中晚期肺腺癌化疗前后患者外周血T淋巴细胞亚群水平变化

王曙光，王庆华，吕坤聚，杨银荣

近年的流行病调查数据显示，肺癌是我国人群中发病率和病死率上升最快的癌症[1]。卫生部最新公布的死因调查结果中，肺癌居我国癌症死因首位，占全部癌症死因的22.7%，与20世纪70年代相比，我国癌症病死率上升4.65倍。培美曲塞（pemetrexed，PEM）是一种新型的多靶点抗叶酸制剂，和顺铂联合应用已经成为标准的非小细胞肺癌一线化疗方案[2]。研究发现多种癌症患者外周血T淋巴细胞存在数量变化，并且与多数肿瘤的进展和预后有关[3]。本研究通过流式细胞技术对2009—2011年收治46例确诊中晚期肺腺癌化疗前后外周血各亚类T淋巴细胞：CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比例。结合临床特征，探讨T淋巴细胞亚群及化疗效果的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 46例均为 2009￣01—2011￣12笔者所在医院住院患者。均经病理诊断证实为肺腺癌。所有患者均符合以下标准：根据NCCN（第7版）分期标准判定为Ⅲb期或Ⅳ期；ECOG评分≤2分；治疗前检查血象、肝肾功能基本正常，无严重心脏病和其他合并症；明确治疗前未接受过全身化疗、放疗、手术或免疫治疗；预计生存期>3个月。46例患者中男24例，女22例；年龄35～70岁，中位年龄52岁。ECOG评分0～1分42例，2分4例。吸烟者10例，不吸烟者36例。Ⅲ期患者36例，Ⅳ期患者10例。对照组：健康志愿者38人，男21人，女17人；年龄18～58岁，平均36.7岁。

1.2 化疗方法 用药前1周开始给予口服叶酸400 μg/d，贯穿整个疗程。用药前1周给予维生素B121000 μg肌肉注射1次；以后肌肉注射1次/9周。用药前1 d，当天，后1 d给予地塞米松4 mg口服，2次/d。PEM 500 mg/m2，静脉滴注，第1天；顺铂75 mg/m2，静脉滴注，第1天；21 d为1个周期。

1.3 淋巴细胞亚群检测

1.3.1 仪器和试剂 BD FACSCalibur流式细胞仪、溶血素、流式上样管和T淋巴细胞亚群三色抗体 （CD3-PerCP/CD4-FITC/CD8-PE）均购自BD公司。所有试剂4～8℃贮藏，有效期内使用，用前室温平衡30 min。

1.3.2 标本采集 对照组每人抽血2 ml/次；治疗组化疗第1疗程前1 d及第2疗程化疗的第4周末各抽血2 ml，EDTANa抗凝，标本立即送检。

1.3.3 流式细胞检测 向3组已编好号的上样管中分别加入20 μl T淋巴细胞亚群三色抗体；再分别向试管中加入混匀的 50 μl抗凝血；混匀，避光，室温孵育 15～20 min；溶血剂1 ml加入试管，避光10 min；上机测样。根据前向光散射和侧向光散射收集的细胞分布图，自动圈定淋巴细胞群，并对其表型进行检测、分析。

2 结果

与对照组比较，化疗前肺腺癌组 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低下（P<0.01）；化疗前肺腺癌组 CD8+明显增高（P<0.01）。与化疗前组比较，化疗后肺腺癌组CD4+、CD4+/CD8+明显增高（P<0.01）；化疗后肺腺癌组CD8+略微降低，但无统计学差异。与对照组比较，化疗后肺腺癌组CD4+、CD4+/CD8+明显低下（P<0.01）；化疗后肺腺癌组CD8+明显增高（P<0.01）。见表1。

表 1 对照组与肺腺癌组患者化疗前后淋巴细胞亚群（±s）

表 1 对照组与肺腺癌组患者化疗前后淋巴细胞亚群（±s）

注：与对照组比较，*P<0.01；与化疗前比较，#P<0.01

项目 对照组 肺腺癌组化疗前 化疗后CD4+ 42.21±2.32 28.25±3.33* 31.36±2.67#CD8+ 24.42±1.20 29.22±2.34* 28.13±1.39*CD4+/CD8+ 1.55±2.18 0.98±1.22* 1.12±1.22#

3 讨论

培美曲塞是一种新的多靶点抗叶酸化疗药物，主要通过干扰细胞复制过程中叶酸代谢途径而发挥抗肿瘤作用。培美曲塞通过对关键酶活性进行多靶点抑制，减少嘌呤和胸腺嘧啶核苷的生物合成，从而影响肿瘤细胞和RNA的合成[4]。培美曲塞联合顺铂对非磷非小细胞肺癌有很好疗效。

机体免疫功能低下，或者肿瘤细胞变异产生的免疫逃逸，是肿瘤产生和发展的必要条件。而肿瘤的发展又会抑制机体的免疫功能，因此机体免疫功能状态对肿瘤的发展和预后具有重要的作用[5]。

最近研究证明，T淋巴细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。CD3+T细胞数量上代表机体的总T细胞数量，CD4+T细胞为辅助T细胞，辅助机体完成肿瘤免疫。CD8+T细胞为杀伤性T细胞具有特异性杀伤活性。CD4+/CD8+比值保持动态平衡，可维持机体细胞免疫功能稳定，其比值降低表明细胞免疫功能降低[6]。

本组肺腺癌患者CD4+T细胞显著减少，CD8+T细胞明显增加，CD4+/CD8+显著下降，且都具有统计学差异。表明肿瘤患者较正常人免疫功能下降，与文献报道的一致[7]。

化疗后较化疗前比较，CD4+/CD8+明显提高，说明患者化疗后免疫力有所恢复，但并未恢复至正常水平，免疫力恢复主要是CD4+T细胞增加，CD8+T细胞有所减少。

[1]全国肿瘤防治研究办公室.中国恶性肿瘤死亡调查研究（1990-1992）[M].北京：人民卫生出版社，2008.82-101.

[2]Adjei AA.Pemetrexed(ALIMTA)，a novel multitargeted antineoplastic agent[J].Clin Cancer Res，2004，10(12Pt2):4276-80s.

[3]Chow Y，Miyamoto，Kato K，et al.CD4+and CD8+T cells cooperate to improve prognosis of patients with ceophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer Res，2003，63(7):1555-1559.

[4]Chattopahyay S，Moran RG，Goklman ID.Pemetrexed:brochemical and cellular pharmacology，mechanisms，and clinical applications[J].Mol Cancer，2007，6（4）:404-417.

[5]Kuss I，Hathway B，Ferriskl，et al.Decreased absolute counts of T lymphocyte subseds and their relation to disease in squamous cell carcinoma of the head and neck[J].Clin Cancer Res，2004，10(11):3755-3762.

[6]汤钊猷.现代肿瘤学[M].上海：上海医科大学出版社，1993.121-139.

[7]金从国，王熙才，伍治平，等.癌症患者外周血T细胞亚群水平及临床意义[J].肿瘤研究与临床，2003，15(1):33-34.