VEGF-C，VEGF-D和VEGFR-3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

徐 阳 (天津医科大学第二医院肛肠外科，天津 300000)

结直肠癌 (CRC)是危害人类生命常见的恶性肿瘤之一，2008年美国全球癌症统计报告其致死率为5.07%〔1〕。且发病率有逐年上升的趋势〔2〕。血管内皮生长因子 (VEGF)的高表达与人体中多种肿瘤的发生和侵袭转移有关，在CRC中的过表达可能预后不良。然而也有研究认为VEGF在预测CRC方面并无多大的价值〔3，4〕。本研究通过分析 VEGF-C，VEGF-D和及其受体 (VEGFR)-3在CRC患者中的表达，探讨其与临床病理参数的关系。

1.2.2 结果判定 免疫反应程度评分:0分为阴性;1分为免疫细胞＜5%;2分为5% ～50%;3分为＞50%。染色程度评分:0分为阴性;1分为染色弱;2分为染色中等;3分为染色强。最终结果根据上述两项进行评定，统计分析时将中等和强免疫反应记为阳性〔6〕。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件行χ2检验。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2008年1月至2012年6月外科手术切除CRC标本134例，其中男68例，女66例，平均年龄(67.24±13.58)岁。手术前记录患者的年龄、性别、临床症状、病史、肿瘤位置、组织学分级。肿瘤位置按照结肠和直肠记录、分类。根据国际抗癌协会TNM分期标准〔5〕进行分期:Ⅰ期19例，Ⅱ期48例，Ⅲ期39例，Ⅳ期28例。病理类型:管状腺癌84例、黏液腺癌30例，未分化20例。另取肿瘤周围正常上皮细胞进行检测。所有样本均用4%甲醛固定，石蜡包埋后存档。试剂:VEGF-C(ab135506)、VEGF-D(ab155288)和VEGFR-3(ab27278)抗体购自美国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学法 样本经过脱蜡和再水合。3 μm切片置于0.01 mol/L的柠檬酸缓存液 (pH 6.0)，98℃加热20 min修复抗原表位。0.3%双氧水溶液消除内源性过氧化酶活性。一抗4℃孵育过夜，二抗37℃孵育0.5 h。二氧基联苯胺(DAB)显色，苏木精复染。阴性对照不孵育一抗，其余同上。脱水，中性树脂封片，显微镜下观察。

2 结果

2.1 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在CRC中的表达 与正常上皮细胞相比，肿瘤组织VEGF-C出现过表达 (P＜0.05)。而VEGF-D和 VEGFR-3均未出现过表达。见表1。并且，VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在CRC中的表达具有相关性(χ2=109.419、134.552，P ＜0.05)。

表1 肿瘤组织与正常上皮组织VEGF-C、D、VEGPR-3阳性率比较〔n(%)，n=134〕

2.2 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3表达与临床资料的相关性 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在不同性别、年龄、息肉史及肿瘤史中的表达差异无统计学意义 (P＞0.05)。VEGF-C和VEGF-D在不同组织学类型的表达有统计学意义 (P＜0.05);VEGFR-3在是否有肝转移CRC患者中有统计学差异(P＜0.05);VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在是否发生淋巴转移的样本中表达差异具有统计学意义 (P＜0.05)，而与肿瘤大小、Duke分期、TNM分期差异无统计学意义 (P＞0.05)。见表2。

表2 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3表达与临床资料的相关性

3 讨论

通常情况下VEGF家族在动物和人体的多种组织中表达较少，然而在血管再生比较活跃的组织如胚胎和胎盘和一些疾病如长期炎症紊乱、糖尿病以及局部缺血性心脏病均发现VEGF的高表达。VEGF及其受体在转移性结肠癌和肿瘤相关的内皮细胞中表达水平也较高。因此，VEGF在CRC的形成过程中被认为是一个重要的因子〔5，6〕。研究证实VEGF-C与肿瘤的发展和预后不良有关〔7〕，VEGF发挥作用不仅和其在肿瘤细胞中的表达有关，而且和内皮细胞中VEGF家族表达有关。VEGF家族包括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D 和 VEGFE以及受体 VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。CRC与 VEGF家族关系的研究主要集中于VEGF-A。然而，新发现的VEGF-C和VEGF-D可能在血管再生和淋巴生成中发挥着重要的作用。

本研究结果和上述的研究结果一致，即VEGF-C通过激活络氨酸激酶受体VEGFR-3来诱导淋巴管生成。这种受体存在于胚胎血管内皮细胞，在成长过程中逐渐减少，从而在血管网络形成后限制。最近研究提示VEGFR-3与它的配体VEGF-C和VEGF-D可能通过刺激肿瘤组织中淋巴管的生成，从而诱导产生新的淋巴毛细管，增加了淋巴结转移的可能性〔8〕。血管再生在肿瘤的发生和转移中起着重要的作用，包括在现有内皮脉管系统上生成新的血管。肿瘤血管再生对于肿瘤的快速发展、强化转移的途径非常重要。总的来说，其通过提供氧分、营养和释放生长因子来促进肿瘤细胞的增殖。

本实验在所有肿瘤细胞均检测到了血管再生的标志，说明血管再生在肿瘤的发生和侵袭转移过程中起着重要的作用。同时，淋巴管的生成也可能在CRC的形成中发挥着重要的作用。因此，VEGF-C，VEGF-D和VEGFR-3蛋白表达对CRC的治疗和诊断具有重要价值，并与CRC的形成、侵袭和转移相关。

1 Svagzdys S，Lesauskaite V，Pavalkis D，et al.Microvessel density as new prognostic marker after radiotherapy in rectal cancer〔J〕.BMC Cancer，2009;9(95):1471-7.

2 Brenner H，Hoffmeister M，Haug U.Should colorectal cancer screening start at the same age in European countries?Contributions from descriptive epidemiology〔J〕.Br J Cancer，2008;99(3):532-5.

3 Martins SF，Reis RM，Rodrigues AM，et al.Role of endoglin and VEGF family expression in colorectal cancer prognosis and anti-angiogenic therapies〔J〕.World J Clin Oncol，2011;2(6):272-80.

4 Cao H，Jin C，Huang D，et al.Changes in serum IGF-1 level and tumor VEGF expression in mice with colorectal cancer under hyperglycemic conditions〔J〕.Mol Med Rep，2013;7(4):1361-5.

5 江建军，裴永彬，刘 云，等.结直肠癌组织中VEGF-C，VEGFR-3的表达及意义〔J〕.天津医药，2012;40(10):990-4.

6 钱 江，陈旺盛，文坤明，等.Slug和E-cadherin在结直肠癌组织中的表达及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2012;32(13):2683-5.

7 Brozek W，Kriwanek S，Bonner E，et al.Mutual associations between malignancy，age，gender，and subsite incidence of colorectal cancer〔J〕.Anticancer Res，2009;29(9):3721-6.

8 Winder T，Lenz HJ.Vascular endothelial growth factor and epidermal growth factor signaling pathways as therapeutic targets for colorectal cancer〔J〕.Gastroenterology，2010;138(6):2163-76.