川楝子与炒黄川楝子急性毒性作用比较研究＊

2013-08-29唐大轩熊静悦谭正怀

四川生理科学杂志 2013年2期

唐大轩熊静悦谭正怀

（四川省中医药科学院·国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室，四川成都 610041）

川楝子（Melia toosendan）为楝科（Meliaceae）楝属（Meliaceae）川楝的果实（又名金铃子等），广泛分布于四川、湖北、贵州、河南等地。性味苦寒，有小毒，归肝、小肠、膀胱经，具有疏肝泄热、行气止痛、杀虫等功效，临床用于治疗胸胁、脘腹胀痛、疝气痛、虫积腹痛。川楝子中主要有效成分为川楝素，此外，还含有挥发油、黄酮及多糖等多种化学成分，川楝子活性成分还大量用于植物防护和机体毒理及药理研究。有关川楝子毒性的记载首见于《名医别录》，谓川楝子有小毒，但临床应用仍很广泛，现代对其毒性的研究较少。由于川楝子的毒性作用，人们采用炒黄以炮制川楝子，达到降低其毒性作用的目的，然而，炒黄炮制川楝子真的可以达到减毒作用吗？本文拟通过比较研究川楝子和炒黄川楝子水提物、乙醇提取物对小鼠的急性毒性作用，为临床应用提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

生川楝子水提取物，棕色膏体，1g浸膏相当于2.8g原生药；生川楝子70%乙醇提取物，深棕色膏体，1g 浸膏相当于4.95g原生药；炒黄川楝子水提物，棕褐色膏体，1g浸膏相当于2.6g原生药。炒黄川楝子70%乙醇提取物，棕褐色膏体，1 g浸膏相当于4.34g原生药。生川楝子饮片购自四川新荷花饮片公司，提取物由中国科学院成都生物研究所提供，给药时以蒸馏水配制，给药剂量以原生药g·kg-1计。

1.1.2 动物

昆明种小鼠，SPF级，♀♂各半，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK（川）2008-19。饲养于SPF屏障系统中，光照条件为12h／12h明暗交替，温度20-26℃，相对湿度40%-70%，以鼠全价颗粒饲料喂养。

1.1.3 仪器

电子天平，JY10001，良平仪器；电子天平，JA1003A，上海精天电子仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 生川楝子水提取物最大耐受量试验

预实验结果显示无法测出其LD50，故本实验拟测定其最大耐受量。将40只昆明种小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分为对照组和生川楝子水提物组（n=20），以最大浓度（1.12g原生药·ml-1）、最大给药体积（0.4ml·10g-1）灌胃小鼠1 次，逐日观察并记录给药后14 日内动物的中毒表现以及死亡情况。第14d处死小鼠取心、肝、脾、肺、肾计算脏器指数。

1.2.2 生川楝子70%乙醇提取物LD50试验

预实验结果得到全死剂量及不致死剂量，故本实验拟测定其LD50值。将50只昆明种小鼠禁食不禁水16h后按体重随机均分为5组，给药浓度分别为3.30g·ml-1、2.64g·ml-1、2.11g·ml-1、1.69 g·ml-1及1.35 g·ml-1，给药体积0.4ml·10g-1，灌胃给予小鼠1 次；逐日观察并记录给药后14d内动物的中毒表现以及死亡情况。

1.2.3 炒黄川楝子水提物最大耐受量试验

预实验结果显示无法测出其LD50，故本实验拟测定其最大耐受量。将40只小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分为对照组和炒黄川楝子水提物组（n=20）；以最大浓度（0.95g原生药·ml-1）、最大给药体积（0.4 ml·10g-1）灌胃小鼠1次；逐日观察并记录给药后14日内动物的中毒表现以及死亡情况；第14d处死小鼠取心、肝、脾、肺、肾计算脏器指数。

1.2.4 炒黄川楝子70%乙醇提取物LD50试验

预实验结果得到全死剂量及不致死剂量，故本实验拟测定其LD50值。将60只小鼠禁食不禁水16h后按体重随机分均为6组（n=10），给药浓度分别为3.48g·ml-1、2.78g·ml-1、2.23g·ml-1、1.7g·ml-1、1.43g·ml-1及1.14g·ml-1，相邻组见的剂量比为1∶0.8，给药体积0.4ml·10g-1，灌胃给予小鼠1次；逐日观察并记录给药后14日内动物的中毒表现以及死亡情况。

1.3 统计方法

所有数据均以表示，使用SPSS11.5软件进行单因素方差分析；半数致死量LD50用Bliss法进行计算。

2 结果

2.1 生川楝子水提取物最大耐受量试验

小鼠灌胃给予生川楝子水提取物或蒸馏水后未出现死亡或行为学、排泄物、分泌物等异常。给药组体重与对照组比较无统计学差异，解剖肉眼检查各组小鼠主要脏器均未发现明显异常；从表1可以看出生川楝子水提取物组与对照组肝脏系数有显著性差异。测得生川楝子水提取物的最大耐受量为≥44.80g·kg-1。

2.2 生川楝子70%乙醇提取物LD50试验

小鼠在给生川楝子70%乙醇提取物后先后出现趴伏、少动、对外界刺激的反应降低，行动迟缓，严重者抽搐，从表2、3可见，多数动物在给药后3h内发生死亡。解剖死亡小鼠见呼吸先于心脏搏动停止。测得其LD50为80.92g·kg-1，回归方程y（Probit）=-18.52+12.32Log（D），LD50（Feiller校正）95% 的可信限为 72.71 -89.99 g · kg-1，LD5为59.51g·kg-1，LD95为110.04g·kg-1。

2.3 炒黄川楝子水提物最大耐受量试验

小鼠灌胃给予炒黄川楝子水提取物或蒸馏水后未出现死亡或行为学、排泄物、分泌物等异常，给药组体重与对照组比较无统计学差异，肉眼检查各组小鼠主要脏器均未发现明显异常；从表4可以看出炒黄川楝子水提取物组与对照组脏器系数比较无显著性差异。测得炒黄川楝子水提取物的最大耐受量为≥38.0g·kg-1，脏器系数见表4。

2.4 炒黄川楝子70%乙醇提取物LD50试验

动物在给药后出现趴伏，少动，对外界刺激的反应降低，行动迟缓，严重者抽搐，解剖死亡小鼠见呼吸先于心脏搏动停止。多数动物在给药后1h内发生死亡。由Bliss法计算得LD50为67.75g·kg-1，回归方程y（Probit）=-7.93+7.06Log（D），LD50（Feiller校正）95%的可信限为57.86-77.57g·kg-1，LD5为39.63g·kg-1，LD95为115.82g·kg-1，见表5、6。

3 讨论

川楝子是我国传统中药材，具有来源广泛、价格低廉、作用多样化且疗效确切等优点。主要有镇痛抗炎作用以及抗生育作用［1，2］。《名医别录》谓川楝子有小毒，但临床应用仍很广泛，现代对其毒性的研究较少。有临床研究表明消化道的不良反应大多在服药后1～2h内出现，表现为胃肠道刺激症状，并可发生急性中毒性肝炎，出现转氨酶升高［3］。成年果子狸饲喂一定量的川楝子后，在短时间内即可引起中毒，主要表现为胃肠道刺激，肌肉震颤、四肢抽搐、肌无力等中枢神经系统症状，伴有肝脏为主的其他内脏器官出血［4］。

本研究测得生川楝子和炒黄川楝子70%乙醇提取物LD50分别80.92和67.75原生药g·kg-1；生川楝子及炒黄川楝子水提物最大耐受量≥44.80 及38.0 原生药g·kg-1。说明生川楝子与炒黄川楝子70%乙醇提取物的急性毒性作用相似，炒黄炮制川楝子并没有降低其急性毒性作用。

表1 生川楝子水提取物对小鼠脏器系数的影响（，n＝10）