鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性研究

王 聚,邹 彦,汤 明

(1.遵义医学院附属医院 核医学科，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院附属肿瘤医院 头颈肿瘤科，贵州 遵义 563099)

鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性研究

王 聚1,邹 彦2,汤 明2

(1.遵义医学院附属医院 核医学科，贵州 遵义 563099；2. 遵义医学院附属肿瘤医院 头颈肿瘤科，贵州 遵义 563099)

目的探讨鼻咽癌组织中EBERs与BMI-1表达相关性。方法对2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的石蜡包埋切片进行研究：原位杂交方法检测这些切片中EBERs的表达；免疫组化方法检测这些切片中BMI-1的表达。结果40例鼻咽癌组织中EBERs情况：高表达组为11例，低表达组为29例，合计阳性表达率为100%(40/40)。40例鼻咽癌组织中BMI-1情况：BMI-1阳性表达率为32.5%(13/40)。鼻咽癌组织中EBERs表达与BMI-1表达差异无统计学意义，P>0.05。结论鼻咽癌中EBERs表达与BMI-1表达无相关性，有待进一步研究，并探讨二者在鼻咽癌中的机理。

鼻咽癌；EBERS；BMI-1

我国是鼻咽癌高发区,发病的确切原因尚不清楚,一般认为与EBV (epstein-barr virus ,EB病毒) 感染密切相关；在感染人体后长期潜伏,可表达多种基因,其潜伏膜蛋白(LMP)编码基因、EB病毒核抗原(EBNA)基因及EBV编码的小RNA(EBER)；其可能不同程度存在于鼻咽癌组织中并可能通过不同的机制导致鼻咽癌。在鼻咽癌中，层粘连蛋白、白细胞介素和潜伏膜蛋白-1一起上调

BMI-1的表达[1]。关于鼻咽癌中EBERs和BMI-1表达相关性的研究尚未见报道，因此我们对2007年12月至2009年11月收治的40例鼻咽癌患者的组织切片进行研究,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 收集我院2007年12月至2009年11月40例经病理确诊鼻咽癌的病理组织蜡块，其中男性29例，女性11例，年龄30～77岁，中位年龄45岁，病理类型均为非角化型癌分化型。

1.2 试验方法 将上述病理组织蜡块，连续4 μm 切片备用,平铺于涂有多聚赖氨酸(1 mg/m1)的玻片上,行HE染色、EBERS原位杂交、BMI-1的EnVision二步免疫组化染色。EBERS检测试剂盒购自Dako公司，为DakoCytomation EBV(EVER) probe，具体实验步骤按说明书进行操作,用试剂盒所带阴性控制试剂做阴性对照，用已知EBERs阳性的鼻咽癌组织切片做阳性对照。BMI-1检测中鼠抗人BMI-1单克隆抗体购自R&D公司，EnVisionTM免疫组化试剂盒购自Gene Tech公司，具体染色方法按试剂盒说明书进行操作，阴性对照以TBS取代一抗,用已知BMI-1阳性的乳腺癌组织切片做阳性对照。

1.3 结果评价

1.3.1 EBERS结果评价 应用普通光学显微镜，高倍镜下(10×20)随机取4个不同的视野，计数细胞总数及核阳性细胞数，按阳性细胞所占的百分比积分。

EBERs阳性表达于细胞核，呈紫黑色，表达信号强度分五级：(-)阴性；(+)<24%癌细胞阳性；(++)25%～49%癌细胞阳性；(+++)50%～74%癌细胞阳性；(++++)>75%癌细胞阳性。根据鼻咽癌组织中EBERs的表达情况分为阴性组、低表达组(+、++)和高表达组(+++、++++)。

1.3.2 BMI-1结果评价 应用普通光学显微镜，高倍镜下(10×20)随机取4个不同的视野，计数细胞总数及核阳性细胞数，按阳性细胞所占的百分比积分。同时，根据染色的强弱程度也计分。

BMI-1阳性表达于细胞核和细胞质，呈黄色、棕黄色。阳性细胞率≤10%为1分，阳性细胞率>10%且≤50%为2分，阳性细胞率>50%且≤75%为3分，阳性细胞率>75%为4分；同时，根据染色的强弱程度也计分：阴性1分，弱染色2分，中等强度染色3分，强染色4分。通过二者的乘积来判断结果：≤4分为(-)；>4分且≤8分为(+)；>8分且≤12分为(++)；>12分且≤16分为(+++)。

1.4 统计学处理 本研究采用SPSS 13.0统计软件数据包进行数据处理，相关性分析选择Spearman相关检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 40例鼻咽癌组织中EBERs情况 (+)组14例、(++)组15例、(+++)组7例、(++++)组4例；合计低表达组为29例，高表达组为11例，阳性表达率为100%(40/40)。

2.2 40例鼻咽癌组织中BMI-1情况 BMI-1表达阴性组27例，(+)组2例，(++)组8例，(+++)组3例，阳性表达率为32.5%(13/40)。

2.3 鼻咽癌组织中EBERs 表达与BMI-1表达差异无统计学意义，P>0.05(见表1)。

表1鼻咽癌组织中EBERs表达与BMI-1表达统计表

组别BMI-1(-)BMI-1(+)BMI-1(++)BMI-1(+++)合计EBERs低表达组2215129EBERs高表达组513211合计2728340

注：P>0.05。

2.4 HE染色光镜观察结果(见图1)。

2.5 鼻咽癌组织中EBERs阳性表达光镜观察结果(见图2)。

2.6 鼻咽癌组织中BMI-1的阳性表达光镜观察结果(见图3)。

3 讨论

EBV是一种嗜B淋巴细胞的人类疱疹病毒,为双链DNA病毒，是比较明确的DNA肿瘤病毒,在全球广泛分布，感染人群后通常在人体内终身潜伏。Ⅰ～Ⅲ型EBV潜伏感染均可合成EB 病毒转录的核内小RNA ( EBV encoded small RNAs ,EBERs)。文献报道[2]用原位杂交方法在鼻咽粘膜慢性炎中未检测到EBERs，在鼻咽癌组织中EBERs阳性表达率100%(53/53)。本文对40例鼻咽癌组织中EBERs表达进行研究，阳性表达率结果也为100%(40/40)，再次证明鼻咽癌组织中EBERs表达非常高，且用原位杂交的方法检测鼻咽癌中EBERs表达方法简单、技术成熟，可以作为检测组织细胞EBV感染的一种方法。本文报道的40例鼻咽癌组织中EBERs表达阳性表达程度不一致，分析其原因可能与以下因素有关：1、选取的鼻咽癌组织中本身EBERs拷贝数不同；2、由于选用的研究标本是既往确诊鼻咽癌的病理组织蜡块，在组织固定或保存过程中可能存在EBERs的分解。但是通过本文研究，用原位杂交的方法检测鼻咽癌中EBERs表达至少在分化型非角化型鼻咽癌中是一种高敏感性的方法。

宋立兵等[3]报道在鼻咽癌组织中BMI-1蛋白高表达率为38.7%(29/75)。我们研究的BMI-1蛋白阳性表达率为32.5%(13/40)，高表达率为11.1%(3/40)。二者高表达率的不同，分析可能与研究的标本不同有关。近年研究表明[4]BMI-1蛋白在肿瘤组织中表达差异，主要与肿瘤的临床分期、淋巴结转移等有关。

在鼻咽癌发生过程中EB病毒可能在诱导基因突变中起作用,导致癌基因的激活,或破坏抑癌基因,并导致免疫系统对肿瘤细胞的识别能力降低,最终形成肿瘤。在鼻咽癌中，层粘连蛋白、白细胞介素和潜伏膜蛋白-1一起上调BMI-1的表达[1]。但是本文研究得出鼻咽癌中EBERs表达与BMI-1表达差异无统计学意义(P>0.05)，二者间不存在相关性。EBERs由于缺乏3′端多聚腺苷，不编码蛋白质[5]，不能直接发挥生物功能，导致肿瘤的形成。通过本文研究在鼻咽癌组织中EBERs表达与BMI-1表达无关，因而EBERs表达后不会上调BMI-1的表达。鼻咽癌组织中EBERs表达与肿瘤形成有何关系有待研究。但是本文研究得出在鼻咽癌组织中BMI-1有一定的表达；其它研究也表明与正常鼻咽上皮细胞相比较，BMI-1在鼻咽癌细胞株中表达上调[3]。说明在鼻咽癌肿瘤形成过程中BMI-1会表达并起到一定作用，同时本文研究在鼻咽癌组织中BMI-1表达与EBERs表达无关，因而何种机制促进BMI-1的表达有待进一步研究。但是BMI-1一旦被激活可高表达于肿瘤细胞中, 其发挥作用的途径是控制下游的癌蛋白以及细胞周期调控蛋白, 如c-myc、pRB等的激活，在细胞周期起负调节作用，能保持靶基因特异的稳定抑制状态，可能从细胞凋亡障碍、细胞增殖失控方面引起恶性肿瘤细胞的增生。

本研究得出用原位杂交的方法检测鼻咽癌组织中EBERs表达在分化性非角化型鼻咽癌中是一种高敏感性的方法。并且得出分化型非角化型鼻咽癌中EBERs表达与BMI-1表达关系无相关性。鼻咽癌组织中EBERs表达与肿瘤形成有何关系，何种机制促进BMI-1的表达，有待今后进一步进行研究；并探寻二者在鼻咽癌中的机理。

[1] Michelle M S Chew,Sook-Yee Gan,Alan SB Khoo,etal,Interleukins, laminin and epstein-barr virus latent membrane protein 1 (EBV LMP1) Promote metastatic phenotype in nasopharyngeal carcinoma[J].BMC Cancer,2010,10: 574.

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[5]闵华庆. 鼻咽癌研究[M]. 广州: 广东科技出版社,1998：57- 75.

ResearchfortheexpressivecorrelationofEBERsandBMI-1innasopharyngealcarcinoma

Wangju1,Zouyan2,Tangming2

(1.Department of Nuclear,The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China;2.Department of Head And Neck Oncology,The Oncology Hospital of The Affiliated Hospital,Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563099,China)

ObjectiveTo observe the expressive correlation of EBERs (EBV encoded small RNAs) and BMI-1 (B lymphoma Mo-MLV insertion region 1 homolog)in nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsWe studied the paraffin-embedded sections of 40 NPC from December 2007 to November 2009. The expression of EBERs were detected by in situ hybridization.The expression of BMI-1were detected by Immunohistochemistry .ResultsOf the 40 cases of NPC, the low expression group was 29 cases,the high expression group was 11 cases,the positive rate of EBERSwas 100% (40/40).Of the 40 cases of NPC, the positive rate of EBERSwas 32.5%(13/40). The expression difference of EBERs and BMI-1was not statistically significant in NPC,P>0.05.ConclusionThe expression of EBERs and BMI-1 in NPC is not correlated . Further researches are needed to elucidate their expression in NPC.

nasopharyngeal carcinoma; EBERs; BMI-1

遵义市科技局分社基金项目(NO:200902)。

邹彦，女，主任医师，研究方向：头颈部肿瘤，E-mail:zouyan.714@163.com。

R739.63

A

1000-2715(2013)05-0453-03

[收稿2013-08-02;修回2013-09-29]

(编辑：谭秀荣)