新工艺合成奥美沙坦酯原料药的有关物质及含量测定

朱剑波，邱细敏，郭思维，张 为，杨小红，王 琼，李 威

(湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410006)

奥美沙坦酯是一种强效和特异性血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，该药对不同程度的高血压病人均有很好的疗效，其代谢产物奥美沙坦是生理活性的药物[1]。奥 美 沙 坦 酯(Olmesartan Medoxomi I)由日本S a n k y o(三共公 司)和 美 国Fo r e s t La b o r a t o r i e s 开发，2002年5月以商品名Benicar在美国上市，同年8月在德国获批准并在10月初上市。多项临床表明其降压效果和预防靶向器官的损伤作用更为理想，该药无论单独使用或与其他药物合用，均有较好的降压效果，且耐受性良好，显示出很好的应用前景。2008年，奥美沙坦酯全球性销售额已达到了21.57 亿美元，同比上一年增长了14.01%，是一个快速增长的品种。其突出特点是半衰期较长，一天服用一次，即可以在一天内有效控制血压，因此服用较为方便。同时奥美沙坦酯与其他的血管紧张素II 受体拮抗剂类药物相比，该药的剂量小、起效快，服用方便，降压作用更强而持久，不良反应的发生率低(小于1%)，具有明显的优点[2-4]。本课题采用新的合成方法（正在申请专利）获得的新的仿制药奥美沙坦酯避开了日本三共公司的发明专利，将其国产化，必将大大降低广大患者的治疗成本。

新的合成工艺带来了新的中间产物，该法引入了6 个中间杂质，其结构如图1。为有效控制该奥美沙坦酯在生产及贮存中产生的有关物质,建立了奥美沙坦酯有关物质及含量测定的高效液相色谱法。试验证明：本法使各有关物质与主药均能完全分离,方法专属性强,重复性好,灵敏度高,可用于生产质量控制[5-7]。

图1 奥美沙坦酯及其相关物质的结构式

1 仪器与材料

岛津高效液相色谱仪；紫外检测器；超声清洗器；电子分析天平XP205（梅特勒公司）；酸度计PHS-3C(上海鹏顺科技有限公司)。

奥美沙坦酯化学对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量为99.5%）；乙腈（色谱纯）；其他试剂为分析纯；水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ODS-C8 柱(4 .6mm×150 mm，5μm）,紫外检测器，检测波长：256nm,检测器温度：25℃，流动相A；磷酸缓冲盐 (1.36 g 磷酸二氢钾，加人1000mL 水溶解，加入2mL 三乙胺，用磷酸缓冲液调节PH 至2.8)流动相B；乙腈，按表1 进行梯度洗脱。

表1 梯度洗脱条件

2.2 专属性实验

分别精密称取奥美沙坦酯及其相关物质适量，加80%乙腈水溶液溶解并稀释制成1.0 mg/mL的混合溶液，精密进样10ul，记录色谱图，如图1.其中3 为主成分峰。

图1 奥美沙坦酯及其相关物质的分离色谱图

2.3 线性

精密称取奥美沙坦酯标准品适量，加80%乙腈 水 逐 级 稀 释 配 成0.2μg/mL，2μg/mL，20μg/mL,0.1mg/mL,0.2mg/mL,0.5mg/mL的 溶 液，分 别 进 样10μL，记录色谱图。结果如图2.以奥美沙坦酯原料浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：y=21535x+49822；R2=0.9997。结果表明，奥美沙坦酯原料在浓度为0.2μg/ml～500μg/mL的范围内具有良好的线性关系。

图2 奥美沙坦酯的标准曲线

2.4 降解产物的分离

取奥美沙坦酯对照品经降解所得产物进行HPLC 分离检测(图3)。结果表明经酸、碱、氧化、高温、高湿和光照破坏所产生的有关物质与主药峰达

到完全分离,本法专属性良好，如图3。

图3 降解产物分解图谱

2.5 检测线的确定

取奥美沙坦酯对照溶液，加80%乙腈水逐级稀释，按信噪比3：1 时的进样量为最低检测线，结果奥美沙坦酯的检测线为0.4ng

2.6 精密度试验

精密配置奥美沙坦酯溶液，精密连续进样6次，计算主峰面积的RSD。结果峰面积的RSD 为0.3%。

2.7 重复性试验

取同一批号样品6 份，在同一条件下，分别配置成同一浓度溶液，分别进样10μL，记录色谱图。结果表明实验的重复性良好。

2.8 稳定性试验

取同一批号样品适量，加80%乙腈水溶解，配制成为0.2mg/mL，分别放置0,2,4,6,8 小时后，精密进样10μL，记录色谱图，结果主峰面积的RSD 为0.22%。

2.9 耐用性试验

分别考察流动相pH 值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。结果表明各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离，各条件之间杂质含量绝对值在±0.1%以内。并分别在各条件下，平行配置6 份溶液，分别进样。结果表明各条件下的杂质含量数据（n=6）的RSD 不大于2.0%。

2.10 有关物质的测定

2.10.1 质量分数1%主成分自身对照法

取奥美沙坦酯适量，加乙腈超声溶解并稀释制1 mg/mL的溶液，作为供试品溶液；精密量取1 mL，置100 mL 量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；精密量取对照溶液10 L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，调节仪器灵敏度，使主峰的峰高为满量程的25%；再精密量取供试品溶液10 L，注人液相色谱仪，记录色谱图，如有杂质峰，除空白溶剂峰外，量取杂质峰面积，与对照溶液主峰面积比较并计算（三批样品平行进行）。结果见表2。

表2 奥美沙坦酯中有关物质的含量

2.10.2 奥美沙坦酯含量测定

取奥美沙坦酯原料药适量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1mg的溶液,作为供试品溶液;另取奥美沙坦酯对照品适量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1 mg的溶液,作为对照品溶液;取溶液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图按外标法计算含量。结果见表3。

表三批样品含量测定结果

3 讨论

在选择色谱条件时，首先参照了文献[1]，在此基础上再进行的一系列的改变。第一，取混合对照溶液,用紫外检测器检测并分析紫外光谱图。结果显现奥美沙坦酯与其相关物质均在波长256 nm 处有较大吸收,同时在该波长下,梯度洗脱时空白干扰小,因此选择波长256 nm 作为检测波长。第二，选择流动相梯度洗脱条件时,在文献参考的基础上进行了一系列的摸索。第三，在有关物质检测方面，目前一般文献都是用的C18 柱，C8 柱用的较少，本课题通过比较C18和C8 柱发现，在能有效的分离的情况下用C8 柱可以大大缩短分析时间，提高分析效率，并且基线更平稳。除此之外，在方法学考察方面，本课题对其方法进行了耐用性试验，更完善的说明该方法的可靠性和实用性。

[1]潘红娟,吴泰志,张福利,俞雄.奥美沙坦酯及其相关物质的分离与测定[J].药物分析杂志2008,28(11) ：1883-1887.

[2]王桂云,马超,奥美沙坦酯中有关物质的HPLC 测定[J],中国医药杂志2009，40(3)：205-206.

[3]翁水旺.反相高效液相色谱测定奥美沙坦酯的有关物质[J].药物分析杂志2006,26(5)：686-688.

[4]韩健，刘静，奥美沙坦酯[J].中 国新药杂志，2007，21(5)：1815-1816.

[5]徐彩丽,袁华,喻宗沅.奥美沙坦酯的研究进展[J].化学与生物工程2005，4(5)：7-8.

[6]WEN Shui-wang.RP-HPI C determination of related substances in ohnesartan medoxomil.Chin J A Pharm Anal,2006,(26)5,686～688.

[7]徐丽佳,陈晓辉,王峰,宫平,于治国,毕开顺盐酸艾咪朵尔相关物质的分离与含量测定 [J].沈阳药科大学学报,2010,27(6)：470-473