荜茇多糖提取与含量测定

乌云塔娜 齐明玉 刘 敏

1.内蒙古自治区兴安盟科右中旗巴仁哲里木苏木卫生院，内蒙古 兴安盟 029425;2.内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010065;3.内蒙古神州硅业有限责任公司，内蒙古 呼和浩特 010070

1 实验材料

1.1 实验药物

荜茇 (piper Longum L)胡椒科植物荜茇的干燥近成熟果穗)，均购自呼和浩特天力药业，产地:海南省，批号:AA200072，

1.2 实验试剂

乙醇:批号 20070115，常熟市晋阳远化学有限公司。

乙醇丙酮:批号 0810201，汕头市西陇化工厂。

乙醇苯酚:批号 0702072，汕头市西陇化工厂。

硫酸:批号 200705063，莱阳市康德化学有限公司。

乙醚:天津化学试剂厂生产，批号:2D040512。

1.3 实验仪器

LD5－2A低温离心机，北京医用离心机厂制造。T－500型电子天平，美国双杰兄弟有限公司。AL－204型电子天平，上海梅特—托利多仪器有限公司。

KQ－250B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

210 型分光光度计，日本岛津。

2 实验方法

2.1 荜茇多糖提取

①先荜茇粉碎后过80目筛。

②800g荜茇粉加8 000 mL蒸馏水，益煮3次，各煮0.5、1、1.5h，次滤布过滤。

③合并3次过滤液，浓缩原体积的1/10，得1 350 mL溶液。

④取300mL溶液加90%乙醇1 200 mL，搅拌后静置24h。

⑤24h后过滤，弃去滤液，残渣继续以500mL蒸馏水溶解，再浓缩成25mL溶液。

⑥加入80%乙醇静止12h后抽滤，无水乙醇沉淀、丙酮反复洗涤多次，60℃温度干燥，得到白色无定形粉末3.04g。

2.2 荜茇多糖含量测定

①葡萄糖标准溶液的配置:精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖50.2mg，用蒸馏水溶解并定容到500mL，即为100.4ug/mL的葡萄糖标准溶液。

②5%苯酚溶液的配置:精称苯酚18.7g，加50mL蒸馏水溶解后的容量66mL，再加308 mL蒸馏水，置棕色瓶内放冰箱备用。

③标准曲线的绘制:精密量取葡萄糖标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、mL，分别加蒸馏水使成 2.0 mL，再分别加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀后再加浓H2SO45mL，充分摇匀，于室温下放置5min，置水浴中加热15min，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作作为空白对照，在490nm处测定吸光度值，绘制标准曲线，建立回归方程:A=0.0127C+0.0053(A为吸光度，C为浓度)，R2=0.9994。

④样品溶液的配制:精密称取荜茇多糖22.2mg，加蒸馏水溶解后容量瓶中定容100ml，摇匀，浓度为222ug/ml。

⑤重现性实验:对同一批样品重复取样5次，按样品测定方法操作。

表1 重现性实验

⑥精密度试验:用样品溶液在相同的条件下连续测定5次。这5次测定值的RSD为1.48%。

⑦回收率实验:精密吸取样品液0.2ml(5份)，分别精密加入0.4ml的葡萄糖标准溶液，再加蒸馏水使成2.0 mL，按测定标准曲线同样方法测定吸光度值，按下公式计算回收率平均值。结果见表2。

回收率%=(测得重量－样品重量)/标准重量

表2 回收率实验

⑧荜茇多糖含量测定:精密吸取样品溶液0.2 mL，加蒸馏水使成1.0 mL，再加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀后再加浓H2SO45mL，充分摇匀，于室温下放置5min，置水浴中加热15min，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作作为空白对照，在490nm处测定吸光度值。结果见表3。

表3 荜拨多糖的含量

3 讨论

3.1 实验结果表明:荜茇多糖含量为75.92%，回收率为99.43%。糖类含量测定法硫酸－苯酚法的原理是寡糖或多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，在这种强酸性条件下与苯酚反应，生成橙色衍生物，该衍生物在490nm处和一定浓度范围内吸收值和糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定单糖的含量，再根据单糖计算出多糖的含量。

3.2 多糖类化合物是多种植物药中的有效成份之一，具有多种生物活性，目前多糖的研究不断深入，而且不断有新的多糖被发现，但荜茇多糖还未见报道。本实验首次荜茇中提取出多糖，并对其含量进行了测定。

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