高效液相色谱－蒸发光散射器法测定川贝末胶囊中贝母素乙含量

汪剑飞

(安徽省芜湖市食品药品检验所，安徽 芜湖 241001)

川贝末胶囊由川贝在80℃以下干燥、粉碎成细粉、过筛、装入胶囊制成，具有清热润肺、化痰止咳的功效，主要用于治疗肺热燥咳、干咳少痰、阴虚劳嗽、咳痰带血[1]。由于其药品标准收载时间较早，质量控制方法中只有显微鉴别和胶囊剂常规检查，不利于该药的质量控制。为了提高药品内在质量，保证临床用药安全有效，笔者建立了高效液相色谱－蒸发光散射器(HPLC－ELSD)法测定川贝末胶囊中贝母素乙的含量，经方法学考察，该法简便快速、结果准确可靠，可用于川贝末胶囊的质量控制。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters2695型高效液相色谱仪，2424型蒸发光散射检测器(沃特世公司);AB304－S型电子天平(梅特勒－托利多仪器＜上海＞有限公司);超声波清洗仪(上海杰理科技有限公司)。贝母素乙对照品(批号为110751－200709，供含量测定用，含量为99.8%，中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯)，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯;川贝末胶囊(芜湖市博英制药有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Intersil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.1%二乙胺(70 ∶30);流速:1.0 mL/min，柱温:35 ℃;蒸发光散射检测器，漂移管温度为80℃，载气为压缩空气，压力40 psi。

2.2 溶液制备

精密称取贝母素乙对照品10.20 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取川贝末胶囊10粒，取内容物，精密称定，研匀，称取2 g，置100 mL锥形瓶中，加1.5%的盐酸溶液50 mL，超声提取20 min，放冷，用氨试液调节pH至10，用三氯甲烷振摇提取3次，每次30 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇分次溶解并转移至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，弃去初滤液2 mL，取续滤液，作为供试品溶液。取1.5%的盐酸溶液50 mL，按供试品溶液制备方法操作，作为空白对照溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:按照2.1项下色谱条件，吸取2.2项下3种溶液10 μL，分别注入高效液相色谱仪。结果见图1。可见，提取溶剂不干扰供试品溶液中贝母素乙的测定。

线性关系考察:精密量取对照品溶液 2.50，5.00，10.00，15.00，20.00，25.00 μL 进样，按照 2.1 项下色谱条件测定峰面积，以对照品进样质量(μg)的常用对数值为横坐标、峰面积的常用对数值为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=0.960 9X+6.525 8，r=0.999 5(n=6)。结果表明，贝母素乙进样质量的线性范围是 0.6 ～6.0 μg。

精密度试验:精密量取同一对照品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件连续进样5次。结果贝母素乙峰面积的RSD=0.22%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别于 0，2，4，8，12，24 h 时进样测定峰面积。结果的RSD=0.38%(n=6)，表明贝母素乙在甲醇溶液中24 h内稳定。

重复性试验:取同一批(批号为120302)样品2.0 g，共5份，依法制成供试品溶液，进样测定含量。结果含量为每粒0.34 mg，RSD=1.63%(n=5)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:精密称取已知贝母素乙含量的样品2.0 g共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液2mL(0.24mg/mL)，按供试品溶液制备方法处理，定容至10 mL容量瓶中，按2.1项下色谱条件测定含量并计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 贝母素乙加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

称取不同批号的样品细粉各2.0 g(每批平行取3份)，精密称定，分别置入具塞锥形瓶中，依法制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定并计算含量。结果批号为120301，120302，120303的样品中贝母素乙的含量分别为每粒0.38，0.34，0.35mg(n=3)。

3 讨论

色谱条件的选择时，参考2010年版《中国药典(一部)》浙贝母[2]含量测定项下的流动相乙腈－0.1%二乙胺进行试验，结果供试品溶液中贝母素乙与杂质很好地分离，故选此为流动相。

贝母素乙为生物碱，用稀盐酸提取，再加碱使生物碱游离后用三氯甲烷萃取，蒸干，用甲醇溶解制得供试品溶液[3－4]。此方法制得的供试品溶液杂质峰明显小于2010年版《中国药典(一部)》中浙贝母含量测定的样品处理方法。提取溶剂考察了0.5%，1.0%和1.5%3个不同体积分数的盐酸，提取方式比较了超声提取(10，20，30 min)和回流提取(1，2，3 h)两种方式，结果以1.5%的盐酸超声20 min效果最佳。

曾尝试在文中的色谱条件下同时测定川贝末胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量，结果3批样品中未能检测到贝母素甲，可能与仪器检测器的灵敏度或供试品溶液中贝母素甲的含量较低有关，需进行进一步的研究。3批样品中贝母素乙的含量基本一致，可为川贝末胶囊质量标准的提高提供参考。

[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第五册)[M].北京:中国医药科技出版社，1991:15.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:274.

[3]李樱子，韩忠旭.用不同浓度盐酸提取贝母素甲、乙方法的研究[J].长春中医学院学报，2003，19(1):47.

[4]范 蕾，王伟影.可同时测定蛇胆川贝液中贝母素甲与贝母素乙的方法[J].中国药业，2012，21(2):41 － 42.