银杏果精多糖的降血脂作用

杨强，李新华，张振，林子木

1(沈阳农业大学食品学院，辽宁 沈阳，110866)

2(辽宁医学院食品科学与工程学院，辽宁 锦州，121002)

3 (辽宁省粮食科学研究所，辽宁 沈阳，110032)

银杏(Ginkgo bilobaL)又称白果树、公孙树，属银杏科银杏属裸子植物，主产中国［1］。其叶、果和外种皮等皆具有药用价值，被称为“全身都是宝的活化石”［2］。银杏种实的核俗称白果，由于其营养丰富，自古以来被当作养生延年的上品。银杏果多糖作为银杏果中一种重要的活性成分，近年来人们研究发现它具有免疫调节、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等多种功能，但关于银杏果多糖降血脂的报道很少。目前，已证实有降血脂作用的多糖是黑木耳多糖、南瓜多糖、白首乌多糖等［3－5］。文中采用水沉醇沉法提取银杏果多糖，根据卫生部制定的功能性食品评价程序与评价检验方法，通过动物实验考察银杏果多糖的降血脂功效，初步确定其生物活性，明确其应用价值。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明雄性小鼠60 只，体重18 ～22 g，辽宁长生生物技术有限公司提供，动物许可证号:SCXK2010—0001。

1.2 材料与仪器

银杏果(辽宁大连)，木瓜蛋白酶(国药集团化学试剂有限公司)，大孔树脂脱色1 号(沧州宝恩吸附材料科技有限公司)，胆固醇(北京鼎国生物有限公司)，牛胆盐(上海化学试剂采购供应站)，总胆固醇(TC)试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司)，甘油三酯(TG)试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司)，低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒(长春江力生物技术有限公司)，高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒(长春江力生物技术有限公司)，脂必妥(成都地奥九泓制药厂)。

电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，HITACHI Himac CR21G 台式高速冷冻离心机(日本)，HH-6 数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)，TU-1810 型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 银杏果精多糖的制备

银杏果干燥粉碎后，置于三角锥形瓶中，加蒸馏水溶解，80℃恒温水浴中浸提4 h，过滤后，残渣在相同条件下重复1 次。合并过滤液，离心，取上清液。上清液旋转蒸发浓缩至总体积的1/8 后，加入4 倍体积的无水乙醇，静置12h。离心，收集沉淀后，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，真空干燥制得银杏果粗多糖。粗多糖加蒸馏水复溶后，加入木瓜蛋白酶进行酶解，酶解1h，经Sevag 试剂［V(三氯甲烷)∶V(正丁醇)=5∶1］除蛋白，反复进行3 次，真空干燥得到脱蛋白后的多糖。脱蛋白的多糖采用大孔树脂法进行脱色后，真空干燥制得银杏果精多糖。

1.3.2 日粮组成

基础饲料有提供，符合国家动物饲养标准，其主要营养成分见表1。高脂饲料由实验室自行配制，配方见表2。

表1 基础饲料的营养成分(×10 －2) g/gTable 1 Composition of the basal diet

表2 高脂饲料的配方Table 2 High-fat feed formula

1.3.3 动物分组及处理

雄性昆明小鼠60 只，随机分为6 组:正常对照组、高脂对照组、银杏果多糖低剂量组、银杏果多糖中剂量组、银杏果多糖高剂量组和阳性对照组(脂必妥)，每组10 只。适应环境1 周后，除正常对照组(基础饲料)外，其他各组均采用高脂饲料喂饲。以每天灌胃量为小鼠体重的2%将银杏果精多糖和脂必妥配制成相应浓度的溶液，各剂量组给予银杏果精多糖的量是:低剂量组50 mL/(kg·d)体质量;中剂量组100 mL/(kg·d)体质量;高剂量组200 mL/(kg·d)体质量。正常对照组和高脂饲料对照组给予相应体积的蒸馏水，阳性对照组给予100 mL/(kg·d)体质量脂必妥，实验期为4 周。

1.3.4 血样采集及预处理

喂养结束后，小鼠禁食不禁水12 h，摘取眼球取血，解剖内脏，摘取内脏并称重。将血浆于4℃、3 000 r/min 离心10 min，制备血清。

1.3.5 测试指标及方法

(1)体重:从实验第1 周开始，每周测1 次小鼠体重。

(2)脏器指数的测定:小鼠取血前称体重，眼球取血后解剖分离肝、肾、脾、心，用生理盐水洗净，滤纸吸干，称重。按照表达式(1)计算:

(3)血清中TG、TC、HDL-C 和LDL-C 含量的测定:按试剂盒说明书方法测定。

(4)动脉硬化指数(AI)指数的测定:按照表达表达式(2)计算:

1.4 数据处理

采用单向方差分析实验数据，使用软件为SPSS10.0(美国SPSS 公司)，数据之间的差别使用特奇公正显著差异法进行多重比较，显著水平设为0.05。

2 结果与分析

2.1 银杏果多糖对小鼠体重的影响

由表3 可知，随着实验时间的延长，各组小鼠生长正常，体重均有所增加。实验结束后，各组小鼠体重的增加百分率分别为:正常对照组39.1%，高脂模型组53.5%，阳性对照组44.2%，高剂量组42.3%，中剂量组46.5%，低剂量组51.5%。高脂模型组的小鼠体重较正常对照组有极显著性差异(P＜0.01)，表明实验造模成功。阳性对照组和银杏果多糖高剂量组与高脂模型组比较，可显著降低小鼠体重(P＜0.05)，而银杏果多糖中、低剂量组虽然可以降低小鼠的体重，但差异不显著(P＞0.05)。

表3 不同实验组小鼠的体重变化(¯x±s，n=10)gTable 3 Different treatment group mice weight change g

2.2 银杏果精多糖对小鼠脏器指数的影响

长期的高脂饲料可导致受试小鼠脏器脂质累积及病变等变化，可通过脏器指数反映［6］，由表4 可知，与正常对照组相比，高脂模型组肝指数与正常对照组比较极显著增加(P＜0.01)，高剂量多糖组和阳性对照组与高脂模型组比较，能显著降低小鼠肝脏指数(P＜0.05)，多糖中低剂量组虽也能降低小鼠肝脏指数，但没有显著性差异(P＞0.05);高脂血症还能影响小鼠肾的发育，与正常对照组比较，高脂模型组显著降低小鼠的肾脏指数(P＜0.05)，阳性对照组和多糖高、中、低剂量组能提高小鼠肾脏指数，但没有显著性差异(P＞0.05);多糖组和阳性对照组对小鼠的脾脏和心脏的发育没有太大影响。

表4 不同实验组小鼠的脏器指数变化(¯x±s，n=10)g/100gTable 4 The variety of viscera weight mice in different groups g/100g

由此可见，高脂饲料可导致小鼠肝脏指数升高、肾脏指数降低，而在灌胃银杏果精多糖后可以改善这种变化。

2.3 银杏果多糖对小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C 含量的影响

由表5 可知，高脂模型组的TC、TG、和LDL-C 极显著高于正常对照组(P＜0.01)，而HDL-C 也极显著低于正常对照组(P＜0.01)，表明本实验高血脂模型造模成功，说明高脂饲料能够造成小鼠实验性高脂血症;阳性对照组和银杏果精多糖高剂量组可显著降低高脂血症小鼠的TC、TG、和LDL-C(P＜0.05)，并可显著升高HDL-C(P＜0.05)，且TC、TG 及LDL-C与正常对照组之间无显著差异(P＞0.05)，HDL-C 虽显著高于高脂模型组(P＜0.05)，但却低于正常对照组。高剂量组和阳性对照组各项指标之间均无显著差异(P＞0.05);银杏果精多糖中剂量组中，TG 和LDL-C 明显低于高脂模型组(P＜0.01)，TC 和HDLC 影响不显著(P＞0.05);低剂量组多糖对TC、LDLC 和HDL-C 影响不显著(P＞0.05)，但可极显著降低TG(P＜0.01)。

表5 不同实验组小鼠血清的TG、TC、HDL-C、LDL-C 的变化(¯x±s，n=10) mmol/LTable 5 The variety of TG、TC、LDL-C、and HDL-C in blood serum in different groups (¯x±s，n=10)mmol/L

由此可见，银杏果精多糖具有降低血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇，提高高密度脂蛋白胆固醇的能力，因此具有降血脂功能，对高脂血症的发生有一定的预防作用。

2.4 银杏果精多糖对小鼠动脉粥样硬化指数(AI)的影响

动脉粥样硬化指数(atherogenic index，AI)，被认为是能很好地反映动脉粥样硬化和冠心病危险性的指标。AI 值升高，意味着患动脉硬化的危险增加。由表6 可知，与正常对照组比较，高脂模型组极显著的增高(P＜0.01)，表明小鼠已经患有严重的高脂血症。与模型组相比，阳性对照组和多糖的各剂量组能显著的降低AI 值(P＜0.05)，其中阳性对照组和多糖高剂量组接近正常对照组水平(P＞0.05)，而多糖中、低剂量组虽能降低AI 值(P＜0.05)，但与正常对照组还存在显著差异(P＜0.05)。

表6 不同实验组小鼠血清AI 的变化(¯x±s，n=10)Table 6 The variety of AI in blood serum in different groups(¯x±s，n=10)

由此可见，银杏果精多糖能显著降低因长期食用高脂食物而导致动脉粥样硬化指数升高的危害，对其高血脂症有一定的治疗作用。

3 讨论

外源性胆固醇大量摄入，能抑制肝脏脂肪酸β-氧化活性和TG 向血液中分泌，使脂质在肝脏中积累，形成脂肪肝［7］。需要说明的是，目前在研究活性物质降血脂的实验模式上通常有2 种方式，一是治疗模式，即先形成高脂模型动物，在给予测试目标物，观察实验动物血清中血脂的变化;另一种预防模式，即在给予动物高脂饲料的同时给予目标测试物，观察实验动物血清中血脂的变化。本实验采用的是预防模式，而银杏果多糖降血脂功能的的治疗模式有待进一步研究。

动脉粥样硬化是多危险因素所致的慢性疾病，其中血脂水平升高和高胆固醇血症己经被确认为动脉粥样硬化发生和发展的重要因素，降低血脂尤其是胆固醇水平可减少动脉粥样硬化危险性［8］。本实验结果表明，灌胃各剂量组银杏果多糖均可使高脂饮食小鼠的AI 有不同程度的降低，其中银杏果多糖高剂量组AI 指数和阳性对照组(脂必妥)AI 指数接近，这在某种程度上预示着银杏果多糖可以替代降血脂药物脂必妥，为降血脂新药的研发提供了新材料。

4 结论

(1)银杏果精多糖能显著降低经高脂饲料喂养后小鼠的体重，且多糖高剂量组与正常对照组无差异;银杏果精多糖对小鼠心、脾指数影响不大，对肝、肾指数影响较大，高脂饲料可导致肝指数升高，肾指数下降，而银杏果精多糖可以改善这种变化。

(2)采用高脂饲料配方喂食小鼠来诱导其高脂血症，实验结果表明，银杏果精多糖能显著降低小鼠的TC、TG 和LDL-C，升高HDL-C，且高剂量组和阳性对照组各项指标之间均无明显差异，说明高剂量的银杏果精多糖具有降血脂功能，对高脂血症的发生有一定的预防作用。

(3)银杏果精多糖能够显著降低动脉粥样硬化指数(AI)，说明其对冠心病和动脉粥样硬化有一定的预防作用。

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