术前筛查HBeAg阴性HBV感染者检测乙肝大蛋白的意义

史兵伟，田晓静，虞丽娟

(常州市中医院检验科，江苏常州213003)

术前筛查HBeAg阴性HBV感染者检测乙肝大蛋白的意义

史兵伟，田晓静，虞丽娟

(常州市中医院检验科，江苏常州213003)

目的了解肝功能正常、HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者乙肝大蛋白(HBV-LP)阳性情况，评判血清HBV-LP检测在这类乙型肝炎患者中的意义。方法使用ELISA法检测180例HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者HBV-LP、乙肝前S1(HBVpreS1)，同时采用实时定量PCR法做HBV DNA水平检测。结果180份HBeAg阴性HBV感染血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA检测阳性率分别为21.1%、34.4%和32.7%，χ2检验显示三组检测阳性率差异有统计学意义(χ2=9.145 7，P=0.010 3)，用Scheffe法做率的两两比较显示：PreS1-Ag检测阳性率明显低于HBV-LP和HBV DNA(P<0.05)，而HBV-LP和HBV DNA检测阳性率差异无统计学意义(P> 0.05)。HBV-LP和HBV DNA配对检测显示结果差异无统计学意义(χ2=0.173 9，P=0.676 7)，同时相关性分析示良好相关性(χ2=95.655，P=0.000 0，r=0.721 7)。49例HBV DNAcopies/ml常用对数值与HBV-LP定量OD值的散点图显示正相关(r=0.6192)。结论对术前筛查HBeAg阴性乙型肝炎携带者，HBV-LP在反应病毒复制方面是一个优于HBVpreS1检测的良好指标，与HBV DNA检测有良好的相关性，在不能开展HBV DNA检测的基层单位可作为评价乙型肝炎传染性的一种替代与补充。

乙型肝炎病毒；乙肝大蛋白(HBV-LP)；乙肝DNA(HBV-DNA)；乙肝前S1抗原(PreS1-Ag)

乙型肝炎病毒(HBV)是导致人类肝脏的感染和炎症的常见原因，目前HBeAg阴性活动期肝炎增多，HBV变异株增加，HBV的突变率增高[1]。为了预防HBV医源性感染，乙肝两对半及其他相关标志物已作为医院筛查乙肝携带者的重要手段，同时判断其传染性也成为大家关心的问题，特别是手术和肾透患者尤其如此。以前常通过PCR法检测患者体内乙肝病毒DNA(HBV DNA)的存在情况，判断其传染性，这种检测不太适合临床大批量筛查。乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)是HBV的包膜蛋白，包括HBsAg与前S蛋白(PreS1蛋白和PreS2蛋白)。它是监测HBV感染者体内病毒复制活跃程度新的血清学指标[2-3]。许多学者都把HBV-LP检测用于了解乙肝患者体内DNA复制情况及治疗效果观察，而对肝功能正常HBeAg阴性的HBV携带人群却缺乏研究。本文将探讨术前筛查患者中这类HBV携带患者HBV-LP阳性情况，以了解血清HBV-LP检测在术前筛查患者和HBeAg阴性乙型肝炎患者中的意义，并与血清HBV DNA和Pre-S1蛋白水平作比较，评价其作为反映HBV复制新的血清学指标的可能性。

1 材料与方法

1.1 实验对象选取我院2011年1~12月术前筛查HBeAg阴性HBV感染者血清标本180份，于-80℃冻存。其中男性106例，女性74例，年龄15~ 75岁，平均(48.5±25.6)岁。

1.2 实验方法HBV-LP酶联免疫试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供，PreS1-Ag酶联免疫试剂盒购自夏门英科新创生物技术有限公司，结果采用MODEL-680酶标仪判读。HBV DNA实时荧光聚合酶链反应(PCR)定量检测，试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司。结果判定：copies＞1×103为阳性。上述操作均严格按试剂盒操作说明进行。

1.3 统计学方法采用PEMS3.1软件进行统计学分析。PreS1-Ag、HBV LP和HBV DNA的检测阳性率比较采用χ2检验，阳性率的两两比较采用Scheffe法，HBV-DNA和HBV-LP阳性符合率采用配对计数资料相关性分析，HBV DNAcopies/ml常用对数值和HBV-LP OD值比较采用计量资料相关性检验。检验水准α均为0.05。

2 结果

2.1 血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA检测结果比较180例HBeAg阴性HBV感染者血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA的检测阳性率比较见表1。经行×列表卡方检验显示，三组检测阳性率差异有统计学意义(χ2=9.1457，P=0.0103)；用Scheffe法做率的两两比较显示，PreS1-Ag检测阳性率明显低于HBV-LP和HBV-DNA(P<0.05)，而HBV-LP和HBV DNA阳性检出率则差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 180例HBeAg阴性HBV感染者血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBV DNA检测结果比较

2.2 HBV-DNA和HBV-LP配对检测结果比较180例HBeAg阴性HBV感染者血清中HBV-DNA和HBV-LP配对检测情况见表2。HBV-LP和HBV DNA配对检测结果显示差异无统计学意义(χ2= 0.173 9，P=0.676 7)，同时相关性分析显示两者具有良好相关性(χ2=95.655，P=0.000 0，r=0.721 7)。

表2 180例HBeAg阴性HBV感染者血清中HBV-DNA和HBV-LP配对检测结果（例）

2.3 HBV DNA和HBV-LP OD值相关性在49例HBV DNA和HBV-LP同时阳性的病例中，比较HBV DNA copies/ml常用对数值与HBV-LP定量OD值的相关关系，具体数据见表3。依据HBV DNA检测拷贝数，进行常用对数处理，与HBV-LP OD值做散点图，见图1。

表3 HBV DNA拷贝数常用对数值和HBV-LP OD值的测定结果

相关性检验结果显示，两者具有良好的正相关(r=0.619 2)，表明随着HBV DNA copies/ml的增加，HBV-LP的OD值也增加，同时由散点图也可发现，HBeAg阴性乙型肝炎携带患者HBV-LP OD值一般不太高。

3 讨论

乙肝病毒是有膜的嗜肝DNA病毒，其基因组包含在带有病毒编码的聚合酶的核衣壳中，其外膜还带有来自于宿主的脂膜成分，脂膜中含有三种病毒表面蛋白[4]：大(L)蛋白、中等(M)蛋白以及小的(S)蛋白。其中大蛋白包含有PreS1，PreS2和S区域，它是从表面蛋白开放阅读框的第一个启动密码外翻译得来；它能够形成两种不同的跨膜拓扑结构，允许末端的PreS结构域暴露于腔体内或内质网膜一侧[1]。纤维体和病毒粒子包膜富含大蛋白[4]，大蛋白是一个具有多效性的转录激活子，对于病毒的组装十分重要[5]。大蛋白一般不能单独产生，它只能与中、小蛋白共分泌，并且产量很小。但大蛋白过量表达以及随后的胞内颗粒滞留，可通过由内质网压力诱导的一种胞内信号途径来激活S启动子；这种激活反过来会增加中小表面蛋白的合成，这样，使亚病毒颗粒和病毒颗粒得以分泌[6]。所有这些均可能使得大蛋白和HBV的传染性密切相关，这也一定程度上体现了检测大蛋白的重要性，同时也部分解决了临床缺少判断乙肝病毒复制的血清学指标的矛盾。

本研究结果发现，在HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者中，血清HBV-LP水平与HBV DNA拷贝数的变化一致，具有很好的相关性，相关系数为0.632 1。两者的阳性符合率为83.1%，明显高于Pre-S1蛋白(50.8%)。而在本组HBeAg阴性的术前筛查HBV携带患者中，HBV-LP与HBV DNA阳性率也具有一致性，说明利用针对HBV-LP前S蛋白的构象表位制备的单抗检测血清HBV-LP，与依据Pre-S1蛋白线性表位制备的单克隆抗体相比，可以避免由于前S蛋白具有复杂的拓扑结构而带来的表位掩盖现象，从而能更好地反映HBV病毒颗粒和亚病毒在血清中的出现情况，是判断HBV复制较好的血清学指标，在HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者中具有一定的临床应用价值。本组的研究结果中HBV LP水平与HBV DNA拷贝数的相关性明显低于以前的报道[9]，不过与郝建华等[10]的报道相似。可能本组纳入的病例为术前筛查患者而并非以前报道的乙型肝炎患者，这一结果似乎与本组患者的病毒活动性低于乙型肝炎患者有关。另外，本研究结果发现在，HBV DNA阴性患者的血清中，仍有9.92%的HBV-LP阳性，同时我们发现这些患者大蛋白含量均较低，这与孙颖等[11]在治疗乙型肝炎中的发现一致。其原因可能有：HBeAg阴性HBV感染者血清HBV DNA水平较低，而HBV DNA检测假阴性；HBV基因具有高变异性[1]，从而导致PCR漏检，而HBV-LP血清学检测受基因变异的影响较少；抗病毒治疗后，导致富含核酸的病毒颗粒减少或清除的同时，却可能还有亚病毒颗粒的残存。而这种包含宿主细胞来源的脂质和病毒衣壳蛋白(含有大蛋白的Pre-S区域)组成的亚病毒颗粒中虽然缺乏核酸，但却可以通过大蛋白的反式激活作用触发病毒复制和基因表达[12]。

综上所述，以大蛋白前S蛋白构象表位制备的单克隆抗体检测乙型肝炎患者血清中HBV LP水平，能更好地反映HBV的复制情况，与HBV DNA水平有高度相关性，并能对HBV DNA做有益补充，是判断HBV复制新的血清学指标。另外，ELISA检测方法具有经济、直接、简便和利于批量检测的特点，特别有利于在我国尚不具备HBV DNA定量检测条件的基层医院推广应用，从而提高临床手术的安全性，一定程度上防止HBV院内感染的发生，适合临床大批量术前患者筛查使用。

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[12]Michael B,Stefan M,Sylvie C,et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles[J].J Virol,1998, 72(2):1462-1468.

Clinical significance of detecting serum hepatitis B virus large surface protein in preoperative screening in patients with HBeAg-negative hepatitis B infection.

SHI Bing-wei,Tian Xiao-jing,YU Li-juan.Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changzhou 213003,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo detect serum hepatitis B virus large surface protein(HBV-LP)in preoperative screening in subjects with normal liver function and patients with HBeAg-negative hepatitis B infection,and to evaluate the significance of serum HBV-LP in the patients with hepatitis B.MethodsHBV-LP,hepatitis B S1 (HBVpreS1)were measured by ELISA,and HBV DNA levels were detected by fluorescence quantitative PCR in 180 HBeAg-negative HBV patients in preoperative screening.ResultsIn the 180 patients,the positive rates of PreS1-Ag,HBV-LP and HBV DNA were 21.1%,34.4%and 32.7%,respectively.χ2test showed that the positive rates of three groups had significant difference(χ2=9.145 7,P=0.010 3).Scheffe test showed that the positive rate of PreS1-Ag detection was significantly lower than that of HBV-LP and HBV DNA(P<0.05),while no significant difference was found in the positive rates of HBV-LP and HBV DNA detection(P>0.05).HBV-LP and HBV DNA showed no significant differences in detection results(χ2=0.173 9,P=0.676 7).At the same time,correlation analysis showed a good correlation between HBV-LP and HBV DNA detection(χ2=95.655,P=0.0000,r=0.721 7).The scatter plot of 49 cases of HBV DNA copy number per ml(copies/ml)commonly used numerical and quantitative HBV-LP OD showed a positive correlation(r=0.6192).ConclusionHBV-LP,superior to HBVpreS1,is a good indicator in response to viral replication.There was a good correlation between HBV-LP and HBV-DNA detection,which can be used as a substitute and supplement of hepatitis B infection in hospital.

Hepatitis B virus(HBV);HBV large surface protein(HBV-LP);HBV DNA;PreS1-Ag

R512.6+2

A

1003—6350(2013)16—2412—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.16.0994

2013-01-17)

史兵伟。E-mail：SBW8133211@163.com