几种简易的《医学微生物学》替代实验介绍

江苏 王彩玉

《医学微生物学》是一门重要的基础医学课程，《医学微生物学》实验教学是整门课程中相当重要的组成部分。实验教学中涉及的实验标本多为活的细菌，由于细菌毒力强、易变异、易污染、培养结果出现慢，准备1次实验往往要花费几天时间，而一般卫生类高职校实验室设备及实验室人员配备不足，所以给实验准备带来了一定困难。笔者针对微生物实验以示教为主的特点，根据多年实验准备的经验，发现部分实验可以用替代的方法来解决开设实验时示教标本难取的困难，介绍如下。

1 铜绿假单胞菌色素观察

由于能产生典型蓝绿色色素的铜绿假单胞菌在临床上并不多见，实验时常取不到新鲜菌种。此时，可以根据铜绿假单胞菌产生水溶性蓝绿色色素的特点，用普通琼脂培养基溶化后加入绿色水彩粉混匀制成固体斜面，然后在斜面上涂上大肠杆菌（取材方便）菌苔，稍加培养即可达到实验效果。

2 硫化氢试验

真正的硫化氢试验在培养基配制和菌种来源上都存在一定困难。可以改用高层双糖铁培养基代替醋酸铅培养基，乙型副伤寒沙门菌在双糖铁培养基上产生的黑色沉淀的结果，可用带7号针头的注射器吸取少量黑墨水垂直刺入尚未完全凝固的培养基底部缓缓注入，使之呈现黑色穿刺线，然后在上面接种少量葡萄球菌，培养24小时即可达到与硫化氢试验相似的实验效果。

3 糖发酵试验

糖发酵试验包括葡萄糖发酵试验、麦芽糖发酵试验、甘露醇发酵试验、蔗糖发酵试验、乳糖发酵试验。实验时要将细菌接种于糖发酵管内，根据细菌分解糖的分解能力不同用于鉴别细菌。原理是细菌如能分解糖，则产生酸性物质、糖发酵管内酸碱度下降，使糖发酵管中溴甲酚紫从紫色变成黄色，若分解糖后产生气体，则在糖发酵管的小套管内出现小气泡。如果没时间准备各种糖发酵示教管，可以利用指示剂因酸碱度不同而呈现不同颜色的特点进行直接显色，即直接在糖发酵管内滴加稀盐酸，使酸碱度下降，使糖发酵管中溴甲酚紫从紫色变成黄色，小套管中气泡可根据实验需要排尽或放入，为了求得实验的真实性，在调试颜色前可以在肉汤管内接种葡萄球菌并培养24小时，以显示液体混浊。

4 吞噬细胞的吞噬作用

这实验准备要将细菌注入小白鼠腹腔，再抽取腹腔液涂片、镜检。此实验困难的主要问题是小白鼠腹腔液难以吸取，且观察到的吞噬效果较差。如果直接将葡萄球菌液加入人血观察，效果也很好。具体方法是在实验前到医院取2ml新鲜抗凝血，加入含菌量适中的葡萄球菌液1ml，混匀后置37℃30分钟，取出后作血推片，自然干燥后瑞氏染色或用甲、乙快速染色液染色，干后镜检。

5 豚鼠过敏试验

此实验在实验前需先将马血清注入豚鼠体内，使之致敏，实验时再在豚鼠心脏内注入马血清使之发敏。实验准备过程复杂、且需一定时间，一旦实验失败，难以补救。为了应急处理，可以在实验演示时直接用组织胺代替马血清注入豚鼠心脏，约1分钟后即出现与Ⅰ型超敏反应相同的现象。

6 抗酸染色法

做这项实验要取结核病人的痰标本，目前阳性标本难以取到，即使取到也易造成污染。为了提高实验效果、减少对学生感染的危险，可用卡介苗代替结核病人的痰标本，在实验时取3支卡介苗液加入3m l肉汤管内放入温箱加温2小时，取出后充分吹打混匀，然后涂片、染色、镜检。

7 玻片凝集试验

按要求玻片凝集试验的实验材料为伤寒沙门菌及相应的诊断血清，如果让学生自己使用这些材料进行实验易造成感染，而且要耗去较多的伤寒诊断血清。可以用金黄色葡萄球菌与血浆发生凝固的现象来代替，这样既安全又能明显显示凝集现象。同理，反向间接凝集试验所用的乙型肝炎阳性血清可改用新鲜的胎盘血清，这样取材既方便又不易造成污染。

8 血凝与血凝抑制试验

按要求做这项病毒实验较困难，可根据病毒的血凝原理直接用鸡瘟病毒悬液（市售鸡瘟V粉剂+5mlNS）作倍比稀释后加0.5%鸡红细胞，这样得出的结果与用病毒培养的尿囊提出液做的结果一样。在做血凝抑制实验时，方法更简单，只要把做血凝试验的管号倒排就是血凝抑制结果。当然，这些都只能在准备室里做好后给学生看，而且血凝的时间要掌握恰当。

综上所述，用因地制宜、以简代繁的方法代替部分微生物学实验，不仅可以克服实验材料不足、设备简陋的困难，而且可以节约时间，节省实验费用；同时还可以用于预实验失败时的应急处理。不过需要强调的是为了让学生有完整系统的概念，在进行示教操作时一定要严格按照实验操作规范要求进行，将替代的标本巧妙地溶入实验过程，以起到较好的实验效果。