乳腺浸润性导管癌中多药耐药基因的表达及意义

王 妍 李德昌 郑吉春 任 力 (栾城县医院，河北 石家庄 05430)

化疗是乳腺癌综合治疗最主要手段之一，术前新辅助化疗可以有效降低乳腺癌的肿瘤大小、分级及预后，术后化疗可以预防乳腺癌的转移和复发。化疗和乳腺癌的发展有密切关系，但是目前化疗不能取得治愈性疗效，导致化疗失败的原因主要是肿瘤细胞产生耐药性。影响乳腺癌预后的指标主要包括乳腺癌肿瘤大小，组织学类型及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erBb-2的表达。本文通过免疫组化法研究未行化疗的乳腺癌组织中胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)、P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)及多药耐药相关蛋白(MRP)的表达特点，综合分析其与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 收集我科2003年1月至2011年5月经病理证实为浸润性乳腺癌的标本83例(按2003年WHO乳腺肿瘤组织学分类)。所有病例均为女性，年龄29～82岁，平均54岁，所有病例术前均未进行放化疗。另选择同期手术治疗乳腺纤维腺瘤20例及癌旁正常乳腺组织15例作为对照。

1.2 方法 采用免疫组化染色SP法，即用型GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ、MRP鼠抗人单克隆抗体，通用型 SP检测试剂盒(SP-9000)、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。操作步骤严格按照说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性结肠癌组织作阳性对照。

1.3 结果判定 GST-π定位于细胞质;P-gp、MRP定位于细胞膜和细胞质;Topo-Ⅱ和ER、PR定位于细胞核。部位中出现粗细一致的棕黄色颗粒为阳性染色。在阳性颗粒密集部位随机选取10个200倍视野，计数每个视野中细胞的染色情况，取平均值。以其中阳性细胞占全部细胞数的百分数对其表达强度进行分级:阳性细胞数＜10%为阴性，10% ～26%阳性定为弱阳性(+)，25% ～75%明显阳性定为中度阳性()，＞75%为强阳性()。

1.4 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件包进行统计分析。计数资料采用两个(或多个)样本率比较的χ2检验，正态分布的计量资料采用随机设计的两总体均数的t检验。

2 结果

乳腺癌组织与癌旁正常组织的MRP表达明显高于乳腺纤维腺瘤，而且与肿瘤大小、转移与否、组织学分级及年龄均无明显相关性，Topo-Ⅱ的表达与肿瘤大小、转移与否、组织学分级及年龄均无明显相关性。癌旁正常组织与乳腺纤维腺瘤组织中P-gp、Topo-Ⅱ、GST-π未见明显差异。GST-π和P-gp的表达呈正相关，GST-π和Topo-Ⅱ的表达呈明显负相关，P-gp和Topo-Ⅱ的表达呈明显负相关，见表1。

表1 P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ、MRP阳性表达与临床病理参数的关系〔n(%)〕

3 讨论

MDR是指肿瘤细胞被一种药物诱发耐药后，同时对其他多种结构和作用机制完全不同的药物产生交叉耐药的一种现象〔1〕。它是化疗后的获得性耐药，目前乳腺癌化疗不能取得治愈性疗效，导致化疗失败的原因主要是肿瘤细胞产生耐药性。MDR产生的机制很多，目前的研究主要与转运蛋白、耐药基因产物和肿瘤细胞的凋亡基因有关，其中耐药基因扩增，NDA拓扑异构酶表达，P-gp的过表达，GST-π的细胞毒系统作用的增强随着新辅助化疗的开展成为近年研究热点。

MRP是ABC(ATP binding cassette)跨膜转运蛋白家族成员，定位于染色体16p13.1。目前MRP产生耐药的作用机制主要为减少还原型谷胱甘肽的协同转运机制，谷胱甘肽与药物结合其产物通过跨膜转运至细胞外，降低细胞内化疗药物浓度从而达到耐药目的〔2〕。许多研究表明在乳腺癌组织中MRP的表达与多药耐药基因MDR1的表达存在明显相关性，本次研究也证实MRP呈表达水平。P-GP和MRP同属ABC跨膜转运蛋白家族成员，定位于染色体7q21.1，在ATP的参与下可与多种药物结合并以主动转运方式将结合产物泵出细胞外，降低细胞内药物浓度〔3〕。GST-π是GST家族中一组具有解毒功能的同工酶，将谷胱甘肽与化疗药物相结合，降低药物的细胞毒性，减弱肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。它与谷胱甘肽的氧化还原状态相关，受MRP耐药机制的调节。

Topo-Ⅱ参与真核细胞DNA的转录、翻译、复制及染色体分离功能，是调节核酸空间结构动态变化、控制核酸生理功能的关键酶。在肿瘤细胞的凋亡机制中起主要作用〔4〕。Topo-Ⅱ活性降低或含量减少影响其介导的MDR机制，降低细胞的抗癌活性。

本文提示这三者之间可能存在着相互调节机制。MRP与P-GP耐药谱虽然相似，但MRP对疏水性抗癌药物耐药，P-GP对亲脂性抗癌药物耐药。GST-π阳性者对烷化剂、铂类、蒽环类等化合物产生耐药〔5〕。Topo-Ⅱ的靶点药物为喜树碱、蒽环类及鬼臼毒素类等药物〔6〕。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽转运机制可能会导致细胞内药物的重新分布，从而产生新的耐药性〔7，8〕。乳腺癌肿瘤术后同时检测 GST-π、P-GP、Topo-Ⅱ的表达可以对化疗方案的制订提出参考方案，有效提高化疗效果。本文提示MRP的表达不受疾病发展的影响，可能作为一种隐性特征存在于癌症患者的体质中;Topo-Ⅱ与肿瘤的增殖情况有关，对乳腺癌的预后有意义。最近有研究表明，MRP的谷胱甘肽转运机制可能会导致细胞内药物的重新分布，从而产生新的耐药性〔9〕。

1 魏学明，顾国利.胃癌组织中多药耐药基因的表达特点及其对化疗的指导意义〔J〕.胃肠病学和肝病学杂志，2009;18(11):980-92.

2 Dean M.ABC transporters，drug resistance，and cancer stem cells〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2009;14(1):329.

3 Robillard KR，Hoque MT，Bendayan R.Expression of ATP-binding cassette membrane transporters in rodent and human sertoli cells:relevance to the permeability of antiretroviral therapy at the blood-testis barrier〔J〕.J Pharmacol Exp Ther，2012:340(1):96-108.

4 Cardoso F，Durbecq V，Larsimort D，et al.Correlation between complete response to anthracycline-based chemotherapy and topoisomerase-Ⅱalpha gene amplification and pretein overexpression in locally advanced/metasatic breast cancer〔J〕.Int J Oncol，2004;24(1):201-9.

5 王姝姝.乳腺癌新辅助化疗基因组标志物的建立:EORTC 10994/B IG 002 01临床试验的亚组研究〔J〕.中华乳腺病杂志:电子版，2008;2(3):369-74.

6 Brase JC，Schmidt M，Fischbach T，et al.ERBB and TOP-A in breast cancer:a comprehensive analysis of gene amplification，RNA levels，and protein expression and their influence on prognosis and prediction〔J〕.Clin Cancer Res，2010;16(8):2391-401.

7 刘新兰，王 程，陈 萍.乳腺癌组织中多药耐药相关基因产物表达的研究〔J〕.宁夏医学院学报，2008;30(4):4182-200.

8 谭 敏，宾晓农，何清莲，等.乳腺癌组织中相关耐药基因表达的研究〔J〕.广州中医药大学学报，2005;22(3):200-2.

9 Suiowiak P，Materna V，Matkow SR，et al.Relationship between the expression of cyclooxygenase and MDR1/pglycoprotein in invasive breast cancers and their prognostic significance〔J〕.Breast Cancer Res，2005;7(8):862-71.