青白通痹胶囊的质量控制

李 芳 张军茹 郭 妮 冯一凡 王卫锋 陕西省中医药研究院（西安710003）

青白通痹胶囊由青风藤、白芍、甘草等药物组成，具有消肿通痹止痛，舒筋活络之功效，用于风湿、痛风、骨关节病等所致的关节肿胀、僵硬、疼痛、屈伸不利。该药是在陕西省中医医院内分泌科多年临床经验方的基础上开发而成。为了有效控制青白通痹胶囊的质量，本实验采用薄层色谱法对处方中青风藤、白芍进行了定性鉴别；采用反相高效液相色谱法对青风藤中的青藤碱进行了含量测定，并对其方法学进行考察，旨在为该产品的质量控制提供客观的定性定量评价方法。

1 仪器与试药 1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪；C18色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、KH－300DE型数控超声清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）、BP211D 型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）、939薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；UV－8三用紫外分析仪（无锡科达仪器厂）；超纯水器（Millipore）。

1.2 试药 青风藤对照药材（批号121055－200302）；白芍对照药材（批号121049－200502；青藤碱对照品（批号：0774－200206）；芍药苷对照品（批号：110736－200833）均购自中国药品生物制品检定所。

硅胶G（薄层层析用，化学纯）购自青岛海洋化工厂；色谱用水均为超纯水；乙腈为HPLC 级试剂（美国Fisher scintific），其它试剂均为分析纯（天津富宇化学试剂厂）。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别［1－3］2.1.1 青风藤的薄层鉴别：取本品内容物约1.5g研细，加乙醇20 mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取青风藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取青藤碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。另外，同法制备缺青风藤的阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲醇－浓氨水－水（8：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。结果供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

2.1.2 白芍的薄层鉴别：取本品内容物约1.5g，研细，加50%的甲醇50mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL 超声振荡使溶解，用乙醚萃取两次，每次30mL，取水层，用水饱和的正丁醇萃取两次，每次30mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1g，同法制备，作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL 含1mg的溶液，作为对照品溶液。另外，同法制成缺失白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40：5：10：0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸液，在105℃加热至斑点清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

2.2 含量测定［4－8］2.2.1 色谱条件：色谱柱：Diamosil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－0.78%磷酸二氢钠（12：88）；检测波长为262nm；流速为1.0mL·min－1；柱温：室温；进样量：10μL。理论塔板数按青藤碱峰计算不低于1500，样品中青藤碱与其他成分分离度大于1.5，阴性对照无干扰。色谱图见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备：取青藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含0.15mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备：取本品内容物约0.4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40KHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，用0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

图1 青藤碱对照品及样品色谱图

2.2.4 标准曲线：取浓度为0.15792 mg·mL－1的青藤碱对照品溶液2、4、6、8、10、12uL，按2.2.1项下进行测定，以峰面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，标准曲线方程Y＝146481X＋35053，r＝0.9999（n＝6）。结果表明，青藤碱在0.31584～1.89504ug呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液（0.15792mg·mL－1），按2.2.1项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积，RSD＝0.75%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验： 取同一份样品，按2.2.3项下方法制成供试品溶液，分别于0、1、2、3、4、5、6h进样，测定峰面积，RSD＝0.64%。表明供试品溶液在6h内较稳定。

2.2.7 重复性试验： 取同一批样品6份，分别按2.2.3项下方法制成供试品溶液，测定青藤碱含量，平均含量为1.68mg／粒，RSD＝1.22%，说明重复性良好。

2.2.8 回收率试验：取已知青藤碱含量的同一批号的样品0.2g，精密称定，平行6份，分别精密加入青藤碱对照品溶液（0.5264mg·mL－1）2mL，再按2.2.3项下方法制成供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.2.9 样品含量测定：分别取三批样品，按上述方法制备供试品溶液，测定，青藤碱含量分别为1.65 mg／粒、1.57mg／粒、1.72mg／粒。

3 讨 论 3.1 青风藤是处方中的君药 而青藤碱是青风藤的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、镇痛、抗心律失常、降血压等药理作用［9］，为本制剂的主要有效成分之一，因此对青藤碱进行定量分析，可更好地控制本品的质量。

3.2 在对青风藤中的青藤碱进行含量测定时，曾对提取溶媒、提取时间、提取方法都进行了考察，结果以70%的乙醇超声提取30min为佳。

3.3 本试验所建立的青风藤等药材的薄层鉴别方法具有专属性，阴性无干扰；反相高效液相色谱法定量青藤碱的方法准确可靠、专属性强、重复性良好，可有效地用于青白通痹胶囊的质量分析与控制。

［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2010：82－85.

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