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自拟心脑宁片对亚急性衰老模型小鼠血浆及肝脑匀浆MDA水平的影响

2013-09-12王希东吕宏迪马珍珍郝少君孙建华

实用医药杂志 2013年8期
关键词:心脑匀浆半乳糖

王希东,吕宏迪,马珍珍,郝少君,孙建华

心脑宁片,由人参、当归、川芎等组成,具有活血化瘀,益气安神,用于冠心病、脑血栓形成等,亦可用于记忆力减退,具有抗衰老等作用。针对其抗衰老作用笔者进行了心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝、脑匀浆MDA水平影响的实验研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料及仪器

1.1.1 药品 心脑宁片,由人参、当归、川芎等组成,具有活血化瘀,益气安神,用于冠心病,脑血栓形成等,亦可用于记忆力减退,抗衰老等作用,由解放军第371医院制剂室提供,批号20110606;尼莫地平片,山东新华制药股份有限公司生产,批号

1105036;脑安片,哈药集团三精制药四厂有限公司生产,批号201109002;D-半乳糖,北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司,批号18Q10260;氯化钠注射液,郑州永和制药有限公司,批号11103065;PVP络合碘消毒剂,洛阳市洁康消毒剂厂,批号110903;甲醛,烟台市双双化工有限公司,批号20111101;冰醋酸,天津市恒兴化学试剂制造有限公司,批号20110113;总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒,南京建成生物工程研究所,批号20120316;过氧化氢酶(Catalase CAT)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20120315;谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHPX)测试盒,南京建成生物工程研究所,批号20120316;丙二醛(MDA)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20120316;考马斯亮兰蛋白测定试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20120317;羧甲基纤维素钠,天津恒兴化学试剂制造有限公司,批号20090723。

1.1.2 实验动物 小鼠72只,体重 18~21 g,清洁级,昆明种,河北省动物实验中心提供,合格证号1202041。

1.1.3 实验仪器 U电子称,余姚记铭称重校验设备有限公司生产,型号JM 1000;离心机,上海安亭科学仪器厂,型号TDL-40B;电子天平,河南中良科学仪器有限公司,型号JA1103N;电子天平,上海精天电子仪器厂,型号JT6001;高速冷冻离心机,科大创新股份有限公司中佳分公司,型号KDC-160HR;电子恒温水浴锅,北京永光明医疗仪器厂,型号DZKW-4;紫外可见分光光度计,日本岛津公司,型号 UV-2201; 酶标仪 (Model 680;made by BIORAD Laboratories);电动玻璃匀浆机,宁波新芝生物科技有限公司生产,型号DY89-1;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司生产。

1.2 实验方法 取体重18~21 g小鼠72只,雌雄各半,随机分为6组,每组12只(雌雄各半),其中5组造D-半乳糖亚急性衰老模型,每天颈背部皮下注射D-半乳糖 (生理盐水配成5%,注射量为0.25 ml/10 g),造模 1 次/d,连续 40 d;另 1 组为空白对照组,每天颈背部皮下注射同体积生理盐水。从第11天开始,造模型5组分别灌服大、中、小剂量心脑宁片混悬液 (2.24、1.12、0.56 g/kg,112、56、28 mg/ml,0.2 ml/10 g,相当于临床剂量的 30、15、7.5倍)、脑安片混悬液(0.53 g/kg,26.5 mg/ml,0.2 ml/10 g,相当于临床用量的15倍)及同体积的生理盐水;空白对照组灌服同体积的生理盐水。给药1次/d,连续30 d。称体重1次/3 d,根据体重调整D-半乳糖和相应药物用量。于用药第40天,各组小鼠均禁食不禁水12 h,于给D-半乳糖和灌胃2 h后,小鼠眼眶取血,肝素抗凝,按试剂盒说明书分别测定血超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱苷肽(GSH)的活力;处死小鼠,解剖,取小鼠肝、脑,用冰生理盐水制备肝匀浆、脑匀浆,冰藏备用,按试剂盒说明书分别测定血浆、肝匀浆和脑匀浆中丙二醛(MDA)含量;然后取脑、胸腺、脾脏,甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE 染色,光镜观察脑、胸腺、脾脏组织形态的变化。

计算公式:

蛋白含量(g/L)=测定管OD值-空白管OD值标准管OD值-空白管OD值×标准管浓度(g/L)

表 1 各组小鼠血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平(±s,nmol/mg)

表 1 各组小鼠血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平(±s,nmol/mg)

注:与模型组比,*P<0.05;与模型组比,#P<0.01

组别 动物(只) 剂量(g/kg) 血浆 肝匀浆 脑匀浆空白对照组 12 9.690±4.938# 4.713±3.406# 13.137±2.650#模型组 12 19.726±7.874 9.010±1.702 18.821±4.769脑安片组 12 0.53 g 12.690±6.063* 7.003±2.557* 13.245±3.998#大剂量心脑宁片组 12 2.24 10.452±5.888# 4.344±2.347# 14.869±4.716*中剂量心脑宁片组 12 1.12 15.571±9.949 5.782±3.193# 13.127±5.953*小剂量心脑宁片组 12 0.56 14.869±9.165 5.337±3.244# 15.950±6.171

2 结果

对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的影响,见表1。

从表1可看出,与空白对照组比,模型组血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平水平均显著升高 (P<0.01),说明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。与模型组比,大剂量心脑宁片组可显著降低血浆MDA水平(P<0.01)、脑安片组可明显降低血浆MDA水平(P<0.05);大、中、小剂量心脑宁片组均可显著降低肝匀浆MDA水平(P<0.01)、脑安片组可明显降低肝匀浆MDA水平(P<0.05);大、中剂量心脑宁片组可明显降低脑匀浆MDA水平(P<0.05)、脑安片组可显著降低脑匀浆MDA水平(P<0.01);以大、中剂量心脑宁片组对小鼠D-半乳糖衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的降低作用为优。

3 讨论

本实验采用D-半乳糖致小鼠衰老模型,观察了心脑宁片对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型血浆、肝、脑匀浆MDA水平影响的实验,与空白对照组比,模型组血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平均显著升高(P<0.01),说明造小鼠D-半乳糖衰老模型成功。心脑宁片是根据中医理论和现代药理研究成果拟定的院内协定处方。方中以人参为君药,调中,止消渴,通血脉,破坚疾,令人不忘,以其主补五脏,安精神,定魂魄;黄芪,补中益气,为臣药。当归,活血养血;川芎,其性善降结气,以走肝经,气中之血药,通行十二经,具有理气、活血化瘀的作用为佐药。诸药合用,集活血化瘀、抗血栓、益气之功于一体,既重视疏通脉管,以改善脏器供血,又注意改善人体整体功能及代谢,达到扶正祛邪之目的。实验结果显示:大剂量心脑宁片组可显著降低血浆MDA水平(P<0.01),大、中、小剂量心脑宁片组均可显著降低肝匀浆MDA水平(P<0.01),大、中剂量心脑宁片组可明显降低脑匀浆MDA水平(P<0.05),以大、中剂量心脑宁片组对小鼠D-半乳糖衰老模型血浆、肝匀浆和脑匀浆MDA水平的降低作用为优。

心脑宁片临床疗效确切,且药理实验表明其具有很好的抗衰老的作用,为临床提供了实验依据和临床基础。志谢 本实验在河南中医学院苗明三教授指导下完成,特此致谢

[1]苗明三,方晓艳.芦荟多糖对衰老模型小鼠的影响[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(3):181-184.

[2]苗明三,顾丽亚,方晓燕,等.阿胶益寿颗粒对小鼠衰老模型的影响[J].中国中药杂志,2004,29(8):817-818.

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