阿尔茨海默病患者脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平变化及意义

刘晓兰，陆连第，陈子祥

(天津市海河医院，天津 300350)

阿尔茨海默病(AD)是进行性发展的致死性神经退行性病变，65岁以上人群发病率为6.6%，并且每增加5岁，患病率增加一倍以上 。AD患者记忆、认知功能的减退给个人、家庭及社会带来了沉重的痛苦和负担。AD患者的临床表现往往与血管性痴呆(VD)的症状相互叠加，临床上很难获得确诊。本研究检测了阿尔茨海默病(AD)患者脑脊液α-突触核蛋白、β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、总牛磺酸(T-tau)、磷酸化牛磺酸(P-tau)、轻链蛋白(NF-L)水平变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年1月～2011年12月我院收治的AD患者43例(AD组)，男27例，女16例;年龄(64.3±7.7)岁;依据美国精神疾病诊断与统计手册(第三版)的标准诊断;MMSE量表评分(7.4 ±5.4)分;病程(40.2 ±14.3)d;并发神经系统疾病3例，高血压23例，心脏病16例。VD 51例(VD 组)，男28例，女23 例;年龄(66.4 ±6.8)岁;MMSE 量表评分(7.9 ±6.0)分;病程(50.2 ±18.4)d;并发神经系统疾病4例，高血压29例，心脏病17例。另选30例体检者作为对照组，男17例，女13例;年龄(63.4 ±6.5)岁;MMSE 量表评分(17.8 ±2.7)分;合并高血压10例，心脏病8例。

1.2 脑脊液 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L检测 本组所有脑脊液标本均在患者入院后3 d内采集，标本采集后，在30 min内，4℃离心2000 r/min，15 min，取上清液，弃去下层沉淀。采用ELISA试剂法检测脑脊液中上述蛋白的水平，室温下预测样品含量，对浓度过高的样本进行稀释，加样完成后30℃反应120 min。弃去液体，甩干，每孔加检测溶液A 100 μL，37℃反应60 min。温育60 min后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，大约 400 μL/每孔，甩干;再加入检测溶液B，温育60 min后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1 ～2 min，350 μL/每孔，甩干，依序每孔加底物溶液90 μL，酶标板加上覆膜37℃避光显色。每孔加终止溶液50 μL，终止反应，用酶联仪在450 nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标)，OD值为横坐标(对数坐标)，在对数坐标纸上绘出标准曲线。应用curve expert1.3进行计算出样本含量的最终浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计量资料以表示，组内、组间比较采用t检验，计数资料用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑脊液 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L水平比较 见表1。

2.2 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 联合应用鉴别AD和VD的灵敏度、特异度 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L联合应用可以将AD与VD区分开来，灵敏度93%(95%CI为0.84～0.95)，特异度 88%(95%CI为 0.67 ～0.91)。

表1 脑脊液 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平比较(ng/mL，)

表1 脑脊液 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L 水平比较(ng/mL，)

注:与对照组比较，*P ＜0.05;与 VD组比较，△P ＜0.05

组别 α-突触核蛋白 Aβ1-42 T-tau P-tau T-tau/P-tau NF-L AD 组 94.7 ±17.9* 355.8 ± 89.2＊△ 844.1 ±199.6＊△ 102.3 ±12.3* 12.3 ±0.3△ 1998.4 ±387.5*VD 组 75.3 ±17.3* 523.4 ±100.3 602.5 ±150.3* 125.6 ±11.7* 20.8 ±3.2* 2247.8 ±386.4*对照组 66.8 ±12.3 643.4 ±123.1 473.4 ±148.2 49.2 ±10.4 10.3 ±1.1 840.3 ±200.3

3 讨论

目前，尚未建立统一公认的脑脊液或血清生物标记物诊断早期AD的体系和标准，而对于脑脊液生物标记物在AD患者中的诊断价值，目前也存较多的争论。α-突触核蛋白是Lewy体的重要组成成分，是一种中枢神经系统突触前表达的可溶性蛋白质，其基因定位于第4号染色体，被认为与帕金森病的发病密切相关。而近年来，其在AD患者中的表达变化也逐步被重视。Mollenhauer等报道，α-突触核蛋白在AD患者脑脊液呈明显的升高趋势，但是对于诊断AD而言，缺乏足够的敏感性和特异性。很多学者同样认为尽管α-突触核蛋白在AD患者脑脊液中有一定的升高，但是在VD患者的脑脊液中同样升高，因此单纯依靠α-突触核蛋白的变化，并不能将VD和AD区分开来［1～3］。本研究 AD组和VD组脑脊液α-突触核蛋白水平均较对照组升高，但两者间比较无差异，以上结果表明α-突触核蛋白升高，提示患者有VD或者AD的可能，但是单纯通过α-突触核蛋白的表达水平的高低却并不能将两者区分开来。

Aβ1-42、T-tau、P-tau在 AD 患者脑脊液中的水平变化研究较多，多数学者认为AD的主要病理特征为细胞外老年斑和细胞内神经元纤维缠结。患者脑脊液tau蛋白升高、Aβ1-42降低。近年来，有学者提出脑脊液tau蛋白、Aβ1-42与痴呆严重程度有关，但是并无直接的证据证明这一论点。Strozyk等［4］对17例AD患者3 a随访结果显示，脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40的水平显著降低，且病程＜2 a的患者比病程＞2 a的患者下降更显著。王海红等［5］认为，AD的严重程度与血浆脑脊液中的Aβ1-42、T-tau、P-tau的水平具有较为明确的相关性。孟然等［6］报道了胼胝体面积测量同时配合脑脊液P-tau蛋白和Aβ1-42水平的测定，不仅对确诊早期AD有帮助，而且能反映AD的病程变化。AD组脑脊液T-tau、P-tau、T-tau/P-tau水平较对照组升高，Aβ1-42水平较对照组降低;VD组脑脊液 T-tau、P-tau、T-tau/P-tau较对照组升高;AD组脑脊液 Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau水平较VD组升高。这与文献报道一致，通过联合检测 Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau水平可以更有效的鉴别AD与VD，提高鉴别的准确度和敏感性。

NF-L被认为是轴索损伤的标志物，一度被认为对多发性硬化的诊断具有非常重要的意义，并且其水平与预后直接相关，而其在AD中的研究相对较少［7］。本研究AD组和VD组脑脊液NF-L水平均较对照组升高，但两者比较无差异，因此一定程度上认为，NF-L的水平变化并不能反应AD与VD的区别。

事实上，无论 α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau及NF-L，其作为单独的诊断标记来区分AD与VD或其他疾病的敏感性及准确度都非常低，特别是加入年龄、健康状况、关节炎及肿瘤等因素，更易使诊断出现偏差。Constantinescu等［8］报道 α-突触核蛋白作为单独的标记物来区分AD和VD的准确度为71%，敏感度67%;而Reesink则发现，联合应用Aβ1-42、T-tau、诊断 AD的准确性83%，敏感度85%。联合5个指标区分AD和VD的灵敏度为93%、特异度为88%，明显的高于单个指标，因此联合上述5个指标来鉴别AD与VD具有非常重要的临床意义。

总之，α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L在AD中表达升高或降低，联合检测五种指标有可能早期诊断AD及鉴别VD。

［1］张平，刘康永，蔡增林，等.α-突触核蛋白及其在帕金森病发病中的可能机制［J］.中国临床神经科学，2008，16(5):556-558.

［2］李毅，张忠兴，吕路线，等.阿尔茨海默病与血管性痴呆患者脑脊液tau蛋白及β-淀粉样蛋白(1-42)浓度的对照性研究［J］.中华神经科杂志，2004，37(4):221-224.

［3］薛海波，肖世福，孙云，等.脑脊液生物学标志物诊断阿尔茨海默病与血管性痴呆［J］.中国现代神经疾病杂志，2007，7(3):257-261.

［4］Strozyk D，Blennow K，White LR，et al.CSF Aβ42 levels correlate with amyloid-neuropat hology in a population-based autopsy study［J］.Neurology，2003，60(4):652-656.

［5］王海红，李冠军，李霞，等.阿尔茨海默病与血管性痴呆患者脑脊液β淀粉样蛋白1-42、β-淀粉样蛋白1-40［J］.内科理论与实践，2009，4(4):305-307.

［6］孟然，陈楠，贾建平，等.矢状轴位胼胝体面积测量与脑脊液ptau蛋白和Aβ1-42水平对阿尔茨海默病早期诊断的价值［J］.中华神经外科杂志，2007，19(1):23-26.

［7］张艳，李翔，乔建，等.神经丝蛋白轻链与多发性硬化的相关性研究［J］.中华医学杂志，2007，87(39):2745-2749.

［8］Constantinescu R，Zetterberg H，Holmberg B，et al.Levels of brain related proteins in cerebrospinal fluid:an aid in the differential diagnosis of parkinsonian disorders［J］.Parkinsonism Relat Disord，2009，15(3):205-212.