血清高尔基体蛋白73诊断原发性肝癌价值探讨*

孔 颖 蔺淑梅 王维娟 古艳丽 张 曦 叶 峰 杨雪亮

研究显示，直径<5cm的肝癌经过手术治疗可使5年生存率达到75%[1]。仍有30%～40%肝癌患者表现为AFP阴性[2]。近年来，研究者们发现了一种新型蛋白，即高尔基体蛋白 73（Golgi protein 73，GP73）与肝癌关系密切[3，4]。我们通过对肝癌、肝硬化、肝衰竭患者及健康人血清GP73水平测定，以初步评价GP73对诊断肝癌的价值。

资料与方法

一、研究对象 2010年5月至2010年11月在我院感染性疾病科和肝胆外科住院的HBV感染患者200例，男151例，女49例，平均年龄48.7±10.9岁。原发性肝癌诊断符合中国抗癌协会专业委员会2001年在广州通过的《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》[5]，慢性肝衰竭及肝硬化患者的诊断标准参照2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会和肝病学分会修订的《病毒性肝炎防治方案》[6]，其中原发性肝癌107例，病毒性肝炎肝硬化53例和慢性乙型肝炎肝衰竭40例。另选健康人34例。

二、血清GP73测定 采用 ELISA法检测，试剂盒由中科院广州生物医药与健康研究院病毒免疫研究室提供。

三、AFP及生化指标测定 采用Cobas601电化学发光免疫分析仪检测血清AFP，采用全自动生化分析仪检测生化指标。

四、统计学方法 应用SPSS 13.0软件进行统计学分析并绘制ROC曲线，采用ROC曲线寻找血清GP73诊断肝癌的最佳截断点（cut-off value）。多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，两个独立组间比较使用Mann-Whitney U检验，设定P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、各组血清GP73和AFP水平比较 所有患者血清均可测出GP73，原发性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清GP73水平分别为123.5±22.4ng/ml、108.9±30.3ng/ml和 130.3±45.6ng/ml，均显著高于健康对照人群（44.1±38.9ng/ml，P<0.05）；原发性肝癌、肝硬化和慢性肝衰竭患者血清AFP水平分别为236.6±205.3ng/ml、5.3±5.56ng/ml和 53.9±40.40ng/ml。

二、GP73与AFP诊断原发性肝癌的效能比较通过绘制血清GP73与血清AFP的ROC曲线，比较两者诊断原发性肝癌的灵敏度和特异度（图1）。依据约登指数（Youden’S index）法确定本次实验血清GP73的最佳截断点为77.4ng/ml，其诊断原发性肝癌的灵敏度为89.6%，特异度为100%，约登指数为0.896，曲线下面积为0.986；取AFP的最佳截断点为35.4ng/ml，其诊断原发性肝癌的灵敏度为64.2%，特异度为100%，约登指数为0.642，曲线下面积为0.851（图2）。GP73与AFP曲线下面积（AUC）差异有统计学意义（0.986对 0.851，P＜0.05）。

图1 GP73与AFP诊断原发性肝癌的ROC曲线

图2 GP73与AFP联合诊断肝癌的ROC曲线

根据ROC曲线，设定血清GP73水平大于等于77.4ng/ml和血清AFP大于等于35.4ng/ml为诊断原发性肝癌的截断点，其诊断肝癌的灵敏度为92.5%，特异度为100%，曲线下面积为0.99，并不比GP73或AFP单独诊断肝癌时效能提高（图3），可能与AFP的设定值太低有关。

图3 GP73与AFP诊断肝癌的ROC曲线

三、GP73诊断小肝癌的价值 本组有11例患者经过临床和病理学诊断为小肝癌（肿瘤直径≤3cm），以肝硬化为对照人群，取GP73等于123.4ng/ml为截断点，其诊断小肝癌的灵敏度和特异度分别为54.5%和75%，曲线下面积为0.652。

四、不同条件下原发性肝癌患者血清GP73水平的分层比较 本组48例肝癌患者经过病理学检查确诊，他们在不同临床和病理学条件下血清GP73分层比较见表1。资料显示原发性肝癌患者血清GP73水平在不同年龄、性别、Edmondson分级和结节数目多寡之间无显著性相差，而在不同肿瘤大小、TNM分期和是否合并肝硬化方面均有显著性差异（P＜0.05）。

表1 不同临床病理条件下原发性肝癌患者血清GP73和 AFP水平（±s）比较

表1 不同临床病理条件下原发性肝癌患者血清GP73和 AFP水平（±s）比较

①P<0.05

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讨论

原发性肝癌是一种恶性程度高，病程进展快，死亡率很高的恶性肿瘤。早期发现并有效治疗可以大大提高患者的生活质量和生存期。血清AFP检测对肝癌早期诊断的敏感性不是很高，因此，寻找理想的肝癌血清标志物成为研究的热点。

由于蛋白组学和基因组学的快速发展，学者们在研究中发现了一些可能成为新的肝癌诊断血清标志物。GP73是一种高尔基体Ⅱ型跨膜蛋白，2000年由Kladny在成人巨细胞病毒性肝炎肝组织及血清中检测到此种蛋白[3]，在正常肝脏中仅表达于胆管上皮细胞[5]，当肝脏发生炎症、纤维化和肝细胞癌变时，肝实质细胞才表达并分泌GP73，说明GP73的表达与肝脏疾病相关[6，7]。近年来，多项临床研究显示[8～10]，GP73的表达与肝癌关系密切，在肝癌患者肿瘤组织中可检测到GP73有极高的表达且表达水平与肿瘤细胞的恶性程度有很高的相关性[11]。

本研究应用ROC曲线客观地评价了GP73诊断肝癌的准确性，将它用于肝癌的诊断时，其灵敏度优于AFP，尤其在AFP阴性的肝癌患者中有较高的检出率。因此，GP73可作为AFP阴性的肝癌患者的补充诊断指标而应用于临床。

在本组107例肝癌患者中符合小肝癌诊断者11例，其血清AFP检测均为阴性，经手术切除病理学检查确诊。我们在11例小肝癌中均检测有GP73表达，诊断灵敏度可达54.5%，特异度为75%。本实验首次发现GP73在小肝癌的诊断方面较AFP灵敏。因此，在高危人群进行GP73检测，可以提高小肝癌的诊断率，为临床早期诊断提供更好的参考价值。

我们研究发现，AFP诊断肝癌的灵敏度仅为49.1%，约有一半的肝癌患者表现为阴性，而在AFP阴性的肝癌患者中仍有84.6%患者GP73阳性，GP73有很高的灵敏度，因此可以弥补AFP灵敏度不高的缺陷，GP73联合AFP诊断肝癌时可明显提高诊断率，两个指标联合诊断的效率明显优于单项指标。肿瘤标志物的联合检测在肝癌的定性诊断中可提高诊断的敏感性及特异性。该研究的确切结论尚需要进一步大规模的临床数据支持。

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