高效液相色谱法测定痔疮栓中黄芩苷的含量

2013-09-12顾腾飞张松亮张玲昂于天杰

实用医药杂志 2013年8期

顾腾飞，张松亮，张玲昂，于天杰

痔疮栓收载于《中国人民解放军医疗机构制剂规范》2002版，主要由黄柏、儿茶、龙骨、仙鹤草、黄芩、没药、板蓝根、血竭、冰片等九味中药组成。临床用于痔疮复发或痔疮术后的消炎、镇痛、止血，具有确切临床疗效。为更好地控制产品质量，本文采用高效液相色谱法测定了制剂中黄芩苷含量。

A对照品

1 材料与方法

1.1 试药黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200815，含量测定用）；痔疮栓（为152医院的医院制剂，批号：20121105）；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、冰醋酸为分析纯，水为重蒸馏水。

1.2 仪器岛津LC-20AT高效液相色谱系统，包括SPDM20A紫外检测器、LC-Solution色谱工作站（岛津）；AS3120A超声清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；岛津AUW120D电子天平。

1.3 色谱条件色谱柱：WondaSil-C18色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇∶水∶磷酸（44∶56∶0.2）；流速为1.0 ml/min；柱温为 30℃；检测波长 278 nm；进样量 10 μl。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

1.4 溶液的制备

1.4.1 标准品溶液的制备精密称取60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品9.0 mg，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取上述溶液10 ml，置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液（72 μg/ml）。

1.4.2 供试品溶液的制备取重量差异下的本品1粒，剪碎，混匀，精密称取1.5 g，加 70%乙醇溶液约 20 ml，加热回流3 h，放置室温后，过滤，滤液置于50 ml容量瓶中，用少量70%乙醇溶液分次洗涤容器和滤器，洗液并入容量瓶中，加70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀。经0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

1.4.3 空白试验制备不含黄芩的痔疮栓，将黄芩苷对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液分别依法采用高效液相色谱法测定。结果阴性对照品溶液的色谱图中在黄芩苷保留时间处无吸收峰，阴性无干扰。色谱图见图1。

B供试品

C阴性样品图 1 黄芩苷的高效液相色谱图

2 结果

2.1 线性关系考察精密吸取黄芩苷对照品贮备液（72 μg/ml）进行稀释，得 1.125、2.25、4.5、9.0、18.0、36.0 μg/ml的对照品溶液；分别进校10 μl测定峰面积，峰面积（Y）为纵坐标，黄芩苷浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程为：Y=144904X+14511，r=0.9998。结果表明，黄芩苷在1.1～72 μg/ml的范围内线性准关系良好。

2.2 精密度和稳定性精密吸取对照品溶液，按色谱条件连续重复进样，测定得黄芩苷RSD为1.48%（n=5），表明本方法精密度良好。取供试品溶液室温保存，分别在2、4、6、8、12、24 h内测定，记录峰面积，黄芩苷峰面积的RSD分别为1.13%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3 重复性实验取同批样品5份，按“1.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“1.3”项下色谱条件分别进样，测得黄芩苷平均含量为9.29 mg/粒，RSD为0.87%（n=5）；表明本方法重复性较好。

2.4 加样回收率实验取已知含量的样品5份，加入浓度为0.18 mg/L的对照品溶液 10 ml，混匀，分别按“1.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“1.3”项下色谱条件分别进样，测得峰面积并计算含量、回收率，结果见表1。