乳腺癌组织中Survivin、Ki67的表达变化及意义

魏晓丽，张 玉，刘敏丽，景彩萍，成延萍

(1延安大学医学院病理学教研室，陕西 延安 716000;2延安市人民医院)

生存素(Survivin)是新发现的凋亡抑制蛋白(IAP)基因家族的新成员，在人类大多数肿瘤组织中丰富表达，其抗凋亡作用可通过Caspase途径和非Caspase途径实现。细胞核增殖抗原(Ki67)是一种与增殖细胞相关的核抗原，是近年来认为能更好评估肿瘤细胞增殖活性的重要标志物［1，2］。本研究采用免疫组化法对乳腺癌组织中Survivin、Ki67进行检测，观察其表达变化并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 选择延安大学医学院附属教学医院病理科2004年1月～2007年1月手术切除的乳腺癌组织标本82例份作为研究对象(肿瘤组)，患者均为女性，年龄30～67岁，平均46.2岁。所有患者术前均未经放疗、化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗且均经过病理证实。月经状况:绝经前44例，绝经后38例;肿瘤直径:＜2 cm 21例，2～5 cm 47例，＞5 cm 14例;病理学类型:浸润性导管癌73例，浸润性小叶癌6例，其他类型癌3例;组织学分级:Ⅰ级21例，Ⅱ级42例，Ⅲ级19例;TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期58例，Ⅲ～Ⅳ期24例;淋巴结转移:无35例，有47例;ER:阴性39例，阳性43例;PR:阴性42例，阳性40例。另选同期乳腺增生性病变组织20例份(增生组)，癌旁正常乳腺组织10例份(正常组)。各组一般资料无统计学差异，具有可比性。

1.2 Survivin、Ki67检测方法 所有标本均采用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续4～5 μm切片。采用免疫组化SP法。Survivin兔抗人多克隆抗体为Santa Cruz公司产品，Ki67/ER/PR鼠抗人单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。实验主要步骤:石蜡包埋组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢室温15 min阻断内源性过氧化酶，微波修复抗原95～98℃，15～20 min，滴加一抗(多抗Survivin、单抗Ki67/ER/PR工作液)4℃过夜，依次滴加生物素化二抗，辣根酶标记链霉菌卵白素工作液，DAB显色，苏木精复染，脱水至透明封片，显微镜观察。用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性片作阳性对照。结果判断标准:Survivin染色阳性产物为黄色、棕黄色颗粒，定位于细胞质内。每例在400倍光镜下观察5个视野，计数1000个细胞，计算阳性细胞百分率，凡染色强度明显高于背景者为阳性表达，将阳性细胞按其数量及染色强度分级:弱阳性(+)，阳性细胞百分率＜10%，显色强度为淡黄或仅个别细胞呈黄至棕黄色;中度阳性(++)，阳性细胞百分率10% ～60%，显色强度介于弱阳性与强阳性之间;强阳性(+++)，阳性细胞百分率60%以上，多数细胞呈黄至棕黄色;染色强度与背景无明显差别者为阴性(－)。利用HMIA2000高清晰度彩色图文分析系统，将阳性细胞的染色强度转化为量化指标，测得其平均光密度(OD)值。Ki67/ER/PR染色阳性产物棕黄颗粒定位于细胞核内，增殖活性以Ki67标记指数(LI)代表，每例选10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，共计数1000个细胞，计算Ki67阳性细胞所占百分比，即为LI。Ki67标记指数越大，反映处于增殖阶段的细胞数量越多，细胞增殖越活跃。

1.3 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件。计数资料比较采用t检验和χ2检验，相关性分析采用Spearman法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Survivin和Ki67的表达 见表1。

表1 各组Survivin和Ki67的表达()

表1 各组Survivin和Ki67的表达()

注:与正常组比较，*P ＜0.01;与增生组比较，△P ＜0.01

组别 n Survivin(OD值) Ki67(LI)肿瘤组 82 0.517±0.047＊△ 23.85±11.46＊△增生组 20 0.327 ±0.054* 10.48 ± 5.19*正常组10 0.039 ±0.026 3.51 ± 2.64

2.2 相关性分析 乳腺癌组织中Survivin表达与Ki67 表达呈正相关(r=6.821，P ＜0.05)，提示 Survivin阳性表达的乳腺癌中癌细胞增殖活性明显增加。

2.3 Survivin表达与乳腺癌临床病理参数的关系见表2。Survivin表达与乳腺癌TNM分期及淋巴结转移相关(P均＜0.05)，而与月经状况、肿瘤直径、病理学类型、组组学分级、ER、PR无相关性(P均＞0.05)。详见表 2。

表2 Survivin表达与乳腺癌临床病理参数的关系

2.4 Survivin表达与乳腺癌预后的关系 Survivin阳性及阴性表达患者5年生存率分别为63.9%(39/61)、90.5%(19/21)，两者比较，P ＜0.05。

3 讨论

乳腺癌的发生与其他恶性肿瘤一样，是一个多基因参与并经过多步骤的复杂过程，其中细胞增殖和凋亡平衡失调是导致肿瘤发生、发展的重要因素［3］。正常细胞的增殖、分化和凋亡处于平衡状态，凋亡抑制有利于细胞的增殖，并有利于异常基因的进一步积聚，促使细胞恶性转化，从而有助于肿瘤的发生进展。Survivin作为IAP家族中目前发现的惟一同时参与细胞凋亡与周期调控的分子，对维持细胞快速增殖及肿瘤细胞的生理功能具有非常重要的作用。Survivin参与细胞的生长和分化，其分布具有明显的组织差异性，在胚胎发育过程中表达，在正常分化成熟的组织中不表达，而在肿瘤组织中又重新表达，因此与肿瘤的发生密切相关［4］。本研究显示，与正常组比较，增生组及肿瘤组Survivin OD值明显升高，提示Survivin的表达发生在乳腺癌恶性转化的早期，在乳腺癌的发生、发展中起重要作用，Survivin在乳腺癌中的高表达，有望成为乳腺癌基因治疗的靶点。本研究还发现，Survivin表达与乳腺癌绝经情况、肿瘤直径、病理学类型、组织学分级、ER、PR状态无相关性，而与TNM分期、淋巴结转移有相关性。说明正常细胞脱离原组织时即启动凋亡程序，不会形成远隔部位的增殖，而癌细胞由于Survivin对凋亡的抑制，细胞得以继续分裂，造成肿瘤邻近和远隔部位转移灶的形成。因此，我们推断乳腺癌中Survivin阳性患者有较高的恶性度，更具有侵袭性，对乳腺癌细胞的转移起促进作用，Survivin在乳腺癌组织中高表达与其生物学特性密切有关，可作为判断乳腺癌发生、发展、转移等生物学行为的一个指标。本研究Survivin阳性表达患者5年生存率明显低于阴性表达患者，此与国内外等报道相近［5，6］。说明 Survivin阴性表达者生存时间高于阳性者，提示Survivin阳性表达的乳腺癌患者预后不良。

Ki67是与细胞增殖相关的核抗原，只在增殖细胞G1、S、G2和M期表达，Ki67抗体是正对处于增殖周期的人类细胞核抗原的抗体，因其半衰期短，细胞脱离增殖周期后迅速降解，检测结果的可靠性优于半衰期长的增殖细胞核抗原，因此被视为较可靠的全面反映细胞群体增殖活性的指标［7，8］。本研究显示，与正常组比较，增生组及肿瘤组Ki67 LI明显升高，表明在乳腺癌和乳腺增生性病变组织中存在异常活跃的细胞群体增殖，肿瘤的高增殖又与肿瘤浸润生长和转移有关，因此Ki67的高表达与肿瘤患者的预后不良相关［9］。本文还发现，Survivin表达与Ki67表达呈正相关，提示Survivin不仅参与凋亡的调控，还可能促进了细胞增殖，从而通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的双重作用来促进肿瘤的进展［10］。

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