温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内HSP70表达的影响

朱量，程书榜，秦颖，文剑锋，黄丽君，郑昶

(深圳市第二人民医院胃肠外科，广东深圳518035)

·论著·

温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内HSP70表达的影响

朱量，程书榜，秦颖，文剑锋，黄丽君，郑昶

(深圳市第二人民医院胃肠外科，广东深圳518035)

目的探讨温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内热休克蛋白(HSP70)表达的影响。方法选取清洁级SD大鼠30只，将其作为临床研究对象，并随机分为两组，每组SD大鼠15只，分别为急性胰腺炎模型组及42℃温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组。比较两组大鼠术后2 h和6 h所检测的HSP70、IL-8、TNF、血淀粉酶水平，观察其病理切片及评分等相关指标。结果与急性胰腺炎模型组比较，42℃温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组术后2 h和6 h所检测的IL-8、TNF、血淀粉酶及病理评分均明显减少，而HSP70阳性率明显提高，其差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论温生理盐水腹腔灌洗可以诱导大鼠胰腺HSP70的大量表达，从而抑制炎症因子的表达，减轻炎症因子对胰腺的损伤，并使全身炎症反应减弱，起到保护机体的作用，值得在临床推广。

温生理盐水；腹腔灌洗；胰腺；HSP70

热休克蛋白(HSP70)是一种具有高度保守结构的蛋白质，它广泛存在于各种生物机体内，生理条件下少量表达用于维持机体内环境的稳定及调节体内多种生理功能[1]。然而在机体受到严重伤害刺激时，则可大量表达。热休克蛋白在局部炎症反应中发挥着重要作用，可抑制炎症介质IL-6、IL-8及TNF的高表达和释放[2]。而临床大量资料表明，温生理盐水腹腔灌洗对热休克蛋白的表达有重要影响。为此，笔者探讨温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内HSP70表达情况的影响，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选取我院从动物实验中心获取的清洁级SD大鼠30只作为实验对象，SD大鼠体重200~240 g，平均周龄9~11周，雌雄不限，将其随机分为两组各15只。急性胰腺炎模型组采用胰胆管注射牛黄胆酸钠的方法制备，温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组需要在急性胰腺炎模型的基础上，再用温生理盐水进行腹腔灌洗。

1.2 方法

1.2.1 制备急性胰腺炎模型通过胰胆管注射牛黄胆酸钠。手术前需禁食24 h，用氯酮进行腹腔麻醉，然后消毒、铺巾，于上腹正中位置作无菌切口开腹，找到胰导管，用加工的皮试针头经肠壁潜行穿刺胰胆管，并于近肝门处用动脉夹暂时阻断肝总管，注入牛胆酸钠，然后打开动脉夹，指压穿刺部位，观察有无泄漏现象，待观察见胰腺出现充血水肿或被膜下有散在出血标志时急性胰腺炎模型制作成功。

1.2.2 制备42℃温生理盐水腹腔灌洗模型[3]腹腔注射麻醉药氯胺酮后，在保持无菌的条件下，于上腹正中线做一小切口，然后将输入管置入腹腔内，之后又在下腹正中线做一小切口，将输出管置于腹腔，并快速的输入42℃的温生理盐水，不断调节输出管使腹部能够保持稍微隆起，维持30 min后关闭腹腔。

1.2.3 检测实验所需的各项观察指标急性胰腺炎模型制备成功后，于术后2 h及6 h分别处死每组动物15只/次，然后采血检测IL-8、TNF、血淀粉酶，并取胰腺病理组织标本做病理评分，用免疫组化定量测量HSP70的含量。

1.3 观察指标及疗效分析观察并比较术后2 h和6 h所检测的IL-8、TNF、血淀粉酶、免疫组化所测得HSP70的阳性率及病理评分，病理评分采用APACHEII病理评分系统[4]：APACHEII总分=急性生理分+年龄分+既往健康分，其中2~8分为重型Ⅰ急性胰腺炎，9~14分为重型Ⅱ急性胰腺炎，15~27为重型Ⅲ急性胰腺炎。

1.4 统计学方法所得数据采用SPSS15.0软件进行分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组大鼠术后2 h、6 h血淀粉酶含量及病理评分情况两组术后2 h的淀粉酶含量及病理评分相接近(P>0.05)，而两组术后6 h血淀粉酶和病理评分都明显提高，且温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组的血淀粉酶含量明显低于急性胰腺炎组，病理评分也显著降低，其差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 两组中大鼠胰腺表达的热休克蛋白的情况术后2 h及术后6 h急性胰腺炎组中大鼠胰腺热休克蛋白的表达阳性率均要高于温生理盐水灌洗急性胰腺炎组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3 两组术后2 h、6 h血中IL-8、TNF的测定值情况术后2 h两组实验大鼠体内的IL-8及TNF含量相接近(P>0.05)，而术后6 h急性胰腺炎组大鼠体内的IL-8、TNF含量均明显高于温生理盐水灌洗组的含量，其差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

组别淀粉酶(U/L)病理评分(分)急性胰腺炎组(n=15)温生理盐水灌洗急性胰腺炎组(n=15) t值P值术后2 h 3257±415 2580±310 0.973 >0.05术后6 h 8600±645 5316±452 13.049 <0.05术后2 h 1.9±0.87 1.8±1.14 0.874 >0.05术后6 h 6.4±1.05 3.1±1.07 4.038 <0.05

表2 两组大鼠胰腺表达的热休克蛋白情况(例)

表3 两组大鼠术后2h和6h血中IL-8和TNF的测定值

表3 两组大鼠术后2h和6h血中IL-8和TNF的测定值

组别IL-8(ng/ml)TNF(ng/ml)急性胰腺炎组(n=15)温生理盐水灌洗急性胰腺炎组(n=15) t值P值术后2 h 0.080±0.007 0.072±0.005 0.172 >0.05术后6 h 0.300±0.017 0.152±0.011 2.475 <0.05术后2 h 0.462±0.050 0.420±0.170 0.350 >0.05术后6 h 1.360±0.380 0.800±0.362 2.741 <0.05

3 讨论

急性胰腺炎是一种起病急、死亡率高且常伴发严重并发症的凶险疾病。许多研究表明，急性胰腺炎早期出现异常增多的胰酶，它不仅可以导致胰腺细胞的损伤，同时也会促发胰腺局部组织发生炎症反应，使胰腺内炎症细胞被高度激活，表达释放出各种炎症介质来参与炎症级联反应，导致全身性炎症反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome，SIRS)和多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)的发生[5-6]。

炎症介质IL-6、IL-8和TNF由单核巨噬细胞、内皮细胞以及其他一些免疫细胞表达，在机体内可参与非特异性及特异性免疫反应，是心肌抑制因子的组成部分[7-8]。在正常生理条件下，HSP70仅少量表达，当机体受到严重伤害刺激时，热休克蛋白大量表达，可抑制炎症介质的高表达和释放，在局部炎症反应中发挥着重要作用[9-10]。因此如何在急性胰腺炎发作时抑制炎症因子的产生及阻断机体内新生成炎症因子的作用，成为临床治疗急性胰腺炎的关键步骤。为此，我院就温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内HSP70的表达是否有影响进行了研究，发现急性胰腺炎组大鼠体内HSP70的阳性率明显低于42℃温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组的大鼠，而其血淀粉酶含量和病理评分则要明显高于温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组的大鼠，炎症介质IL-6、IL-8及TNF的含量也远远超过温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组的大鼠。

综上所述，温生理盐水腹腔灌洗可以诱导大鼠胰腺HSP70的大量表达，从而抑制炎症因子的表达，减轻炎症因子对胰腺的损伤，并使全身炎症反应减弱，起到保护机体的作用，在临床治疗急性胰腺炎时具有重要意义。

[1]孟科,刘庆森,窦艳.高渗盐水腹腔灌洗对热休克蛋白70表达及雨蛙素所致大鼠急性胰腺炎的影响[J].中华内科杂志,2012, 51(7):559-561.

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[3]李锐,李润玖,张彧.热休克蛋白70在大鼠肾缺血/再灌注损伤中的表达及血必净注射液干预作用的研究[J].中国中西医结合急救杂志,2008,15(5):293-295.

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[6]肇杰,何志义,陈玉,等.颈内动脉注射质粒pLXSN-bcl-2对大鼠局灶性脑缺血后热休克蛋白70表达的影响[J].中国医科大学学报,2008,37(3):319-328.

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[10]周从阳,张志坚,熊华威.热休克蛋白70在急性百草枯中毒大鼠肺脏中的表达[J].重庆医学,2011,40(9):886-890.

Influence of peritoneal lavage with warm saline on HSP70 expression in rat pancreas.

ZHU Liang,CHENG Shu-bang,QIN Ying,WEN Jian-feng,HUANG Li-jun,ZHENG Chang.Department of Gastrointestinal Surgery,the Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518035,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the influence of peritoneal lavage with warm saline on HSP70 expression in rat pancreas.MethodsThirty clean SD rats were chosen as the research subjects,which were equally and randomly divided into two groups.Group B(n=15,lavage acute pancreatitis group)applied peritoneal lavage with 42℃warm saline based on Group A(n=15,acute pancreatitis model group).2 h and 6 h after operation,the levels of HSP70,IL-8,TNF,hemodlastase were compared between the two groups,and the mark of pathological section and the scores were observed.ResultsCompared with group A,the levels of IL-8,TNF,hemodlastase,and pathological scores in group B were all significantly decreased 2 h and 6 h after operation,and the positive rate of HSP70 was increased significantly.The differences were all statistically significant(P<0.05).ConclusionPeritoneal lavage with warm saline can induces the high expression of HSP70,so as to depress the expression of inflammatory factor and alleviate the damage of inflammatory factor on pancreas,which also decrease the reaction of systemic inflammatory and protect the body.It is valuable to be applied for clinic.

Warm saline;Peritoneal lavage;Pancreas;HSP70

R-332

A

1003—6350（2013）16—2341—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.16.0969

2013-04-11)

广东省科技计划项目(编号：2011B031800355)

程书榜。E-mail：zl55@163.com