CD146 在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜中的表达及意义

郭蕊萌，尹利荣，王宇全，马洪达

（天津医科大学第二医院妇科，天津 300211）

子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的其他部位，并生长、发育，引起症状。其为良性疾病，但具有恶性肿瘤的生物学特性，严重困扰着罹患妇女。EMs 发病机制尚不明确，但血管形成是异位内膜能够成功种植、生长的关键步骤。CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的黏附分子，在肿瘤细胞的生长、转移和血管生成中发挥了重要作用，已被认为是抗肿瘤血管新生的靶目标，而其在EMs 中的表达及意义却缺乏研究。本研究检测了EMs 患者在位、异位内膜中CD146 的表达情况，并结合微血管密度（MVD）的检测探讨其在EMs 发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 EMs组：选择2010年1月-2012年2月在我院因子宫内膜异位症行手术治疗的病人50例，平均年龄（34.74±3.132）岁。异位内膜标本取材于卵巢子宫内膜异位囊肿壁；在位内膜标本取材于患者术前的诊刮内膜或术中切除的子宫标本内膜，其中增殖期内膜26例，分泌期内膜24例。对照组：选择同期在我院因子宫肌瘤行手术治疗的患者50例，平均年龄（37.06±2.632）岁。术前留取诊刮内膜或术中对切除的子宫标本内膜进行取材，其中增殖期内膜22例，分泌期子宫内膜28例。EMs组及对照组病人均月经规律，术前3个月无激素治疗病史,排除子宫腺肌病，无合并内外科疾病。EMs组与对照组患者年龄差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 主要试剂 鼠抗人多克隆CD146 抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司，鼠抗人单克隆CD34 抗体及DAB 显色试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 染色方法 将内膜组织制成4 mm 左右病理切片。CD146、CD34 浓度为1∶100，免疫组化染色采用生物素-酶标链霉亲和素（SP）法，具体操作步骤按试剂盒内说明书进行，以PBS 缓冲液代替一抗（浓度为1∶100）作为阴性对照。

1.4 结果判断

1.4.1 CD146 阳性率计算方法 CD146 阳性表现为细胞膜或细胞浆上显示棕黄色颗粒。按其染色强度评分分为：0 分，细胞不着色；1 分，细胞着色强度弱于阳性对照细胞；2 分，细胞着色强度与阳性对照细胞着色强度相同；3 分，细胞着色强度强于阳性对照细胞。将染色强度评分≥1 分的细胞列入阳性细胞计数范围。阳性细胞率=阳性细胞数/观察细胞数×100%。

1.4.2 MVD 计数方法 CD34 阳性表现为细胞膜或细胞浆上显示棕黄色颗粒。CD34 在大多数新生血管内皮细胞表面表达，可显示新生血管的形态，是测定MVD 的特定标记物[1]，采用weider 等方法进行。被CD34 染色的内皮细胞/细胞团，无论有无管腔形成，只要与周围微血管和其他组织不相连，均计数为一个血管，排除肌层较厚及管腔直径大于8个细胞的血管。MVD 计数单位为条/HP。

1.4.3 结果观察方法 每个标本在低倍镜下（10×10）确定3个高密度区域，每个高密度区域在高倍镜下（20×10）计数，最后取3个区域平均值。观察计数由3个实验员分别进行，最终结果取三者平均值。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0 统计软件进行分析，CD146 阳性率（%）及MVD 值（条/HP）数据以±s表示，计量资料的两组比较采用t 检验，多组比较采用方差分析，多组间均数的两两比较采用q 检验，相关性分析采用Spearman 秩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EMs组及对照组中CD146 阳性率和MVD 情况

2.1.1 EMs组在位、异位内膜及对照组之间CD146阳性率和MVD 比较

EMs组异位及在位内膜中CD146 的阳性率及MVD 值均高于对照组（P<0.05）（图1～4），而异位内膜与在位内膜相比无统计学差异（P>0.05）（表1）。

表1 EMs组在位、异位内膜及对照组之间CD146 阳性率和MVD比较Tab 1 Compare the expression of CD146 with MVD among eutopic,ectopic endometrium of EMs group and endometrium of control group

2.1.2 EMs组在位内膜与对照组内膜CD146 阳性率和MVD 比较

EMs组在位内膜无论增殖期还是分泌期，CD146 的阳性率和MVD 值均高于相应的对照组子宫内膜（P<0.05）；EMs组在位内膜分泌期CD146 的阳性率和MVD 值高于增殖期（P<0.05）；对照组分泌期子宫内膜CD146 的阳性率和MVD 值亦高于增殖期，但差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。

表2 EMs组在位内膜与对照组CD146 阳性率和MVD 比较Tab 2 Compare the expression of CD146 with MVD between eutopic endometrium of EMs group and endometrium of control group

2.2 CD146 阳性率、MVD 值与R-AFS 相关性 EMs组在位及异位内膜中CD146 阳性率、MVD 值均与患者临床分期的R-AFS 评分呈正相关性（表3）。

2.3 CD146 表达率与MVD 值相关性 所有标本中，CD146 表达率与MVD 值呈明显正相关，r=0.833（P<0.05）。

表3 EMs组在位、异位内膜中CD146 阳性率、MVD 值与R-AFS评分相关性Tab 3 The correlation of the expression of CD146 and MVD with clinical stage(R-AFS)in eutopic,ectopic endometrium of EMs group

3 讨论

EMs 病因学说众多，但一直以经典的Sampson学说作为主导理论，即EMs 是子宫内膜手术种植于腹腔及切口或在月经来潮时随经血逆流进入腹腔，种植于腹膜及盆腔其他脏器浆膜面，继而形成病灶，异位内膜随月经周期反复脱落、出血引起一系列病理改变及临床症状。然而此学说不能解释为什么70%～90%妇女都会出现经血逆流现象，却仅10%～15%妇女发病，且高龄妇女中发病率未见明显上升。近年，郎景和提出了EMs 的“在位内膜决定论”[2]，即不同个体逆流经血中的内膜碎片能否在“异地”黏附、侵袭、生长，在位内膜是关键，在位内膜的差异是根本差异，是发生EMs 的决定因素。因此研究的焦点转向了EMs 患者在位子宫内膜与非EMs 患者子宫内膜之间存在的差异。

脱落的子宫内膜在非正常位置存活，必须依赖足够的血液供应的建立及维持[3-5]，既往研究已证实EMs 患者体内血管生成活性升高，表现为血液、腹腔液、病灶中的多种促血管生成因子增加及病灶中MVD 值的升高[6]。本研究显示EMs 患者在位和异位内膜中MVD 值相近，均高于非EMs 患者，且随着临床期别的增加而升高，亦证实了EMs 患者的微血管生成活性增强，且在疾病进展中具有重要意义。

血管新生需要内皮细胞连接结构的分离、内皮细胞的增殖迁移、细胞-细胞间和细胞-基质间的连接结构的重建等，其中内皮细胞的黏附、增殖和迁移是血管新生的关键过程,细胞间黏附分子在这一过程中发挥重要作用。CD146 最初从黑色素瘤细胞上发现，是一种具有跨膜结构的黏附分子，是免疫球蛋白超家族的一员。其在人血管内皮细胞，平滑肌细胞，活化的T 细胞及小脑皮层等组织中均有表达。Kang 等[7]学者研究发现，敲除内皮细胞CD146基因后，内皮细胞增殖、黏附和迁徙功能均受到一定程度的限制，提示了CD146 在血管新生过程中的重要性。实验还证实，CD146 通过影响血管形成，参与了多种肿瘤的发生、发展[8-9]。本研究显示EMs 患者在位、异位内膜中CD146 的表达水平与MVD 值的变化一致，均与患者临床分期呈正相关，且在所有内膜标本中，CD146 表达率与MVD 值呈明显正相关，提示CD146 很可能通过促血管生成参与了EMs 的发病、发展。另外，本研究还发现，EMs 患者在位内膜中，分泌期的CD146 表达率和MVD 值均高于增殖期，而正常内膜却未表现出此差异，提示EMs 患者分泌期内膜中CD146 的过表达可能在EMs 的发生中起了更重要的作用。

综上所述，EMs 患者在位及异位内膜中CD146的过表达引起子宫内膜中微血管生成增多，这种病理改变促使子宫内膜异位病灶的发生、发展。

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