉受压动物模型血浆内皮素的变化[J].中国中医骨伤科杂志,2003,11(5):16.

[7]伍海昭,林列,朱加德,等.椎动脉型颈椎病血浆 ET、NO的变化[J].中医正骨,2004,16(2):3.