晚期非小细胞肺癌组织中ERCC1及RRM1的表达与预后的关系

侯小明，元淑巧，胡俊平，赵 达，冯 颖，令晓玲

兰州大学第一医院，甘肃兰州 730000 1肿瘤内科；2病理科

肺癌是目前死亡率较高的恶性肿瘤之一，确诊的肺癌中约有80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。研究表明，肿瘤细胞DNA修复相关基因的异常表达与肺癌耐药性密切相关。DNA切除修复交叉互补基因1(excision repair crosscomplementation group1，ERCC1)和核苷酸还原酶M1(ribonudeotide reductuse M1，RRM1)是DNA修复密切相关的两个基因，其在晚期非小细胞肺癌中的高表达与抗癌药物的耐药性相关，从而不同程度影响患者的生存期。本文回顾性研究60例NSCLC组织中ERCC1和RRM1蛋白的表达及其与预后的关系。

资料和方法

1 资料 收集2009年6月-2011年6月在兰州大学第一医院确诊并有完整随访资料的晚期NSCLC患者60例，其中男性43例，女性17例；年龄32~72岁，平均52岁。60例中，鳞癌28例，细支气管肺泡癌11例，腺癌19例，腺鳞癌2例；根据TNM分期标准所有患者均为Ⅳ期，其中肝脏转移38例，骨转移22例；所有病例均经病理确诊。

2 主要试剂 DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；ERCC1及RRM1单克隆抗体、既用型免疫组化SP试剂盒、PBS缓冲液及枸橼酸盐抗原修复缓冲液均购自福州迈新生物技术有限公司。

3 方法 应用免疫组织化学法检测患者支气管镜或经皮穿刺活检组织标本中ERCC1及RRM1的表达情况；每例选取肿瘤组织4张4μm厚的切片行HE和免疫组化SP法染色。染色步骤严格按试剂盒说明进行。以已知阳性切片作阳性对照，以PBS液置换一抗作阴性对照。用低倍和高倍镜观察全片，ERCC1主要为细胞核染色，RRM1为细胞浆及细胞核染色；阳性表达为黄色、棕色、棕褐色颗粒。60例均行GP(吉西他滨+顺铂)方案化疗4~6周期，化疗结束后进行严格随访，统计1年生存率；截止2012年8月，随访时间为1~3年。

4 统计学方法 数据应用SPSS10.0统计软件包进行统计学处理，组间比较应用χ2检验和Fishers精确概率法，组间的关系用Spearman等级相关分析；生存分析采用Cox回归法；以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 ERCC1、RRM1在晚期肺癌组织中的表达ERCC1在晚期NSCLC组织中均为细胞核表达(图1)，阳性率为45.00%(27/60)；RRM1在晚期NSCLC组织中为细胞浆及细胞核表达(图2)。阳性率为53.33%(32/60)。

2 ERCC1和RRM1的表达与临床病理参数的关系NSCLC组织中ERCC1和RRM1的表达与患者的年龄、性别、组织学类型和淋巴结转移之间无明显相关性(P＞0.05)，见表1。

3 ERCC1、RRM1在NSCLC组织中表达的相互关系应用Spearman相关性分析显示，ERCC1和RRMI的表达呈正相关，Spearman相关系数为0.251，P=0.035，差异具有统计学意义。

4 ERCC1和RRM1的表达与生存率的关系 60例晚期非小细胞肺癌患者，随访时间为1~3年，生存期3~27月，中位生存期13月。应用Cox回归模型分析， ERCC1和RRM1表达阳性皆是独立危险因素。ERCC1及RRM1阳性表达者1年生存率分别为25.93%及28.13%，阴性表达者1年生存率分别为36.36%及42.86%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

图1 IHC， ERCC1在肺癌中的表达 SP×400

图2 IHC， RRM1在肺癌中的表达 SP×400

表1 晚期非小细胞肺癌ERCC1和RRM1表达与临床病理参数的关系

表2 非小细胞肺癌组织中ERCC1及RRM1的Cox回归分析

讨 论

以铂类药物为基础的化疗在非小细胞肺癌化疗中的地位无可置疑，其抗肿瘤作用主要是通过形成铂-DNA加合物，导致DNA结构发生改变，进而影响DNA的复制、转录及翻译，而达到抗肿瘤作用。DNA基因修复主要是由和链间交联完成的，而ERCC1是其中一个关键因素[1-2]，是参与NER过程并与顺铂耐药紧密相关的关键因子[3]。有研究表明，在早期NSCLC患者中ERCC1阳性表达者生存期明显延长；而在接受铂类化疗的晚期NSCLC患者中，ERCC1阴性表达者生存期较阳性表达者明显延长[4]。ERCC1表达与化疗疗效呈负相关，这与ERCC1在DNA修复过程中的作用相关，更重要的是ERCC1能清除顺铂诱导的DNA络合物[5]，从而降低其疗效。我们发现，在晚期NSCLC组织中，ERCC1表达阳性率为45.00%(27/60)，与相关报道相近[6]；1年生存率为25.93%，阴性表达者1年生存率为36.36%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

吉西他滨作用靶点之一的核苷酸还原酶(ribonucleotide reductase，RR)是DNA合成通路中的限速酶，它能使二磷酸核苷酸转化为二磷酸脱氧核苷酸，后者是DNA合成和修复所必不可少的原料，其包括RRM1和RRM2两个亚单位。有研究报道，当吉西他滨作用于肿瘤细胞时，RRM1的表达阳性会使肿瘤细胞对吉西他滨的耐药性增加，患者预后较差。Ceppi等[7]对70例晚期NSCLC患者进行回顾性研究，证实在RRM1低表达组中位生存期明显延长。也有不同的报道，廖日强等[8]研究显示，RRM1的表达不能作为NSCLC的预后因子，研究仅定位在对化疗疗效的预测上。

本研究结果表明，在晚期NSCLC组织中RRM1表达阳性率为53.33%(32/60)，1年生存率为28.57%，阴性表达者1年生存率为41.67%，差异有统计学意义(P＜0.05)。Cox回归生存分析显示：对于晚期非小细胞肺癌患者，ERCC1及RRM1均是独立危险因素；因此我们认为，晚期NSCLC组织中ERCC1及RRM1的表达是具有预后评估意义的指标。在本研究中，我们也发现，ERCC1和RRM1的表达呈正相关，其具体机制尚不明确。今后，还须进行多中心、大样本研究，以进一步验证ERCC1及RRM1在晚期非小细胞肺癌患者预后中的意义。

1 Fisher LA， Bessho M， Bessho T. Processing of a psoralen DNA interstrand cross-link by XPF-ERCC1 complex in vitro［J］. J Biol Chem， 2008， 283（3）： 1275-1281.

2 Bergstralh DT， Sekelsky J. Interstrand crosslink repair： can XPFERCC1 be let off the hook?［J］. Trends Genet， 2008， 24（2）：70-76.

3 Gazdar AF. DNA repair and survival in lung cancer--the two faces of Janus［J］. N Engl J Med， 2007， 356（8）： 771-773.

4 Gandara DR， Kawaguchi T， Crowley J， et al. Japanese-US common-arm analysis of paclitaxel plus carboplatin in advanced non-small-cell lung Cancer： a model for assessing population-related pharmacogenomics［J］. J Clin Oncol， 2009， 27（21）： 3540-3546.

5 Ota S， Ishii G， Goto K， et al. Immunohistochemical expression of BCRP and ERCC1 in biopsy specimen predicts survival in advanced non-small-cell lung Cancer treated with cisplatin-based chemotherapy［J］. Lung Cancer， 2009， 64（1）： 98-104.

6 Azuma K， Sasada T， Kawahara A， et al. Expression of ERCC1 and class III beta-tubulin in non-small cell lung Cancer patients treated with carboplatin and paclitaxel［J］. Lung Cancer， 2009， 64（3）：326-333.

7 Ceppi P， Volante M， Novello S， et al. ERCC1 and RRM1 gene expressions but not EGFR are predictive of shorter survival in advanced non-small-cell lung cancer treated with cisplatin and gemcitabine［J］. Ann Oncol， 2006， 17（12）：1818-1825.

8 廖日强， 林嘉颖， 乔贵宾， 等. 非小细胞肺癌组织芯片中RRM1表达和预后因子分析［J］.中国肺癌杂志， 2006， 9（5）：423-427.