敖勒盖热－13味散质量标准研究

阿古拉 乌兰巴特尔

(1．青岛第一疗养院，山东 青岛 266071; 2．乌审旗蒙医医院;内蒙古 乌审 017300)

敖勒盖热－13味散为乌审旗蒙医医院制剂，由龙骨、玫瑰花、麦冬、止泻木子、草乌叶、石榴等药味组成，用于腹胀、肠鸣、大便秘结、术后通气等病症，临床效果好，但目前尚无质量标准。为保证该制剂的内在质量，对处方中止泻木子、进行了薄层色谱定性鉴别研究，并对方中草乌叶进行含量测定，有望对敖勒盖热－13味散进行质量控制。

1 仪器与试剂

1．1 仪器:84－2型数显搅拌恒温电热套;HH－2数显恒温水浴锅;AE200S电子分析天平;Agilent ll00LC型液相色谱仪，色谱工作站;R－205型旋转蒸发器;旋转蒸发仪;超声波清洗机;冷冻液槽;精密电子天平。

1．2 试剂:供试品来源:内蒙古乌审旗蒙医医院，薄层板:自制硅胶G板、预制硅胶G板(烟台化学工业研究所)。乙醇、无水乙醇(天津四友生物医学技术有限公司，分析纯);乙腈、甲醇(天津四友生物医学技术有限公司，色谱纯)。对照品购自中国药品生物制品检定所，乌头碱(110720－201111)，其他试剂均为国产分析纯，水为离子交换高纯水。

2 薄层鉴别

处方中止泻木的TLC:止泻木为处方中主要药味之一，具有清热、利胆、止泻功能。参照“中国药典”2010年版一部“十三味榜嘎散”项下的薄层鉴别(4)方法，按处方比例折算，取本品10g，加氨水1mL，拌匀，密塞放置15min，加甲醇40mL超声处理15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取以相同工艺制备的阴性对照(缺止泻木)9g，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试液。再取止泻木对照药材1g，加甲醇20m L超声处理15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－三氯甲烷－二乙胺(8∶1:1)为展开剂，展开，取出，晾干(需彻底晾干，放置过夜后显色效果更好)，喷以改良碘化铋钾试液，结果供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显五个相同的橙黄色主斑点，且无阴性干扰。见图1。

图1 敖勒盖－热13味散止泻木子TLC

3 含量测定［1－2］

3．1 色谱条件与系统适用性试验:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂C18(250mm×4．6mm，5μm);以甲醇－水－氯仿－三乙胺(70:30:2:0．1)为流动相，检测波长为230nm，柱温为室温。理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000。

3．2 对照品溶液的制备:精密称取乌头碱对照品适量，加乙醇制成每1mL含80μg的溶液，即得。

3．3 供试品溶液的制备:取本品约5g，精密称定，用氨试液润湿，乙醚浸提14h，提取液挥弃乙醚，残渣以二氯甲烷溶解，定容至mL，用．01mol·L－1H2SO4溶液mL 萃取等体积的二氯甲烷液，取水相，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3．4 专属性试验:取草乌叶阴性对照(处方中缺草乌叶)，照测定方法中供试品溶液的制备法制成阴性对照溶液;分别吸取阴性对照溶液、乌头碱对照品溶液、供试品溶液各10?L，分别注入液相色谱仪，试验结果表明:阴性对照色谱中在与乌头碱对照品和供试品色谱乌头碱峰相对应的保留时间处无色谱峰出现，本法专属性符合要求。高效液相色谱图见图1～图3。

图2 阴性对照色谱

图3 供试品色谱

图4 对照品色谱图

3．5 线性关系试验:精密称定乌头碱对照品2．2mg，置10mL量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0．22mg·mL－1的对照品溶液。分别精密吸取μL、15μL、10μL、5μL、1μL 按上述色谱条件进行测定。以峰面积对进样量进行回归分析，结果 Y=1087．5x－0．5492，r=0．9996，乌头碱在0．22μg～4．4μg范围内呈良好线性关系。

3．6 精密度试验:取同一份供试品溶液，6次分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定。结果RSD为1．32%(n=6)，表明仪器精密度良好。

3．7 稳定性试验:取同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h 精密吸取10μL 注入液相色谱仪，测定，结果供试品在12h内锋面积基本稳定，RSD为1．54%。

3．8 重现性试验:取同一敖勒盖热 －13样品(批号:20120106)，照含量测定方法中供试品溶液的制备，分别制得6份供试品溶液，分别照含量测定方法测定每份的含量，试验结果见表1。

表1 重现性试验结果

3．9 回收率试验:取已知乌头碱含量的敖勒盖热－13(与重现性试验同批号，批号:20120106，含量为:0．712μg·g－1)内容物，分别精密称定6份，分别精密加入乌头碱加标对照品溶液25mL(加标对照品溶液浓度为:43．2μg·mL－1，加标量为乌头碱．08μg)，按含量测定方法测定每份的含量，计算回收率，试验结果见表2。

表2 回收率试验结果

3．10 样品测定:按照供试品制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，结果见表3。

表3 样品的含量测定结果(n=2)

4 讨论

为保证该制剂的内在质量，对处方中玫瑰花、麦冬、石榴等药味进行了薄层色谱定性鉴别研究，结果玫瑰花、麦冬、石榴的薄层鉴别实验中阴性对照有干扰，未收入正文，有待下一步实验研究。本制剂含量测定曾选用石榴中没食子酸作为含量测定指标，但阴性溶液有干扰，因此最终选用乌头碱，作为质控指标。本实验研究显示，敖勒盖热－13散中乌头碱含量极低，这和草乌叶中含乌头碱的含量低有关，因此在今后的实验中把测定次乌头碱和新乌头碱作为质量控制指标更有科学意义。

［1］张帆，武琳哈木拉提·吾甫尔．民族药铁棒锤炮制前后乌头碱和3－脱氧乌头碱含量的HPLC分析［J］．中成药，2011，33(3):479 －482

［2］邱振文，罗丹冬，王沛坚．HPLC法测定舒痹宁颗粒中次乌头碱、新乌头碱的含量［J］．中药新药与临床药理，2008，19(4):304－305